Estudos de genética em leveduras podem ser empregadas para investigar as funções de celular e molecular dos genes humanos no metabolismo do DNA celular. Métodos são descritos para a caracterização genética do ser humano WRN Produto do gene defeituoso na desordem envelhecimento precoce na síndrome de Werner funcionalmente as vias conservadas usando leveduras como um sistema modelo tratável.
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Artigo de método
Estudos genéticos de proteínas de reparo do DNA Humano Utilizando Levedura como um sistema modelo
Neste artigo
Resumo
Resumo
Compreender o papel das proteínas de reparo de DNA humano em vias de genética é um grande desafio para muitos pesquisadores. Estudos genéticos em sistemas de mamíferos têm sido limitados devido à falta de ferramentas disponíveis, incluindo linhas de células mutantes definido genético, sistemas de expressão regulamentar, e apropriado marcadores selecionáveis. Para contornar essas dificuldades, os sistemas de modelo genético em eucariotos inferiores tornaram-se uma opção atraente para o estudo de proteínas funcionalmente DNA conservado reparação e caminhos. Nós desenvolvemos um sistema de levedura modelo para estudar as funções mal definidas genética da síndrome de Werner helicase-nuclease (
Protocolo
1. As cepas de levedura
Cepas com tipo selvagem SGS1 TOP3 (WT; W303-1A, genótipo, MAT uma ade2-1 canl-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 TRPL-l ura3-1) [2], um mutante sgs1 (W1292-3C ; MAT genótipo uma SUP4-o:: URA3 sgs1-25 ade2-1 CAN1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trp1-1 ura3-1 rAd5-535) e um sgs1 Top3 mutante (W1058-11C, genótipo, MAT um SUP4-o:: URA3 sgs1-25 Top3-2:: HIS3 ade2-1 CAN1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trp1-1 ura3-1 rAd5-535) foram caracterizados [3] e foram gentilmente cedidas pelo Dr. Rodney R....
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Discussão
Um dos pontos fortes da utilização de leveduras como um sistema modelo é a disponibilidade de mutantes na replicação do DNA definido e vias de reparação que são conservados entre leveduras e humanos. Uma outra seleção de transformantes abrigar os genes específicos é fácil e confiável como as cepas de laboratório são mutantes auxotróficos e vetores com marcadores auxotróficos estão prontamente disponíveis. Usando esses vetores a expressão de produtos de genes pode ser regulada, colocando-os sob o controle de um promotor .......
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Agradecimentos
Este trabalho foi financiado integralmente pelo programa de Pesquisa Intramural do, NIH National Institute on Aging. Agradecemos ao Dr. Rodney Rothstein (Columbia University) para as cepas de leveduras e Brad Dr. Johnson (University of Pennsylvania School of Medicine, na Filadélfia, Pensilvânia) para a expressão SGS1 plasmídeo.
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Referências
- Aggarwal, M., Brosh, R. M. Jr WRN helicase defective in the premature aging disorder Werner Syndrome genetically interacts with Topoisomerase 3 and restores the top3 slow growth phenotype of sgs1 top3. Aging. 1, 219-233 (2009).
- Gangloff, S., McDonald, J. P., Bendixen, C., Arthur, L., Rothstein, R.
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Reimpressões e permissões
