Indien bläck inflation: En färgning metod för att visualisera tumör härdarna

Overview

Denna video beskriver indien bläck inflation--en färgning metod--att kvantifiera tumör härdarna i tumör-bärande mus lungor. Efter färgning fixeras lungorna i Feketes lösning för att observera tumör härdarna i lungorna.

Protocol

1. Validering av lungmetastaser med indienfärginflation av tumörbärande lungor

OBS: För att validera luciferas levande tumör imaging resultat, utföra Indien bläck inflation av tumör-bärande mus lungor att kvantifiera tumör härdarna. 4T1-celler metastaserar också med andra organ ochvävnader( figur 1 ) och därför bör histologisk undersökning av dessa organ för validering av tumörmetastas utföras vid behov. Detta protokoll använder lungmetastas som exempel.

1. Håll möss i sin befintliga hembur för dödshjälp. När de är inhysta med andra djur, flytta dessa möss som inte avlivas till en annan bur.
2. Ta bort burfiltertoppen och ersätt med CO2-filtertoppen. Slå på den komprimerade CO2-gasflaskan (100 %) som är ansluten till CO2-filtertoppen. Ställ in flödeshastigheten på 2 L/min och håll CO2 på i minst 10 min. Om mössen fortfarande andas i slutet av 10 min, låt CO2 vara på tills minst 1 min efter att mössen slutat andas. Stäng av CO2-cylinderkontrollen och flödesmätaren. Vänta i 3 minuter till och ta bort filtertoppen.
3. Placera den uppoffrade musen på ryggen på en polystyrenbräda. Fäst benen för att säkerställa fri tillgång till luftstrupen. Spraya mössen med 70% etanol.
4. Med hjälp av en sax, skär längs mitten av mitten av musens mitt buk genom bröstkorgen och upp mot salivkörtlarna. Observera luftstrupen. Använd tång för att avlägsna vävnader som omger luftstrupen för att exponera luftstrupen.
5. Trä en pipettspets under luftstrupen. Håll spetsen med en hand, lyft försiktigt luftstrupen upp och bort från kroppen.
6. Rotera plattformen som håller musen 180°. Använd en 1/2 CC 27 G 1/2 tuberkulinspruta för att injicera India Ink (10% Indien bläck och 0,1% Ammoniumhydroxid) i lungorna via luftstrupen. Blås upp lungorna helt med bläck tills ett starkt motstånd känns.
7. Använd en sax för att skära luftstrupen. Använd tång för att hålla musen och sätt in en annan uppsättning tång under lungorna och dra lungloberna ur musen. Skölj lungorna en kort stund i en bägare som innehåller vatten.
8. I en kemisk rökhuv, överför lungorna till en glasscintillationsflaska som innehåller 3 ml Feketes lösning (50% etanol, 6% formaldehyd och 3% glacial ättiksyra). Kapsla injektionsflaskan för att förhindra att lösningen avdunstar.
   OBS: Vävnaderna kan förvaras i Feketes lösning på obestämd tid.
9. Efter några minuter, observera tumör härdarna som vita prickar på de svarta lungorna (Figur 1). Den vita tumör nodule är synlig av ögon. Överför lungorna till en skål i en rökhuv och räkna antalet vita fläckar. Varje vit fläck representerar en enda metastaserad tumör nodule.

Representative Results

Figur 1. Visualisering av lungtumör härdarna av Indien bläck inflation. Lungan på den tumörbärande musen var uppblåst med Indien bläck och fast i Feketes lösning. De vita prickarna är lungmetastaser.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
9 mm AutoClip Applier	Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD	427630
Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Fisher	8940
Dissecting Fine-Pointed Forceps	Fisher	8875
70% Ethanol	Ultrapure-usa.com
1/2 CC 27 G 1/2 tuberculin syringe	Becton Dickinson and Co. NJ	305620