La detección de mutantes con defectos fenotípicos es un método sencillo para identificar los genes que funcionan en un determinado proceso biológico. En este artículo se describe cómo los gusanos que viven la cultura libre (por ejemplo, Pristionchus pacificus) En el laboratorio y mostrar dos métodos diferentes de mutagénesis, EMS y TMP / UV.
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Artículo de método
Introducción al Laboratorio de Worm: El cultivo de gusanos de Mutagénesis
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En este artículo
Resumen
Resumen
Este protocolo describe los procedimientos para mantener los nematodos en el laboratorio y la forma de mutagenizar utilizando dos métodos alternativos: etil metano sulfonato (EMS) y 4 ", 5, 8 trimetilpsoraleno-combinada con la luz ultravioleta (TMP / UV). Los nematodos son potentes sistemas biológicos para estudios de genética, debido a su plan de cuerpo simple y el sistema de apareamiento, que se compone de auto-fertilización de los hermafroditas y los hombres que pueden generar cientos de progenie por animal. Los nematodos son mantenidos en placas de agar que contiene un césped de bacterias y se pueden transferir fácilmente a partir de un plato a otro con un pico. EMS es un agente alquilante comúnmente utilizadas para inducir mutaciones puntuales y deleciones pequeñas, mientras que TMP / UV induce principalmente supresiones. Dependiendo de las especies de nematodos que se utiliza, las concentraciones de EMS y TMP tendrá que ser optimizada. Para aislar las mutaciones recesivas del nematodo Pristionchus pacificus, los animales de la generación F2 fueron examinados visualmente para fenotipos. Para ilustrar estos métodos, mutagénesis gusanos y buscó falta de coordinación (UNC), Cochambrosa (dpy) y transformador (TRA) mutantes.
Protocolo
Parte 1: Preparación de medios de cultivo de nematodos (NGM) placas de Petri
Nematodos experimentales, como C. elegans y P. pacificus se suelen cultivar en el laboratorio de 6 cm placas de Petri que contenían medio de nematodos Crecimiento (NGM) 1. Los gusanos se mantienen a 20 ° C, pero se pueden incubar en un rango de temperaturas (entre 4 ° C - 25 ° C), dependiendo de las especies de nematodos y el diseño experimental. Para preparar platos con NGM, las técnicas estériles tienen que ser utilizados para prevenir la contaminación por hongos y bacterias. A continuación se presenta el protocolo para preparar plato....
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Discusión
Mutagénesis es una técnica ampliamente utilizada para los estudios genéticos en varios organismos modelo experimental. Experimentos de mutagénesis se utilizan a menudo para identificar la función de un gen 2. Los procedimientos de mutagénesis descritos aquí pueden ser utilizados no sólo para P. pacificus, sino también para C. elegans y otras especies de nematodos relacionados. Aquí se describen dos métodos, EMS y mutagénesis TMP / UV.
EMS es una sustancia química.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este trabajo ha sido financiado por la NSF subvención IOB # 0615996.
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Referencias
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Reimpresiones y permisos
