هذا الأسلوب يصف جيل من الثقافات مخيخي عضوي النمط وتأثير المحفزات أفكارك معينة على جدوى مختلف أنواع الخلايا مخيخي.
وقدم لأول مرة الثقافات عضوي النمط من الأنسجة العصبية التي هوغ 1،2 في عام 1947 وشكلت اختراقا كبيرا في مجال علم الأعصاب. منذ ذلك الحين ، تم تطوير تقنية أخرى ، وحاليا هناك العديد من الطرق المختلفة لإعداد عضوي النمط الثقافات. قدم هنا كان الأسلوب مقتبس من واحد التي وصفها Stoppini آخرون لإعداد الشرائح وآخرون من Gogolla. الإجراء تلطيخ 3،4.
ومن المزايا الفريدة لهذا الأسلوب هو أنه يتيح لك لدراسة أجزاء مختلفة من الدماغ مثل الحصين أو المخيخ في هيكلها الأصلي ، مما يوفر ميزة كبيرة على الثقافات التي نأت تتعطل كل شبكات الخلوي وتنظيم الخلايا العصبية. في حالة من المخيخ هو أكثر فائدة لأنها تتيح دراسة خلايا بركينيي ، من الصعب للغاية الحصول على والثقافة الأولية فصلها. ويمكن استخدام هذا الأسلوب لدراسة ميزات تنموية معينة من المخيخ في المختبر ، فضلا عن التجارب الدوائية والكهربية في كل نوع البرية وفئرانا معدلة وراثيا.
وصف الأسلوب هنا تم تصميمه لدراسة تأثير المنبهات مثل أفكارك يجند فاس في المخيخ النامية ، وذلك باستخدام تلوين النفق لقياس أفكارك موت الخلية. إذا تم الجمع بين النفق تلطيخ مع نوع من الخلايا علامات محددة ، مثل Calbindin للخلايا بركينيي ، فمن الممكن لتقييم موت الخلايا في خلية بطريقة معينة من السكان. لتلطيخ Calbindin يخدم أيضا غرض تقييم نوعية الثقافات مخيخي.
يصف هذا الأسلوب واحد من التطبيقات الممكنة العديد من الثقافات عضوي النمط العصبية وانه سمح لنا لدراسة تأثير المنبهات أفكارك في نوع البرية وشرائح مخيخي متحولة.
أهم جزء من هذه التجربة هو أن تكون قادرة على توليد باستمرار صحية الثقافات شريحة مخيخي. العوامل الرئيسية هي تشريح وتقطيع والتقنية والقدرة على تنفيذ البروتوكول في أقل وقت ممكن ، ولكن في نفس الوقت الحرص على عدم الاضرار الشرائح. عامل آخر بالغ الأهمية يتمثل في إعداد وتكوين وسائل الإعلام والثقافة ، وهذه الثقافات هي حساسة للغاية ، لذلك اضطررنا لاختبار عدة وصفات والعلامات التجارية من وسائل الإعلام. حتى يمكن دفعات مختلفة من المصل أو أي مكونات أخرى من وسائل الاعلام تؤثر على صلاحية الشرائح. حصلنا على أفضل النتائج مع المصل من الخيل لوط Invitrogen # 480116.
حالما يتم إنشاء شرائح مخيخي يمكن للمرء أن دراسة تطوير مخيخي ، الكهربية ، وبقاء الخلية وحدها أو استجابة لمنبهات أفكارك ، أو الحرمان excitotoxicity الأوكسجين. وقد تم إجراء دراسات مقارنة باستخدام نوع البرية وشرائح مخيخي متحولة الثاقبة للغاية في كثير من جوانب وظيفة المخيخ والتنمية.
The authors have nothing to disclose.
وقد تم تمويل هذه الدراسة جزئيا من قبل مؤسسة IPSEN. IMV هي جمعية السرطان الاميركية أستاذ البيولوجيا الجزيئية ، ويحمل الرئيس جاكوبس اروين وجوان في علوم الحياة المثالية. وأيد هذا العمل في جزء من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة ، ومؤسسة Leducq ، ومؤسسة Meriaux ، اليسون مؤسسة طبية ، Ipsen / Biomeasure ، سانوفي أفنتيس ، مؤسسة سرطان البروستاتا ، وHN وجيم فرانسيس مؤسسة بيرغر. وتمول من قبل PAS ماكنايت صندوق الهبات لعلم الأعصاب والمعهد الوطني لتعاطي المخدرات (R01 DA019022). فإن الكتاب أود أن أشكر مارك شميت. وقد تم تصميم فن الجرافيك بواسطة جيمي T. سيمون. ويعود الفضل في الرعاية من قبل Invitrogen.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
MEM | Invitrogen | 11090 | ||
Horse Serum | Invitrogen | 16050 | ||
Hepes | Invitrogen | 15630 | ||
Glutamine | Invitrogen | 25030 | ||
Penicillin/ Streptomycin | Invitrogen | 15140 | ||
Superglue | Krazy Glue | |||
6 well / 24 well cell culture plates | Corning Incorporated | 3506/ 3527 | ||
30mm culture plate inserts (0.4-μm pore) | Millipore | PICM03050 | ||
Purified NA/LE Hamster anti-mouse CD95 (Jo2) | BD Pharmingen | 554254 | ||
In situ cell death detection kit, TMR red | Roche | 12 156 792 910 | ||
Rabbit anti-Calbindin D-28k antibody | Swant | CB-38a | ||
Alexa 488-goat anti-rabbit IgG secondary antibody | Invitrogen (Molecular probes) | A-11008 | ||
Vectashield Mounting Medium with DAPI | Vector labs | H-1200 | ||
Dissecting Microscope | Zeiss Stemi SV 11 | |||
Vibratome | Leica | |||
Confocal Microscope | Leica TCS SP2 AOBS |