Analyse quantitative des métastases du cancer en utilisant un modèle d'embryon aviaire

Résumé

En utilisant la PCR quantitative, nous montrons comment le bien-établie chiches CAM modèle peut être utilisé pour analyser quantitativement la métastase des cellules tumorales humaines à des organes éloignés.

Résumé

Pendant la métastase des cellules cancéreuses de diffuser de la tumeur primaire, envahissent les tissus environnants, et se propage à des organes éloignés. Métastase est un processus complexe qui peut impliquer de nombreux types de tissus, des périodes de durée de temps variable, et se produisent souvent dans les organes profonds, il est difficile d'enquêter et de quantifier. En outre, l'efficacité du processus métastatique est influencé par de multiples étapes de la cascade métastatique qui rend difficile d'évaluer la contribution d'un seul aspect du comportement des cellules tumorales. En conséquence, les essais métastases sont fréquemment effectuées sur des animaux pour fournir un contexte forcément réaliste dans lequel l'étude des métastases. Malheureusement, ces modèles sont encore compliquées par leur physiologie complexe. L'embryon de poulet est un unique modèle in vivo qui permet de surmonter de nombreuses limites à l'étude de la métastase, en raison de l'accessibilité de la membrane chorio (CAM), un bien vascularisé extra-embryonnaires tissus situés au-dessous de la coquille qui est réceptif à la xénogreffe de cellules tumorales (figure 1). En outre, depuis l'embryon de poulet est naturellement immunodéficientes, le CAM soutient aisément la prise de greffe de tissus normaux et tumoraux. Surtout, le CAM aviaire soutient avec succès la plupart des caractéristiques des cellules du cancer, y compris la croissance, l'invasion, l'angiogenèse et de remodelage du microenvironnement. Cela rend le modèle particulièrement utile pour l'enquête sur les voies qui mènent à la métastase du cancer et de prédire la réponse d'un cancer métastatique de nouveaux agents thérapeutiques potentiels. La détection de cellules disséminées par les espèces-PCR spécifique Alu permet d'évaluer quantitativement les métastases dans des organes qui sont colonisés par aussi peu que 25 cellules. Utilisation de la ligne homme carcinome épidermoïde cellule (HEp3), nous utilisons ce modèle pour analyser la métastase spontanée des cellules cancéreuses à des organes éloignés, y compris le foie de poulet et du poumon. Par ailleurs, en utilisant le protocole Alu-PCR, nous démontrons la sensibilité et la reproductibilité de l'essai comme un outil pour analyser et quantifier intravasation, l'arrestation, l'extravasation, et la colonisation comme des éléments individuels de la métastase.

Protocole

1. Préparer les oeufs pour xénogreffe (métastase spontanée)

1. Fraîchement pondus des oeufs de poule fertilisés sont incubés dans un incubateur à tourner pendant 10 jours à 100 ° F et 60% d'humidité. Les oeufs sont tournés quatre fois par heure.
2. Le jour de développement 10 les oeufs sont placés sur le côté dans un rack d'oeuf. Une source de lumière en col de cygne de la lampe ou autre matériau approprié est utilisé pour les oeufs bougie en faisant la lumière dans la coquille de l'oeuf à l'extrémité émoussée de l'œuf où les sacs aériens se trouve.
3. La veine chorio est localisé et marqué. Cette veine est située au sommet de la coquille où il ....

Discussion

Le CAM poussin a été utilisé pendant des décennies comme un système modèle pour étudier divers aspects de la biologie du cancer et la progression métastatique. Principe de l'évaluation des capacités métastatiques ont été réalisées dans ce modèle par une variété de groupes, y compris l'analyse de la dormance (Aguirre Ghiso et al, 1999;. Ossowski et Reich, 1983), le remodelage tissulaire (Deryugina et al, 2005;. Hahn-Dantona . et al, 1999), et les métastases (Zijlstra et al, 200.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Société	Numéro de catalogue	Commentaires (optionnel)
1X Eagle modifié par Dulbecco (DMEM)	Invitrogen	11995073
Dulbecco tampon phosphate salin (PBS-D) (1X), liquide	Invitrogen	14190250	pH 7,4
La trypsine, 0,05% (1X) avec de l'EDTA 4NA, liquide	Invitrogen	25300054
Sportsman Hatcher	Berry Hill	1550HA	Ces incubateurs sont parmi les plus facilement disponibles. Toutefois, la vidéo montre différents équipements.
Sportsman incubateur	Berry Hill	1502EA
Outil rotatif Dremel	Dremel
Roues de coupure Dremel pas. 36	Dremel	409
Portable Aide pipette	Fisher	1368115E
Coton-tige applicateurs	Fisher	23-400-001)
Œufs fécondés	Divers		Beaucoup de fournisseurs différents peuvent être utilisés. Les œufs doivent être d'environ 35 à 55 grammes. Les poules qui établit entre eux doit être comprise entre 36 et 55 semaines d'âge.
Hématimètre	Hausser scientifique, VWR	15170-090
Illuminateur de microscope à fibre optique	Amscope	HL250-AY	150W
Aiguille de calibre 25
SYBR Green Extract-N-Amp PCR Kit Tissu	Sigma-Aldrich	XNATRG