Medición de la presión del ventrículo izquierdo (VI) en embriones de ratones y neonatal se describe. La presión se mide mediante la inserción de una aguja conectada a un transductor lleno de líquido en el ventrículo izquierdo bajo la guía del ultrasonido. Se debe tener cuidado para mantener la función cardiaca normal durante el protocolo experimental.
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Artículo de método
Medición de la presión del ventrículo izquierdo a finales de embriones de ratones y Neonatal
En este artículo
Resumen
Resumen
La presión arterial aumenta de forma significativa durante el desarrollo embrionario y postnatal en animales vertebrados. En el ratón, el flujo sanguíneo es detectable primero alrededor del día embrionario (E) 8,5 1. Sistólica del ventrículo izquierdo (VI) la presión es de 2 mmHg en E9.5 y E14.5 11 mmHg en dos. En estas etapas mediados de los embriones, el VI es claramente visible a través de la pared torácica para la medición de presión invasiva, porque las costillas y la piel no están completamente desarrollados. Entre E14.5 y el parto (aproximadamente E21) los métodos de imagen debe ser usado para ver el VI. Después del nacimiento, la media de aumento de la presión arterial de 30 a 70 mmHg desde el primer día postnatal (P) 2 - 35 3. Más allá de P20, la presión arterial se puede medir con catéteres de estado sólido (es decir, Millar o Scisense). Antes de P20, estos catéteres son demasiado grandes para el desarrollo de las arterias de ratones y la presión arterial debe ser medida con la costumbre sacó catéteres de plástico unidos a transductores de presión llenas de líquido o de vidrio 3 micropipetas attardía en deseos de servo transductores de presión nula 4.
Nuestro trabajo reciente ha demostrado que el mayor aumento de la presión arterial se produce durante los fines de embriones con el período postnatal temprano en ratones de 5-7. Este gran aumento de la presión arterial puede influir en las células musculares lisas (SMC) fenotipo en las arterias en desarrollo y desencadenar eventos importantes mecanotransducción. En la enfermedad humana, donde las propiedades mecánicas de las arterias en desarrollo se ven comprometidos por defectos en las proteínas de la matriz extracelular (Síndrome de esto es de Marfan 8 y estenosis aórtica supravalvular 9) los rápidos cambios en la presión arterial durante este período puede contribuir a fenotipo de la enfermedad y la gravedad a través de alteraciones en mecanotransducción señales. Por lo tanto, es importante ser capaz de medir los cambios de presión sanguínea durante embrionario finales y los períodos neonatales en modelos de ratón de la enfermedad humana.
Se describe un método para medir la presión del VI a finales deembrionario (E18) y postnatal (P1 - 20) ratones. Una aguja conectada a un transductor de presión llena de líquido se introduce en el ventrículo izquierdo bajo guía ecográfica. Hay que tener cuidado para mantener la función cardiaca normal durante el protocolo experimental, sobre todo para los embriones de ratones. Los datos representativos se presentan y las limitaciones del protocolo se discuten.
Protocolo
1. La ecografía y la presión del sistema
- Inicie el sistema de ultrasonido de acuerdo a las instrucciones del fabricante (Vevo 770, Visualsonics). Llene la sonda apropiada (años de edad E18 - P7 = modelo 708, edad> = P7 modelo 707B) con agua destilada y conectar con el sistema de ultrasonido. Coloque la sonda en el soporte ajustable a la orientación aproximada necesaria para obtener un LV en el eje largo de un ratón montado en la plataforma de imágenes para que el ápex del VI es apuntada hacia el brazo de la inyección.
- El sistema de presión consiste en un transductor de presión llena de líquido, un amplificador de puente, el sistema de adquisición....
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Discusión
El protocolo presentado aquí proporciona un método para medir la presión del VI en embrionario finales y principios de los ratones recién nacidos. La principal limitación de este protocolo es la resolución temporal del sistema de presión. La señal de presión se amortigua a medida que viaja desde el ventrículo izquierdo a través de la aguja al transductor, y sólo los valores medios de presión se puede grabar. La amortiguación puede minimizarse mediante el uso de la aguja más grande posible, pero la aguja debe encajar den.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado, en parte, por las subvenciones del NIH HL087653 y HL105314. Algunos de los métodos se han desarrollado en el laboratorio del Dr. Robert Mecham en la Escuela de Medicina de la Universidad de Washington.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo / equipo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| De alta resolución del sistema de ultrasonido | Visualsonics | Vevo 770 | U otro sistema de ultrasonido apropiado |
| Alta frecuencia de ultrasonido sondas | Visualsonics | 708 y 707B | |
| Imagen de plataforma y el brazo de la inyección | Visualsonics | Imagen Station 2 | Con el ECG y control de la temperatura de la plataforma de información |
| Transductor de presión | AD Instruments | MLT 844 | |
| Puente del amplificador | AD Instruments | ML221 | |
| Sistema de adquisición de datos | AD Instruments | ML866 | |
| Los datos del software de grabación | AD Instruments | LabChart | |
| Anillo de pie y sujetar | Varios proveedores | Para mantener transductor de presión durante las mediciones | |
| Llaves de paso de 3 vías con conexión Luer lock macho | Cole Parmer | 30600-02 | |
| 1/16 "tubo Tygon de Identificación | Cole Parmer | 06408 | |
| Luers masculinos y femeninos w / 1/16 "lengüeta de la manguera | Cole Parmer | 45510-50 45510-00 | |
| 24 "tubos de macho y hembra Luer en cada extremo | Cole Parmer | 30600-60 | |
| 3 y 10 ml jeringas | BD Biosciences | ||
| 30 y 25G agujas | BD Biosciences | 1,5 pulgadas de longitud | |
| Big Ben manómetro | Riester | 1456-100 | |
| Salina | Varios proveedores | ||
| La heparina | Varios proveedores | ||
| Ultrasonido de gel | Parker | Aquasonic 100 | |
| Lociones para el cabello removedor | Nair |
Referencias
- Ji, R. P. Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper. Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).
- Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S.
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Reimpresiones y permisos
