DROSOPHILA MELANOGASTER является генетически и поведенчески послушный модели системы, которая была использована, чтобы понять молекулярные и клеточные основы многих важнейших биологических процессов на протяжении более века 1. Дрозофилы было хорошо использовали, чтобы получить понимание генетической основы лету поведения.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Методы Анализ Drosophila Поведение
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
DROSOPHILA MELANOGASTER, дрозофилы, была использована для изучения молекулярных механизмов широкого спектра заболеваний человека, таких как рак, сердечно-сосудистых заболеваний и различных неврологических заболеваний 1. Мы оптимизировали простой и надежной поведенческие тесты для определения личиночных передвижения, взрослым возможность восхождения (RING анализа), и ухаживания поведения дрозофилы. Эти поведенческие тесты широко применяются для изучения роли генетических и средовых факторов на лету поведение. Личинок возможность сканирования могут быть надежно использованы для определения ранней стадии изменения в обход способности личинок дрозофилы, а также для изучения влияния лекарств или генов человека заболевания (у трансгенных мух) на их передвижение. Личиночной анализ сканирования становится все более применима, если выражение или отмены ген вызывает летальность в куколки или взрослой стадии, так как эти мухи не доживают до взрослого, где они в противном случае могут быть оценены. Это основнойssay также может быть использован в сочетании с ярким светом или стресс изучить дополнительные поведенческие реакции у личинок дрозофилы. Ухаживание поведение широко используется для исследования генетических основ сексуального поведения, а также может быть использована для изучения деятельности и координации, а также обучения и памяти. Drosophila брачного поведения включает в себя обмен различных сенсорных стимулов, включая визуальные, слуховые и хемосенсорной сигналы между мужчинами и женщинами, которые приводят к сложной серии хорошо характеризует поведение двигателя кульминацией успешного спаривания. Традиционное восхождение взрослых анализы (отрицательный geotaxis) являются утомительным, трудоемким и занимает много времени, со значительным изменением различных испытаний 2-4. Быстрый итеративный отрицательный geotaxis (RING) анализ 5 имеет множество преимуществ перед более широко используются протоколы, обеспечивающие воспроизводимое, чувствительный, и высокая пропускная способность подхода к количественному опорно-двигательного взрослых и отрицательные geotaxis бehaviors. В кольце анализа, несколько генотипов или медикаментозного лечения может быть проверена одновременно с использованием большого количества животных, с высокой пропускной способностью подход делает его более сговорчивым для скрининга экспериментов.
Протокол
А. Анализ личинок Crawling
1. Личинки коллекции
- Установка 8 унций бутылку мух (10-15 мужчин + 10-15 женщин).
- Давайте мухи откладывают яйца в течение 24 часов, затем снимите бутылку мух. (Передача взрослых в новую бутылку и повторять по мере необходимости).
- Инкубируйте бутылку в течение 3-4 дней, или до третьего возраста личинки видны.
- Добавить 50 - 100 мл 20% сахарозы в бутылку с личинками и оставьте на 20 минут. Личинки всплывают наверх.
- Сбор личинок помощью 25 мл пипетки серологические кончиком отрезаны, и место в сетку корзины.
- Вымойте личинок в сетку корзины в два раза деионизи....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Drosophila поведение жестко регулируется генетическими и экологическими факторами. Мы и другие, которые ранее использовались тесты, описанные здесь, чтобы собрать данные для изучения генов, связанных с поведением летать и нейродегенеративных заболеваний человека моделируется в Drosophila 5-19. Для обхода анализа, тщательного отбора из 3-го возраста личинки очень важный шаг. Если лечение с наркотиками, это займет 10-15 минут (или больше в зависимости от типа и характера наркотиками.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нам нечего раскрывать.
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить Astha Maltare для создания личиночной данных сканирования. Мы хотели бы поблагодарить д-ра Николая Lanson младшего за то, что его замечания по рукописи. Эта работа была поддержана Роберт Packard Центр ALS Джона Хопкинса (в ОБП) и бокового амиотрофического склероза ассоциации (ОБП) и R01MH083689 из Национального института психического здоровья (CDN).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер по каталогу | |
| Сахароза | Fisher Scientific | S5-500 | |
| Агароза | Invitrogen | 16500-500 | |
| 6 унций Drosophila бутылки | Genesee Научные | 32-130 | |
| Paint Brush (# 1) | Тед Пелла, Inc | 11859 | |
| Лети пищевых компонентов | |||
| Кукурузной муки | Fisher Scientific | NC9109741 | |
| Агар | Genesee Научные | 66-104 | |
| Меласса | Fisher Scientific | NC9349176 | |
| Пропионовая кислота | Acros | 14930-0010 | |
| Tegosept | Вершина | 20-258 | |
| Этанол | РыбакНаучный | BP2818-4 | |
| Дрожжи | Genesee Научные | 62-107 |
Ссылки
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).
- Feany, M. B., Bender, W. W. A Drosophila model of Parkinson's disease. Nature Mar.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
