Den intraluminala mellersta cerebral ocklusion modell i möss häri presenteras. Omfattningen av cerebral infarkt utvärderas genom en neurologisk poäng och kresylviolett färgning, ett alternativ till färgning TTC, erbjuder den stora fördelen att testa parallellt många intresse markörer.
Stroke är den tredje orsaken till dödlighet och den ledande orsaken till handikapp i världen. Ischemisk stroke står för ungefär 80% av alla slag. Emellertid är den trombolytiska vävnadsplasminogenaktivator (tPA) den enda behandlingen av akut ischemisk stroke som existerar. Detta ledde forskarna att utveckla flera ischemisk stroke modeller i olika arter. Två huvudtyper av gnagarmodeller har utvecklats: modeller av global cerebral ischemi eller fokal cerebral ischemi. För att efterlikna ischemisk stroke hos patienter, hos vilka cirka 80% trombotiska eller emboliska slag förekommer inom den mellersta cerebral artär (MCA), den intraluminala mellersta cerebral artärocklusion (MCAO) modell är ganska relevant för stroke studier. Denna modell utvecklades först hos råttor med Koizumi et al. Under 1986 1. På grund av hur lätt genmanipulation i möss, har dessa modeller också utvecklats i denna art 2-3.
innehåll "> Häri presenterar vi den övergående MCA ocklusion förfarande C57/BL6 möss. Tidigare studier har rapporterat att fysiska egenskaper tillslutningen som spets diameter, längd, form och flexibilitet är avgörande för reproducerbarhet infarktvolymen 4. Häri har en kommersiell Silikonbehandlad monofilament (Doccol Corporation) har använts. annan stor fördel är att detta monofilament minskar risken för att inducera subaraknoidal blödningar. Med Zeiss stereomikroskop Stemi 2000 var Silikonbehandlad monofilamentgarn införs i den inre halspulsådern (ICA) via ett snitt i den externa halsartären (ECA) tills monofilamentet täpper till botten av MCA. Blodflödet återställdes 1 timme senare genom avlägsnande av monofilamentet att efterlikna återställandet av blodflödet efter lys av en tromboembolisk koagel i människor. Omfattningen av cerebral infarkt kan utvärderas först av en neurologisk poäng och genom mätning av infarktvolymen.Ischemisk möss därmed analyserades för deras neurologiska score vid olika post-reperfusion gånger. För att utvärdera infarktvolymen, färgning med 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid (TTC) var oftast utförs. Häri använde vi kresylviolett färgning eftersom det ger möjlighet att testa många kritiska markörer genom immunohistokemi. I den här videon, rapporterar vi det MCAO förfarandet, neurologiska poäng och utvärdering av infarktvolymen genom kresylviolett färgning.Olika stroke modeller har utvecklats för att efterlikna stroke konsekvenser hos patienter. Valet av stroke modell beror på den biologiska frågan. Den intraluminala MCAO-modellen härmar en av de vanligaste typerna av ischemisk stroke hos patienter och är mindre invasiv och mer konsekvent än Tamura modell 4,7. Det är en riktigt intressant modell för neuroprotektion, neurorepair och celldöd analyser. Framgången för den intraluminala modellen beror på många faktorer såsom djur kön, ålder och vikt, temperatur, anestesi och tiden för operationen, som måste kontrolleras. De fysiska proprieties av tillslutningen (tips diameter, längd, form och fexibilitet) är avgörande för samstämmigheten i MCAO 4. Häri använder vi 12 mm långa 6-0 monofilament belagd med silikon på 9-10 mm från Doccol Corporation. Den stora fördelen med denna monofilament är att minska subaraknoidal blödningar och eftersom dess längd omfattade alla ICAlängd, kvarvarande blodflöde, som kommer från de främre och bakre kommunicerande artärerna i Circle of Willis och PPA, förhindras och variationen i de infarktvolym minskar (15% av variationen i våra händer) 8. Suturen CCA minskar även variationen av infarktvolymen 9.
Omfattningen av hjärnskada efter tMCAO kan bedömas genom olika sätt. Neurologiska brister kan mätas såsom tidigare nämnts. Det är emellertid svårt att få en effektiv åtgärd av detta sätt. Omfattningen av infarkt vanligen utförs av TTC färgning. På senare tid har magnetisk resonans tekniker också användas, en särskilt intressant teknik för neuroskyddande behandlingar. För att förstå de underliggande cellulära mekanismer som är involverade vid stroke som neurorepair, celldöd eller cellproliferation, är studiet av olika markörer genom immunhistokemi kritisk och mycket informativt. Sålunda, vår protokollol preparat hjärnan avsnitt har den stora fördelen att dessa analyser och minimerar antalet använda möss. Dessutom Tureyen et al. 10 har rapporterat att det finns god korrelation mellan kresylviolett färgning och TTC.
The authors have nothing to disclose.
Denna studie stöddes av en CIHR TEAM bidrag # CTP 82.946, en CIHR bidrag # MOP 102.741, samt en Canada stol # 216684 och en Strauss Foundation. ER stöddes av ett stipendium från den kanadensiska Heart & Stroke Foundation.
Description | Company | Catalogue number |
Stereo microscope | Zeiss | Stemi 2000 |
Fiber-Light High Intensity Illuminator | Dolan-Jenner Industries Inc. | |
Anesthesia system for isoflurane | ||
Isoflurane | CDMV | 108737 |
Heating blanket | Gaymar Medsearch | TP22G |
Infrared heating lamp | ||
Ultra fine tweezers, style 5 | Electron Microscopy Sciences | 78320-5TI |
Vannas Scissors 3 mm Cutting Edge, Straight | Electron Microscopy Sciences | 72932-01 |
Style LA-1 and MPF-1 All smooth blades | Electron Microscopy Sciences | 77926-5S |
Negative action tweezers, style KOPINC 5 | Electron Microscopy Sciences | 72850-F |
Dissecting scissors 5 1/2″ Straight | Cedarlane | 72960 |
Autoclip starter set | Harvard apparatus | 34-0557 |
BD Autoclip Wound Closing Syst., 9mm long,100/pk | Fisher | 01-804-5 |
5-0 suture | Harvard apparatus | 517763 |
Suture material PDS II monofilament violet, 5-0, RB-1; Z303H | CDMV | 6167 |
12 mm-long 6-0 silicon-coated monofilament suture | Doccol Corporation | 60SPRePK5 |
Seringes 1ml | Fisher | 14-823-2F |
Needles 26G1/2 | Fisher | BD-305111 |
C57BL/6 mice | IRCM |