Summary
I patogenesen af knoglemetastasis er angiogenese en vigtig proces, og derfor repræsenterer et mål for billeddannelse og behandling. Her præsenterer vi en rotte model af site-specifikke brystkræft knoglemetastaser og beskrive strategier til ikke-invasivt billede angiogenese
Abstract
Angiogenese er et væsentligt element af kræft vækst og metastasering dannelse. I knoglemetastasis er angiogene faktorer afgørende for tumorcelleproliferation i knoglemarven hulrummet samt for interaktion af tumorceller og knogleceller resulterer i lokal knogledestruktion. Vores mål var at udvikle en model for eksperimentel knoglemetastaser, der tillader in vivo vurdering af angiogenese i skelet læsioner ved hjælp af non-invasive billeddiagnostiske teknikker.
Til dette formål injiceres vi 10 5 MDA-MB-231 humane brystcancerceller i den overfladiske epigastriske arterie, hvilket udelukker væksten af metastaser i kroppen på andre områder end det respektive bagben 1. Efter 25-30 dage efter tumorcellepodning udvikler stedspecifikke knoglemetastaser, begrænset til den distale femur, proksimale tibia og fibula proximale 1. Morfologiske og funktionelle aspekter af angiogenese kan undersøges i længderetningen i knoglen metastases bruger magnetisk resonans imaging (MRI), volumetrisk computertomografi (VCT) og ultralyd (US).
MRI viser morfologisk information om den bløde væv del af knoglemetastaser, der oprindeligt er begrænset til knoglemarven hulrummet og derefter over cortical knogle, mens forløber. Med dynamisk kontrast-MRI (DCE-MRI) funktionelle data, herunder regionale blodvolumen, perfusion og karpermeabilitet kan opnås og kvantificeres 2-4. Knogledestruktion er fanget i høj opløsning ved morfologiske VCT billeddannelse. Komplementær til MRI resultater kan osteolytiske læsioner være placeret tilgrænsende til steder med intramedullær tumorvækst. Efter kontrastmiddel ansøgning, afslører VCT angiografi den makrokarsygdom arkitekturen i knoglemetastaser i høj opløsning, og DCE-VCT giver indsigt i mikrocirkulationen af disse læsioner 5,6. USA er anvendes til at vurdere morfologiske og funktionelle egenskaber fra skelet læsioner på grund aflokal osteolyse af cortical knogle. Anvendelse af B-tilstand og Doppler-teknikker, kan strukturen og perfusion af de bløde væv metastaser vurderes hhv. DCE-US muliggør tidstro billeddannelse af vaskularisering i knoglemetastaser efter injektion af mikrobobler 7.
Konklusionen er, metastaser i en model af site-specifikke brystkræft knogle multimodale billeddannende teknikker, herunder MRI, VCT og tilbud fra USA om supplerende oplysninger om morfologi og funktionelle parametre for angiogenese i disse skelet læsioner.
Protocol
1. Cellekultur
- Kultur MDA-MB-231 humane brystcancerceller (American Type Culture Collection) i RPMI-1640 (Invitrogen, Tyskland) suppleret med 10% FCS (Sigma, Tyskland). Holde alle kulturer under standardbetingelser (37 ° C, befugtet atmosfære, 5% CO2) og passage af cellerne 2-3 gange om ugen for at holde dem i logaritmisk vækst. For dyremodel beskrevet nedenfor, er der ikke behov for anvendelse af knogle-specifikke underlinier af MDA-MB-231 celler som tumoren take hastighed er over 90% 1.
- Høst sub-konfluente tumorceller efter anvendelse af 2 mM EDTA i PBS-(phosphat-pufret saltvand uden Ca2 + og Mg2 +) og 0,25% trypsin (Sigma, Taufkirchen, Tyskland). Tæller MDA-MB-231 celler i et Neubauer kammer og suspendere dem i RPMI-1640 (5x10 5-celler i 1 ml).
2. Nøgen rotte model af knoglemetastasis
- Alle eksperimenter blev godkendt af den ansvarlige statslige Animal etisk udvalg.
- Brug nøgne rotter i en alder af 6-8 uger, og holde dem på patogenfrie betingelser i et passende lille dyr system (f.eks mini-barriere system). Holde dyr under kontrollerede betingelser (21 + / - 2 ° C stuetemperatur, 60% fugtighed og 12 timers lys-mørke rytme) og giver autoklaveret foder og vand ad libitum til rotterne.
- Før dyr operation, en analgetisk lægemiddel injicere (fx Carprofen 4 mg / kg sc, på grund af dets enkelt indgivelse og korte halveringstid (ca. 8 timer), bør carprofen ikke påvirke tumorvækst). Bedøver rotter med en blanding af ilt (0,5 l / min) og isofluran (1-1,5 vol.%), Og sørg for, at rotten er bedøvet ordentligt og ånder regelmæssigt, før du begynder den følgende procedure.
- Placer bedøvede dyr i henhold til en passende kikkert operativsystem mikroskop (f.eks Leica), og arbejde med en forstørrelse på 16-fold.
- Begynd den kirurgiske procedure ved at skære hud og subkutane væv i inguNDELIGE region med en længde på 2-3 cm med en saks (BC060r Iris saks 108 mm). Alle arterier forgrenede fra den femorale arterie (FA) skal udskæres, herunder den overfladiske epigastriske arterie (SEA), faldende genicular arterie (DGA), popliteale arterie (PA) og vena arterie (SA).
- Sæt clips på arteria femoralis proksimale af SEA oprindelse samt på DGA, at PA og SA tidsmæssigt tillukke lokale blodgennemstrømning. Ligere havet ved sin distale del for at tillade åbning af denne beholder uden blødning (figur 1A).
- Skære SEA med en saks (Vännäs Micro-SCRS-rillet STR 85 mm) proximale af ligeringen (fig. 1B) og administrere en 1% papaverin opløsning på SEA, for at lette den efterfølgende indsættelse af en nål på grund relaksation af beholderen ( Figur 1C).
- Skær omkring halvdelen af SEA diameter med en saks og indsætte en nål (0,3 mm i diameter og 42 mm længde) i lumen af havet, mens holding den afskårne ende af beholderen med en pincet (fig. 1D, E). Når den er tilgængelig, fastsætte nålen i en ekstern enhed for at reducere uregelmæssige bevægelser, som kan resultere i perforation af karvæggen. Forbinde en sprøjte til nålen. Fjerne klemmen fra den distale FA og placere den på den saphenøse arterie (fig. 1F).
- Injicer MDA-MB-231 celler suspenderet i 0,2 ml medium langsomt i havet. I kraft af klemmerne MDA-MB-231 celler er rettet mod DGA og PA. Fjern kanylen og liger SMV for at forhindre blødning, før du tager væk fra arterie klip. Luk såret med kirurgiske clips og afslutte indånding anæstesi.
- Til post-procedure overvågning rotterne sædvanligvis aflivet 7-8 uger efter tumorcellepodning at undgå alvorlige skelet komplikationer. I denne periode skal dyrene overvåges dagligt for at vurdere tumorstørrelse og ethvert tegn på smerte (fx adfærdsmæssige afvigelser, vægttab, motoriske defekter). Hvis dyr viser en tumorstørrelse overstiger etisk tilladte grænse eller tegn på smerte under tumorvækst, de skal aflives.
- Immuno-deficiente (nøgne) rotter blev anvendt til xenogenous transplantation af humane MDA-MB-231 brystcancerceller. Nøgne rotter blev ikke valgt for bedre at visualisere den voksende tumor.
3. Magnetic Resonance Imaging (MRI)
- Efter tumorcellepodning, giver ca 25-30 dage tumorvækst, før du begynder med billeddannelse. Til MR-billeddannelse anvende en dedikeret eksperimentel scanner eller en human MR-system med en passende dyr spole. Vi anvendte et humant MR-system (Symphony, Siemens, Tyskland) og en indre indbygget spole for radiofrekvens excitation og detektion, udformet som en cylindrisk volumen resonator med en indvendig diameter på 83 mm og en anvendelig længde på 120 mm (fig. 2A).
- Bedøve rotte med oxygen og isofluran som angivet ovenfor. Placere et kateter i halevenen, og fastgør den på halen ved hjælp af en tap e. Forbinde en sprøjte indeholdende kontrastmidlet (f.eks 0,1 mmol / kg Gd-DTPA i ca 0,5 ml, Magnevist, Bayer-Schering, Tyskland).
- Placere rotte i MR-systemet opretholde inhalationsanæstesi. Begynd med en morfologiske MR sekvens for at finde knoglemetastaser (f.eks T2 vægtet: turbo spin-ekko sekvens, TR 3240 ms, TE 81 ms, matrix 152 x 256, FOV 90 x 53,4 mm 2, skive tykkelse 1,5 mm, 3 gennemsnit, scan tid 3:40 min).
- Bestem en skive af knoglemetastaser med den største diameter og starte sekvensen for DCE-MRI (fx mætning genopretning turbo blinksekvens, TR 373 ms, TE 1,86 ms, matrix 192 x 144, FOV 130 x 97,5 mm 2, skive tykkelse 5 mm, målinger 512, gennemsnit 1, scan tid 6:55 min). Efter ca 30 sekunder, begynder at injicere kontrastmidlet over et tidsrum på 10 sek. Den samlede tid for de ovennævnte procedurer til at udføre en MR-undersøgelse er omkring 15-20 minutter for hvert dyr.
- Vælge en passende CT-systemet, enten et menneske eller et eksperimentelt scanner. Her brugte vi en prototype af en fladskærm er udstyret volumetrisk beregnet tomografi (figur 2B, Volume CT, Siemens, Tyskland).
- Bedøve rotte med oxygen og isofluran som angivet ovenfor. Placere et kateter i halevenen, og fastgør den på halen ved hjælp af et bånd. Forbinde en sprøjte indeholdende kontrastmidlet (fx 1 g iod pr kg i ca 0,5 ml, Imeron 400, Bracco, Tyskland).
- Sæt rotten på scanneren under inhalations-anæstesi. Brug følgende scanningsparametrene for VCT: rørspænding 80 kV, rør nuværende 50 mA, scan tid 51 sek, rotationshastighed 10 sekunder, frames per sekund 120, matrix 512 x 512 og snittykkelse 0,2 mm. Sprøjt kontrastmidlet under den anden rotation fladskærm systemet. Den samlede tid for de ovennævnte procedurer til at udføre en VCT undersøgelse er cirka 5-10 minutter pr Animal.
- Rekonstruere billeder med en modificeret FDK (Feldkamp-Davis-Kress) kegle-beam rekonstruktion algoritme (kernel H80a, Afra, Tyskland).
5. Ultralyd (US)
- Eksperimentelle og kliniske OS systemer er tilgængelige til dette formål. Vi brugte den kliniske systemet Acuson Sequoia 512 ultralydssystemet med en 15L8 lineær transducer (figur 2C, Siemens-Acuson, Mountain View, CA).
- Bedøve rotte med oxygen og isofluran som angivet ovenfor. Placere et kateter i halevenen, og fastgør den på halen ved hjælp af et bånd. Forbinde en sprøjte indeholdende en mikroboble kontrastmiddel (f.eks 1,6 ml / kg i ca 0,5 ml, SonoVue, Bracco, Italien). Fastgør USA transduceren på det pågældende bagbenet bruger et stativ og anvende USA gel mellem transducer og bagben.
- Udfør B-mode scanning (sendefrekvens: 17 MHz, mekanisk indeks: 0,51) for at bestemme den største diameter af knoglemetastaser og fastgør transduceren i tsin stilling. Tilføj Doppler signal på B-mode billeder til oplysninger om vævsperfusion. Vær opmærksom på, at det kun læsioner, som forstyrrer kortikale knogle er tilgængelige for amerikanske bølger.
- For dynamisk kontrast med forbedret USA (DCE-US) nedsatte den amerikanske enhed i kadence kontrast puls sekventering (CPS) mode (sendefrekvens: 7 MHz, mekanisk indeks: 0,18), injicere mikroboblerne og optage en cine løkke på 90 sek længde. Den samlede tid for de ovennævnte procedurer til at udføre en amerikansk undersøgelse er cirka 10-15 minutter for hvert dyr.
6. Efterbehandling af billeddata
- Brug morfologiske oplysninger fra MRI, VCT og USA til at karakterisere det bløde væv tumor (MRI, USA) og skelet destruktion (VCT) af knoglemetastaser og bestemme placering, læsionsstørrelse og omfanget af de læsioner med en DICOM viewer (f.eks Osirix DICOM Viewer).
- Til opnåelse af forgrening mønster af skibe knoglemetastaser (angiografi) kan VCT data anvendes. Rekonstruere 2D eller 3D billeder ved hjælp af oplysninger om arteriel fase med eller uden subtraktion teknikker (f.eks Osirix DICOM Viewer).
- For at kvantificere parametre for vaskularisering fra DCE-MRI, DCE-VCT og DCE-USA, skal du bruge software-værktøjer er specifikke for de nærmere. For DCE-MRI, bestemme vaskulære parametre amplitude A (forbundet med blodvolumen) og valutakurs konstant k ep (forbundet med perfusion og karpermeabilitet) i knoglemetastaser med Dyna Lab (Mevis Research, Bremen, Tyskland) baseret på de to- rum model Brix 8,9. Alternative farmakokinetiske modeller for evaluering er tilgængelige, f.eks Tofts model 10.
- For at kvantificere DCE-VCT data, udføre en beskrivende analyse af data til beregning af parametre, såsom området under kurven (AUC) eller top forøgelse (PE) med Dyna Lab (Mevis Research, Bremen, Tyskland).
- Kvantificere oplysninger fra real-time DCE-US brug af kvantitativ analyse software (f.eks Qontrast, Bracco, Italien) ved at analysere Cine-sløjfer i henhold til den gennemførte bolusinjektion model. Placer region af interesse (ROI) over knoglemetastaser, bestemme, enten beskrivende faktorer, såsom arealet under kurven eller kvantitative parametre fra farve-kodede kort, f.eks regionale blodvolumen, regionale blodgennemstrømning og påfyldning tid.
7. Repræsentative resultater
Efter intraarteriel injektion af MDA-MB-231 celler i SEA (figur 1), udvikler stedspecifikke knoglemetastaser i den respektive bagbenet af nøgen rotte. Osteolytiske læsioner begrænset til lårbenet, kan skinneben og lægben skal afbildes ikke-invasivt ved MRI, VCT og USA (figur 2) begynder omkring 25-30 dage efter injektion og fulgt op i flere uger. Ved kombination af MRI, VCT og US herunder native og kontrast-forbedrede teknikker kan supplerende information vurderes i knoglemetastaser, der består af et blødt vævtumor (tumorceller og stroma) og de respektive osteolytisk læsion (knogledestruktion). Til sammenligning af de respektive data mellem de teknikker, kan alle tre afbildningsmodaliteter anvendes sekventielt i den samme rotte. MRI viser morfologien af knoglen metastatiske bløde væv, der oprindeligt er begrænset til knoglemarven hulrummet og derefter over knoglebark under udvikling. Funktionelle parametre såsom regional blodvolumen, perfusion og karpermeabilitet kan opnås fra DCE-MRI og kvantificeret (figur 3). Knoglestruktur, og især osteolytiske ændringer i metastaser vurderes i høj opløsning af VCT. Sideløbende med MR fund, er osteolytiske læsioner placeret ved siden af intramedullær tumorvækst. ACC angiografi viser den ændrede makrokarsygdom arkitekturen af knoglemetastaser, og DCE-VCT viser respektive aspekter mikrocirkulation (figur 4). På grund af lokal ødelæggelse af cortical knogle i metastatic læsioner, US anvendes til at vurdere morfologiske og funktionelle egenskaber af det bløde væv tumoren ved anvendelse af B-tilstand og Doppler-teknikker. Efter påføring af mikrobobler, tillader DCE-US for real-time billeddannelse af vaskularisering i knoglemetastaser (figur 5).
Figur 1. Bagben hos en nøgen rotte forberedt til tumorcellepodning som afbildes ved hjælp af en operation mikroskop. A forgrening mønster af den femorale arterie (FA), herunder den overfladiske epigastriske arterie (SEA), faldende genicular arterie (DGA), popliteale arterie (PA) og vena arterie (SA). Arterielle klip placeret på SA, PA og proksimale FA samt ligering af SEA, B, blev SEA skåret proksimale af ligeringen, C, muskelafslapning af SEA efter tilsætning af papaverin, D, incision af SEA (taget op af en pincet), E, indsættelse af kanylen i SEA, F, fikseret nål i SEA (ekstern fi xating enhed), og injektion af MDA-MB-231 tumorceller via SEA i DGA og PA i kraft af klip.
Figur 2 A, human MR-system (Symfoni, Siemens, Tyskland) og et hjem indbygget spole for radiofrekvens excitation og detektion placeret i scanneren. B, fladskærm er udstyret volumetrisk beregnet tomografi (Volume CT, Siemens, Tyskland), C, klinisk ultralydssystemet Acuson Sequioa 512 (Siemens-Acuson, Mountain View, CA).
Figur 3. Aksiale MR sektioner. Venstre panel, T2w MRI, midterste panel, amplitude A (DCE-MRI), højre panel, kurs konstant k EP (DCE-MRI). Pile pege på knoglemetastaser. Farven kort for DCE-MRI dataområder fra rød (høje værdier) til blå (lave værdier).
78/4178fig4.jpg "/>
Figur 4. 3D VCT rekonstruktioner af osteolytisk knoglemetastasis (venstre panel) og en angiografi (midterste panel) samt en DCE-VCT sektion i aksial retning fra den parameter top forstærkning (højre panel). Farven kort for DCE-VCT dataområder fra rød (høje værdier) til blå (lave værdier).
Figur 5. US billeder fra B-modus (morfologi, venstre panel), Doppler (perfusion, midterste panel) og CEUS (højre panel, peak forøgelse efter injektionen af mikrobobler fra tidstro billeddannelse af vaskularisering) af en knoglemetastasis.
Supplerende film 1. Klik her for at se supplerende film .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Fremgangsmåden til induktion af eksperimentel knoglemetastaser præsenteres her i kombination med de billeddannende procedurer muliggør at følge op osteolytiske læsioner i nøgne rotter i længderetningen. I vores model er MDA-MB-231 humane brystcancerceller injiceret i havet, som er en anastomose mellem bækkenarterie via pudendoepigastric stammen og den femorale arterie. Følgelig er blodstrømmen i den medfølgende region af knæleddet opretholdes efter ligering af SEA. Fordelene ved denne model sammenlignet med etablerede modeller af knoglemetastasis er stedspecifik udseende af knoglemetastaser sammenlignet med intrakardial injektion model 11 og optagelse af de patogene processer tumorcelle ekstravasation og migrering til målvævet i forhold til skinnebenet injektion model 12. Yderligere, i denne model en systemisk tumorbyrde, især visceral udbredelse, udeladt er der mulighed for longitudinale studier over sig selvveral uger og tillader således en reduktion af krævede dyr 1,13.
Rollen af angiogenese som afgørende proces til at fremme tumorcelleproliferation og inducere knogleresorption i patogenesen af knoglemetastasis er tidligere påvist i ex vivo-undersøgelser 14,15. Her præsenterer vi in vivo imaging teknikker til ikke-invasivt vurdere angiogenese i disse læsioner, der anvender MRI, VCT og USA. Ved hjælp af en nøgen rotte model, supplerende information af vaskularisering herunder funktionel oplysninger om blodvolumen og karpermeabilitet / perfusion (DCE-MRI, DCE-VCT), fartøj morfologi i høj opløsning (VCT angiografi), perfusion (US Doppler) og real-time billeddannelse af vaskularisering (DCE-US) kan fås 1-7,16.
Billeddannelse af angiogene parametre med MRI, VCT og US muliggør belysning af den patogene rolle i angiogenese i skelettet metastase ikke-invasivt og in vivo 3,4,6. En anden anvendelse for de ovennævnte billeddannende teknikker er undersøgelsen af terapeutiske virkninger i forløbsundersøgelser upon antiangiogene eller standard terapier for knoglemetastaser. Til påvisning af farmakologisk respons, omfatter forløbsundersøgelser op til 70 dage efter tumorcellepodning med gruppe størrelser mellem 8 og 17 rotter blev udført for at demonstrere anti-tumor og anti-angiogene og anti-resorberende virkning 2-7,17. På grund af anvendelse af billeddiagnostiske metoder på scannere til human brug i en klinisk relevant dyremodel, de præsenterede procedurer af høj translationel værdi for vurdering af behandling hos patienter med knoglemetastaser 16.
Som konklusion kan anvendelse af denne stedspecifik dyremodel for brystkræft knoglemetastaser, morfologiske og funktionelle aspekter af angiogenese, der skal afbildes ikke-invasivt og in vivo
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen interessekonflikter erklæret.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB-TR 23 og SFB-TR 79, TB og DK). Forfatterne vil gerne takke Renate Bangert, Karin Leotta og Lisa Seyler for fremragende teknisk bistand.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MDA-MB-231 human breast cancer cells | American Type Culture Collection | HTB-26 | |
| RPMI-1640 | Invitrogen | 61870 | |
| FCS | Invitrogen | 10270 | |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25300 | |
| Carprofen Rimadyl | Pfizer Pharma GmbH | PZN 110208 | |
| Magnevist | Bayer-Schering | PZN 6961516 | |
| Imeron 400 MCT | Bracco | PZN 228654 | |
| SonoVue | Bracco | PZN 1567358 | |
| Papaverin | Alfa Aesar | L 04152 | |
| Isofluran | Baxter Internationl Inc. | HDG 9623 | |
| Symphony (Magnetic resonance imaging) | Siemens AG | ||
| Volume CT (Volumetric computed tomography) | Siemens AG | ||
| Acuson Sequioa 512 (Ultrasound) | Siemens-Acuson |
References
- Bäuerle, T. Characterization of a rat model with site-specific bone metastasis induced by MDA-MB-231 breast cancer cells and its application to the effects of an antibody against bone sialoprotein. Int. J. Cancer. 115, 177-186 (2005).
- Merz, M., Komljenovic, D., Zwick, S., Semmler, W., Bäuerle, T. Sorafenib tosylate and paclitaxel induce anti-angiogenic, anti-tumor and anti-resorptive effects in experimental breast cancer bone metastases. Eur. J. Cancer. 47, 277-286 (2010).
- Bäuerle, T. Cilengitide inhibits progression of experimental breast cancer bone metastases as imaged noninvasively using VCT, MRI and DCE-MRI in a longitudinal in vivo study. Int. J. Cancer. 128, 2453-2462 (2011).
- Bäuerle, T., Merz, M., Komljenovic, D., Zwick, S., Semmler, W. Drug-induced vessel remodeling in bone metastases as assessed by dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging and vessel size imaging: a longitudinal in vivo study. Clin. Cancer Res. 16, 3215-3225 (2010).
- Bäuerle, T. Imaging anti-angiogenic treatment response with DCE-VCT, DCE-MRI and DWI in an animal model of breast cancer bone metastasis. Eur. J. Radiol. 73, 280-287 (2010).
- Bäuerle, T. Bevacizumab inhibits breast cancer-induced osteolysis, surrounding soft tissue metastasis, and angiogenesis in rats as visualized by VCT and MRI. Neoplasia. 10, 511-520 (2008).
- Merz, M., Komljenovic, D., Semmler, W., Bäuerle, T. Quantitative contrast-enhanced ultrasound for imaging anti-angiogenic treatment response in experimental osteolytic breast cancer bone metastases. , Forthcoming (2012).
- Brix, G. Pharmacokinetic parameters in CNS Gd-DTPA enhanced MR imaging. J. Comput. Assist. Tomogr. 15, 621-628 (1991).
- Brix, G. Microcirculation and microvasculature in breast tumors: pharmacokinetic analysis of dynamic MR image series. Magn. Reson. Med. 52, 420-429 (2004).
- Tofts, P. S. Estimating kinetic parameters from dynamic contrast-enhanced T(1)-weighted MRI of a diffusable tracer: standardized quantities and symbols. J. Magn. Reson. Imaging. 10, 223-232 (1999).
- Arguello, F., Baggs, R. B., Frantz, C. N. A murine model of experimental metastasis to bone and bone marrow. Cancer Res. 48, 6876-6881 (1988).
- Kjonniksen, I., Winderen, M., Bruland, O., Fodstad, O. Validity and usefulness of human tumor models established by intratibial cell inoculation in nude rats. Cancer Res. 54, 1715-1719 (1994).
- Bäuerle, T. Treatment of bone metastasis induced by MDA-MB-231 breast cancer cells with an antibody against bone sialoprotein. Int. J. Oncol. 28, 573-583 (2006).
- Andersen, T. L. A physical mechanism for coupling bone resorption and formation in adult human bone. Am. J. Pathol. 174, 239-247 (2009).
- Nyangoga, H., Mercier, P., Libouban, H., Basle, M. F., Chappard, D. Three-dimensional characterization of the vascular bed in bone metastasis of the rat by microcomputed tomography (MicroCT). PLoS One. 6, e17336 (2011).
- Bäuerle, T., Semmler, W. Imaging response to systemic therapy for bone metastases. European Radiol. 19, 2495-2507 (2009).
- Bretschi, M. Cilengitide inhibits metastastic bone colonization in a nude rat model. Oncol. Rep. 26, 843-851 (2001).
