רוב המחקרים של מחלת קרנית herpetic משתמשים במודל זיהום עיקרי. עם זאת, זיהום ראשוני עם HSV-1 אינו בדרך כלל להוביל למחלות אנושיות. כאן אנו מתארים מודל חוזר של מחלה בקרנית herpetic, אשר באופן הדוק יותר מחקה מחלות אנושיות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
Keratitis חוזר herpetic סטרומה בעכברים, מודל ללימוד HSK אנוש
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחל herpetic עין, קרנית סטרומה herpetic כינה (HSK), היא זיהום שעלול להיות מסנוור של הקרנית שגורמת ליותר מ -300,000 ביקורים קליניים בכל שנה לטיפול. בין 1 ל 2 אחוזים מחולים עם מחלה קלינית חווים אובדן הראייה של הקרנית הנגועה. הרוב המכריע של מקרים אלה הם התוצאה של הפעלה מחדש של זיהום סמוי על ידי הרפס סימפלקס סוג אני וירוס ולא כתוצאה ממחלה חריפה. מעניין, הזיהום החריף הוא המודל המשמש לרוב ללימודי מחלה זו. עם זאת, התחושה הייתה שמודל חוזר של HSK יהיה יותר משקף את מה שמתרחש במהלך מחלה קלינית. את המודלים של בעלי החיים חוזרים לHSK העסיקו שני ארנבות ועכברים. היתרון של ארנבים הוא שהם חווים מחדש מהשהית העדר כל גירוי ידוע. עם זאת, קשה לחקור את התפקיד שהרבה גורמים אימונולוגיים לשחק בHSK החוזר, משום שמודל הארנב אין immunמשאבי ological והגנטיים שיש עכבר. אנחנו בחרנו להשתמש במודל העכבר לHSK חוזר כי יש לו את היתרון של להיות שם משאבים רבים זמינים וגם אנחנו יודעים מתי נתרחש מחדש בגלל מחדש נגרמים עקב חשיפה לקרינת UV-B. עד כה, מודל זה אפשר מעבדות אלה משתמשים בו כדי לקבוע מספר גורמים חיסוניים שחשובים למחלה זו. זה גם אפשר לנו לבחון גם ריפוי ויעילותו.
פרוטוקול
הערת טיפול בבעלי חיים: משככי כאבים אינם משמשים במודל זה כמו שהם אנטי דלקתיים ולכן הייתי פוסלים את המודל.
1. הכנת הווירוס
- לגדול HSV-1 בתאי Vero (80% confluent) באמצעות דילול התחלתי של 0.01 ריבוי של זיהום (בבקבוק T-150, כ 5 x 10 יחידות יוצרות פלאק 5) עבור 3-4 ימים עד שכל תאים מעוגלים למעלה והם משתחררים ממקומם בקלות על ידי להכות את הבקבוק.
- הסר את המדיה לצינורות סטריליים צנטריפוגות וצנטריפוגות ב Sorvall המקרא RT ב 4 °....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הדגם החוזר של קרנית סטרומה herpetic (HSK) המתואר כאן מאפשר לחוקר ללמוד HSK האנושי במודל שהוא מתאים יותר למה שהוא ציין במהלך מחלה האנושית. לכן, העוצמות של המודל הן כי מחלה מתרחשת בהקשר של מערכת חיסון שיש כבר על ידי גירוי במחלה ראשונית. מאז העכברים האלה כבר יש תגובה חיסונית לHSV-1, את הגורמים שהפעלה מחדש של תגובה חיסונית שעשויים שונים מאלה שיצרו אותה במקור. לכן, התערבות טיפולית כדי למנוע HSK הראשוני לא תמיד מובילה לשיפור של HSK החוזר, אשר יש לנו שמוצגות בפרסומים שונים בעת הערכה הראש.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
תודות
המחברים מבקשים להודות לד"ר ג'יי Pepose עזר ללמד את המודל אלינו. עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות EY11885 מענקים (PMS), EY21247 (PMS) ומענק בלתי מוגבל של מחקר כדי למנוע עיוורון למחלקת עיניים.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| DMEM | Sigma | D5796 | |
| סרום עוברי בקר (Fetal Bovine Serum) | Atlanta Biologicals | S11150 | |
| סרום אנושי | Sigma | S7023 | |
| L-Glutamine | Cellgro | 25-005-C1 | |
| פניצילין/סטרפטומייצין (Pen/ Strep) | Sigma | P4333 | |
| Fungizone | Invitrogen | 15290018 | |
| צנטריפוגה | Sorvall | Legend RT | |
| צנטריפוגה | Beckman | 52-21 | |
| טרנס-אילימינטור (Transilluminator) | UVP | 95-0452-02 | |
| סוניקטור (Sonicator) | Branson | Sonifier 450 | |
| מבחנות Oak Ridge | Nalgene | Z 720410 | |
| בקבוקונים- 7150 | Corning | 430823 | |
| פלטות- 12 בארות | Corning | CLS 3513 | |
| פלטות- 48 בארות | Corning | CLS 3548 | |
| מבחנות קוניות סטריליות- 30 ml | Corning | CLS 430828 | |
| מקלון סטרילי עם קצה צמר | Fisher | 23-400-125 | |
| מחטים 30G | Becton-Dickinson | 305106 | |
| מחטים 25G | BD | 305122 | |
| מזרק 10 ml | BD | 309602 | |
| מזרק 10 ml | BD | 309604 |
מקורות
- Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice. Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).
- Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic ey....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
