Summary
בפרוטוקול זה, w הדואר זיהה אוכלוסיית רומן של תאים כמו melanocyte-(הידוע גם במלנוציטים לב) בלבם של עכברים ובני אדם שתורם להפרעות קצב פרוזדורים גורמת בעכברים.
Abstract
זיהינו אוכלוסיית רומן של תאים כמו melanocyte-(הידוע גם במלנוציטים לב) בלבם של עכברים ובני אדם שתורמים לגורמי הפרעת קצב פרוזדורים בעכברים. כדי לחקור את התכונות חשמליות וביולוגיות של מלנוציטים לב פיתחנו הליך לבודד אותם מלב העכבר שנגזרים מאלה שנועדו לבודד את שריר לב עכברי בילוד. על מנת לקבל מלנוציטים לב בריאים מתאימים למהדק תיקון נרחב יותר או מחקרים ביוכימיים, שפיתחנו הליך מעודן לבידוד וציפוי מלנוציטים לב המבוססים על אלה שתוכננו במקור לבודד מלנוציטים עורית. ההליך המעודן בא לידי הביטוי בסקירה זו ומייצר מספרים גדולים יותר של תאים כמו melanocyte הבריאים שיכול להיות מצופה כאוכלוסייה טהורה או עם שריר לב.
Introduction
לאחרונה זיהו אוכלוסיית תא רומן בלב של עכברים ובני האדם שמבטאים את אנזימי מלנין-סינתזה ומורפולוגית דומה מלנוציטים עורית. אנו נקראים 'מלנוציטים הלב' התאים אלה ומצאנו שהם נמצאים במקומות אנטומיים שממנו הפרעת קצב פרוזדורים מתעורר בי לעתים קרובות מקורן בבני אדם. מצאנו גם מלנוציטים לב לתרום להפרעות קצב פרוזדורים בעכברים עם מחיקה בתאי מין של DCT. מלנוציטים לב מופצים בדלילות לאורך אטריום העכבר שבו הם מהווים פחות מ -0.1% מכל תאי פרוזדורים. כדי לחקור את התכונות חשמליות וביולוגיות של מלנוציטים לב פיתחנו הליך לבודד אותם מלב העכבר באמצעות סמנים ספציפיים melanocyte Cre-מושרה. ההליך הראשוני שלנו פותח מאלו המשמשים לבודד את שריר לב עכברי בילוד ומספרים קטנים מאוד הניבו של תאים מתאימים להקלטות מהדק תיקון או ניתוח PCR. עם זאת, על מנת לשפר את לרפאה ואת הכדאיות של מלנוציטים לב, ליותר בניתוח המעמיק אלקטרו או מחקרים ביוכימיים, שפיתחנו הליך מעודן מאלה שנועדו לבודד את מלנוציטים עורית. יש ההליך המתואר והפגין בסקירה זו את היתרון של ייצור מלנוציטים לב בריאים שיכול להיות מצופה כאוכלוסייה טהורה או עם שריר לב.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
.1 הכנת הפתרונות וציוד הדרושים
- ראשית, לעקר את מכשירי ניתוח (מלקחיים ישרים צורה, מלקחיים צורה מעוגלות, מספריים צורה ישרות, ומספריים צורה מעוגלות) על ידי המעוקר במשך 15 דקות. ב 121 C °. להכין 2 סטים של מכשירים, שבו קבוצה אחת משמשת ללנתח את לבם ואת הסט השני ישמש למיותר את הרקמה.
- לפזר 1 שקית של תקשורת בתרבות MCDB153 ב900 מ"ל מים מעוקרים, מסוננים ומערבבים לאט עד שהאבקה נמסה. הוספת 1.2 יקרבונט גרם נתרן, או 15.7 פתרון ביקרבונט מ"ל של נתרן [7.5% w / v], לכל ליטר של נפח הסופי של מדיום שמכין ומערבבים עד שהיא נמסה. התאם את רמת החומציות ל7.2 על ידי הוספה או N HCl 1 או 1 N NaOH, ואז לשפוך את התקשורת דרך מסנן עליון 0.2 מיקרומטר בקבוק בתנאים סטריליים בשכונת תרביות רקמה (קבינט בטיחות ביולוגי). לאחר מכן לאסוף את התקשורת ולאחסן אותו ב 4 ° C..
- הכן את התוספים ללהוסיף לתקשורת והתרבות (חומרי רשימה). יש להוסיף התוספים לתקשורת רק לפני יש צורך בתקשורת לציפוי התאים.
- הכן DPBS עם 10% FBS בתוספת אנטיביוטיקה (פניצילין וסטרפטומיצין).
- בשלב בא, להכין פתרון טריפסין 0.25% על ידי הוספת 0.25 גרם של טריפסין (לבלב שור, פעילות> 2,500 USP יחידות / מ"ג, ultrapure; USB) לשל DPBS בתוספת אנטיביוטיקה (פניצילין וסטרפטומיצין) 100 מ"ל.
- ציוד הנדרש אחר הנחוץ להשלמת הליך זה כולל סטראו, פטרי מנות (10 ס"מ), צינורות חרוטי 50 מ"ל, מסננות תא 40-מיקרומטר, DPBS בתוספת אנטיביוטיקה, מנות תרבות 60 מ"מ ומנות תרבות 35 מ"מ.
.2 בידוד לבבות מגורי עכבר ילודים
- ראשית, להשיג P0 לגורי עכבר יילודי P2 (n = 6 עד 8). מומלץ להשתמש בגורים שנוצרו על ידי רביית DCT-Cre נקבות הומוזיגוטים עם זכרים כי הם הטרוזיגוטיים לאו R26R: אלל EYFP או Z אלל / EG לתייגתאים כמו melanocyte-. שני R26R: עכברי EYFP וZ / EG זמינים מג'קסון מעבדות (מספרי מניית 006,148 ו003,920, בהתאמה).
- בשלב בא, להרדים את גורי עכבר יילודים, לנגב חזה עם ספוגית אלכוהול ולאחר מכן למקם את הגורים ב10 ס"מ צלחת פטרי עם DPBS.
- חותך את העור באזור החזה ועצם חזה עם מלקחיים ומספריים מעוקרים ולאחר מכן פתח את החזה בזהירות תחת סטראו. לבם של גורי עכבר יילודים קטנים מאוד כדי להיות זהיר כדי לוודא כדי להסיר את כל הלב עם אטריה המצורפת.
- שטוף את הלב בDPBS ולהעביר אותם לצלחת פטרי 10 ס"מ חדש.
.3 אנזימתי עיכול
- להביא את צלחת פטרי עם הלבבות עקורים למכסת מנוע בתרבית רקמה (קבינט בטיחות ביולוגי) ולאחר מכן בצע את השלבים הבאים תוך שימוש בטכניקות סטרילי במכסת המנוע.
- ראשית, לשטוף את הלבבות שלוש פעמים בDPBS בתוספת האנטיביוטיקה סטרילי.
- מניחים את הלבבות (n = 6-8) בצלחת 60 מ"מ התרבות ולהוסיף 6-8 מ"ל של .0.5% פתרון טריפסין לצלחת.
- בשלב הבא, לחתוך את הלב לחתיכות קטנות (פחות מ -1 מ"מ בגודל) ודגירה אותם 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות באווירת 5% CO 2.
- , לאחר תקופת הדגירה היא מלאה לשפוך את הפתרון של רקמה וטריפסין מצלחת לב וכתוצאה מכך לתוך צינור חרוטי 50 מ"ל סטרילי.
- לאחר מכן, באמצעות פיפטה סטרילית 10-מ"ל, במהירות אך בעדינות, triturate הפתרון בצינור חרוטי 50 מ"ל 30-50 פעמים.
- סנן את הפתרון דרך מסננת תא 40-מיקרומטר על גבי צינור חדש, נקי 50 מ"ל חרוטי וכתוצאה מכך לאיסוף התסנין.
- בשלב בא, צנטריפוגות צינור 50 מ"ל ב240 x גרם בצנטריפוגה בטבלה העליונה למשך 5 דקות בטמפרטורת חדר. ואז, בעדינות לשאוב את supernatant וresuspend גלולה שנותר ב6-8 מ"ל של DPBS סטרילי. חזור על פעולה זו 2 פעמים יותר. צעד זה פלטות myocytes פרוזדורים ומלנוציטים לב אבל לא להפיל את fibroblasts מאז fibroblasts הם קטנים יותר ויישארו בsupernatant.
תאים דמויי Melanocyte .4 ציפוי הלב
- בעקבות השטיפה השלישית לאחר צנטריפוגה, לנקז בזהירות או לשאוב את הפתרון לשטוף (DPBS) וresuspend גלולה ב6 מ"ל של תקשורת בתרבות MCDB שלתוספים נוספו.
- עכשיו, לצייר הפתרון המושעה לפיפטה העברת סטרילי ולמקם את התאים בצלחת 35 מ"מ, או בטוב של צלחת 6 היטב, וברכת תאי לב הבודדים מ3 עכברים בילוד בצלחת 35 מ"מ אחד או כן.
- דגירה צלחות הלילה בשעה 37 ° C באווירת 5% CO 2, לשאוב את התקשורת והתרבות יחד עם כל תאים פנויים ולאחר מכן לשטוף את הצלחות פעם אחת עם DPBS. לאחר מכן להוסיף תקשורת טרי לצלחות ולהחליף את התקשורת כל 2 ימים. תאים מבודדים מלב בילוד או עוברי יכולים להישמר בתרבות לתקופה של עד 3 שבועות, ואילו תאים מבודדים מלשמוע מבוגריכול להישמר ts בתרבות עד 10 ימים.
תאים דמויי Melanocyte .5 בידוד לב מלב מאוס למבוגרים
- ראשית, להסיר את הלב מעכברים בוגרים (3-4 שבועות בן, n = 3) דרך sternotomy קו האמצע לאחר מתן הפרין 100 intraperitoneal U לעכברים ולאחר מכן הרדמת חסדם. מומלץ להשתמש pentobarbital להרדים עכברים להליך זה, אך תרופה זו אינה זמינה בכל המקומות.
- בשלב הבא, לשטוף את הלבבות העקורים בDPBS סטרילי המכיל אנטיביוטיקה במכסת מנוע בתרבית רקמה (קבינט בטיחות ביולוגי). לסחוט את לבם מעט עם מלקחיים לנתח מעוקלים כדי להסיר כל דם שנותר מהם ולאחר מכן לשטוף את לבם בDPBS עוד פעם אחת.
- הסר את הפרוזדורים וannulus בין העליות וחדרים מהלב (מבנים אלה מכילים תאים כמו melanocyte-) ולמקם את דגימות רקמה שהוסרו בצלחת 35 מ"מ.
- חותך את הלבבות לחתיכות קטנות בעזרת מספריים וכוח מעוקליםps אז ולהוסיף 6-8 מ"ל של .0.5% פתרון טריפסין לצלחת. ואז דגירה המנות ב37 מעלות צלזיוס למשך 45-60 דקות.
- עכשיו, בצע את השלבים מהתהליך שתואר לעיל החל מהצעד 3.6 ואילך.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
הפרוטוקול המתואר במאמר זה הוא טכניקה משופרת בהשוואה לזו שפורסמנו בעבר לבידוד מלנוציטים לב מהלב העכברי. הליך זה מעסיק את השימוש של סמני ניאון מונעים על ידי Cre-recombinase אנזים ספציפי סינתזת מלנין לתייג תאים כמו melanocyte-לב. חשוב להשתמש בסמן כדי לתייג מלנוציטים לב כאשר עובדים עם תאים עובריים או בילוד טרי מבודדים, מאז ההבדלים מורפולוגיים המבדילים מלנוציטים לב מmyocytes פרוזדורים עדיין לא פיתחו (איור 1 א). כפי שניתן לראות באיור 1 א כאשר צעד הבידוד עבר בהצלחה, מספר גדול למדי של myocytes פרוזדורים ומלנוציטים לב ידבק צלחת laminin המצופה עם רק כמה תאים שאינם חסיד. במקרה זה התאים חסיד יופיעו שטוחים בחלקו התחתון של המנה (ראשי החץ הצהובים איור 1 א, ראש חץ). מצד השני, כאשר proceהדורה לא עובדת טוב רוב התאים יהיה לא חסיד ולעתים קרובות נראית כדורי ומעוגלת כלפי מעלה (ראשי חץ אור כחולים, איור 1 א).
כאשר התאים המבודדים הם דמיינו באמצעות דימות פלואורסצנטי הירוק, ברור שתאים מלנוציטים לב ובו תאים נמצאים myocytes פרוזדורים (איור 1). כפי שצוין לעיל בפרוטוקול (צעד 3.9), fibroblasts יוסרו מהמאגר של תאי פרוזדורים מבודדים באמצעות נמוך בכוח צנטריפוגה שכדורי myocytes פרוזדורים הגדול יותר ומלנוציטים לב, אבל לא להפיל את fibroblasts הלב הקטן יותר. התאים המבודדים טרי עשויים כעת ניתן להשתמש להקלטות תא בודד אלקטרו (איור 2), ניתוח RNA התא בודד או מבחני ביוכימיים.
יש לנו גם תרבותי ומתוחזק תאי פרוזדורים בילוד או עובריים מבודדים תוך שימוש בפרוטוקול זה לעד 21 ימים. שימוש בתנאי התרבות מתואר בזהפרוטוקול, התאים כמו melanocyte-לב יהיו עוד יותר להבחין ולהתרבות, בעוד myocytes פרוזדורים נוטים להתנתק המנה ולמות בתוך 2-3 ימים לאחר שהם מבודדים. שמוצגים באיור 3 א הם מלנוציטים לב בריאים 5 ימים אחרי שהם היו מבודדים מלב עכבר בילוד. שים לב לחוסר כל myocytes פרוזדורים סביב תאים אלה (בניגוד לתאים המבודדים הטרי שמוצגים באיור 1). בנוסף, מלנוציטים לב אלה פיתחו תהליכים דנדריטיים נרחבים ודומים מאוד למלנוציטים עורית גם שהיו בתרבות לאותו המספר של ימים (איור 3 ב).
איור 1 נציג () דסק"ש ו( ב ') תמונות GFP של טרי iתאי solated פרוזדורים מעוברי (E19.5) גור עכבר DCT-Z / EG. החץ הלבן מזהה את melanocyte הלב בשני הפנלים. שים לב שללא סיוע של סמן פלואורסצנטי, melanocyte הלב קשה לזהות ולהבחין בין myocytes פרוזדורים (ראשי החץ צהובים) שצורף למנה. ראשי החץ הכחולים הבהיר מצביעים על תאי פרוזדורים שאינם מחוברים היטב לצלחת.
איור 2 DCT - / - מלנוציטים לב להפגין משך פוטנציאל פעולה ממושכת. הקלטות מהדק הנוכחיות מ () DCT לב +/- וDCT לב (ב) - / - תאים מדגימים הגדילו את משך פוטנציאל פעולה בהעדר DCT. פוטנציאל מנוחה של תא DCT +/- הוא -62 mV, בעוד DCT - / - התא יש פוטנציאל מנוחה שלmV -60. לשכפל, ברשות, מאל לוין ואח. J. Clin. להשקיע. 119, 2,920-2936 (2009).
איור 3 נציג תמונות של מבודד () תאים כמו melanocyte-לב ומלנוציטים עורית (B). מלנוציטים היו מבודדים מהלב והעור של עכברים בילוד (P1), בהתאמה, ולאחר מכן בתרבית למשך 5 ימים.
.4 תאי DCT להביע איור לאכלס את הלב. (א) בהכלאה באתר של לב עכבר E13.5 מראה ביטוי DCT(חיצים מלאים) סביב מערכת ההפעלה עורק ריאה (ראש החץ הפתוח). הכתמה (B) Immunofluorescent של תאי DCT-חיוביים (ראשי חץ) בתוך ורידי הריאה. (C) צביעת X-gal של תאי DCT-חיוביים באטריום האחורי של עכבר E16.5 לב DCT-LacZ (חיצים). צביעת X-gal (ד ') בE17.5 לב עכבר DCT-LacZ לאורך מחיצת RA באזורים של ovale הנקב, OS סינוס כלילית ווריד נבוב נחותים; בקנה מידה הבלעה = 500 מיקרומטר. (ה) עכבר למבוגרים (P60) כתוצאה מחציית DctCre +/- וR26R עכבר מדגים תאי LacZ חיוביים (חיצים) בתוך ורידי הריאה ואטריום שמאל. תאים (F) DCT-חיוביים זוהו על ידי צביעת immunofluorescent (חיצים) על האנדותל של עורק ריאה אנושי הוסר בניתוח. סולם = 500 מיקרומטר בכל הלוחות מלבד לוחות (B, D; בקנה מידה = 100 מיקרומטר) ופנל (F; בקנה מידה = 50 מיקרומטר). קיצורים: PV, עורק ריאה; LA, עזב אטריום; Ao, אב העורקים; הרשות הפלסטינית, pulmoעורק nary; דלקת מפרקים שגרונית, עלייה ימנית; IVC, וריד נבוב נחותה; FO, ovale נקב; CS, סינוס כלילי. לשכפל, ברשות, מאל לוין ואח. J. Clin. להשקיע. 119, 2,920-2936 (2009).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מלנוציטים לב נמצאים במקומות אנטומיים בתוך הלב, כי בדרך כלל לגרום לטריגרים הפרעות קצב פרוזדורים. אזורים אלה כוללים את ורידי ריאה, annulus בין העליות והחדרים, המבואה האחורית עזב וovale הנקב (איור 4). כדי להבין את תפקיד תאים אלה לשחק בarrhythmogenesis, אנו מפתחים טכניקות לבודד אותם וללמוד הפיסיולוגיה שלהם. עם זאת, אנחנו מוכרים את זה השיפור בטכניקה זו כדי להניב כמויות בריאים וגדולות יותר של מלנוציטים לב תאפשר מחקרים נוספים כדי לחקור את התגובה של מלנוציטים לב לגירויים חיצוניים. יתר על כן, טכניקות בידוד משופרות עשויות גם לאפשר מחקרים כדי לחקור את האינטראקציה של מלנוציטים לב עם myocytes פרוזדורים במהלך פיזיולוגיה ומחלות נורמליות.
מאמר זה מתאר הליך לבידוד תאים כמו melanocyte קיימא מלב העכבר שפיתחנו מפרוטוקולים שנועדו Isolאכלתי מלנוציטים מהעור. השלב הקריטי בפרוטוקול זה הוא לחילוץ התאים כמו melanocyte הליכה מהלב. תוך בידוד מלנוציטים לב מלב בילוד הוא יחסית ישר קדימה, חילוץ מלנוציטים לב מהלב הבוגר הוא הרבה יותר קשה עקב הכמות המוגברת של סיסטיק ביניים. בפרוטוקול זה אנו משמשים עיכול טריפסין כדי לחלץ תאים כמו melanocyte הליכה מהלב הבוגר. לפתח פרוטוקול זה בדקנו כמה שילובים אנזימטיות שונים שכללו ריכוזים שונים של טריפסין, collagenase, וdispase.
מצאנו כי טיפול בפרוזדורים בילוד עם שילוב של collagenase (ל30 דקות הראשונות) ואחריו טריפסין (לדקות 15 הבאות) בתחילה הופק תשואות גבוהות יותר של תאים כמו melanocyte-, אך בתאים המבודדים היו פחות בריאים לירידה בכדאיות. מצד השני, מערכת עיכול עם טריפסין לבד הפיקה מספר מתון של תאים כמו melanocyte בריאים ממ 'לבבות עכבר שבמקום. לכן, אנו ממליצים רק באמצעות טריפסין לבודד תאים כמו melanocyte הליכה מלב עכברי בוגר. בנוסף, מצאנו כי במרץ triturating סלארי מיוצר לאחר טריפסין עיכול של לבבות עכבר בוגרים שיפר את התשואה של תאים כמו melanocyte קיימא. אנחנו צריכים להזכיר לטריפסין כי הפוטנציאל לעיכול באופן חלקי ערוצי קרום או נושאי מטען, וזה עשוי להשפיע על צפיפות ערוץ בעת ביצוע מחקרי מהדק תיקון. אמנם יש לנו לא בוצע ניתוח קפדני כדי לקבוע אם מערכת עיכול טריפסין משפיעה על צפיפות הזרם של תאים כמו melanocyte-מבודדים, בוגרים שלא שמת לב כל השפעה משמעותית על זרמים או פוטנציאל פעולה במחקרים שבוצענו תוך שימוש בפרוטוקול זה.
תאים כמו melanocyte-לב הם אוכלוסייה מאוד דלילה תא בלב (פחות מ 0.1% מכל תאי פרוזדורים) שמורפולוגית דומה מלנוציטים עורית (איור 1 ואיור 3 </ Strong>). בשל העובדה שיש מעט יחסית מלנוציטים לב נוכחים בלב; עד לאחרונה היינו מסוגלים להשתמש בם עבור מבחני תא בודד (כלומר הקלטת הידוק תיקון או תא בודד PCR) בלבד. עם זאת, השגנו כמויות גדולות יותר של מלנוציטים לב על ידי איגום 20-30 בילוד, או 5-8 לבבות בוגרים, ונמצא בגישה זו מייצרת כמות מספקת של רקמה לביצוע immunoblot או מבחני ביוכימיים. יתר על כן, בהתחשב במספר הנמוך של תאים כמו melanocyte-בלב העכברי, כדי לשפר את התשואה של תאים אלה לאחר שהם היו מבודדים לעתים קרובות אנו נציב מעגליים 15-20 מ"מ, טפלון מוסיף במנות 35 מ"מ באמצעות גריז ואקום מעוקר . אז יכולים להיות ממוקמים בתוך התאים מוסיף לצמצם את שטח הציפוי ומגבירים את הצפיפות שלהם. טפלון באמצעות מכניס גם משפר את יכולת הקיום של תאים כמו melanocyte-הבא הבידוד שלהם ובתקופה הציפוי גם כן.
כמה melano לביש לי תאים כמו cyte-בידוד המורפולוגיה הבא דו קוטבי, אשר אנו מאמינים מייצגים מצב פחות מובחן של תאים אלה. בנוסף, מצאנו כי נראה culturing מלנוציטים לב במשך 3 ימים הבאים בידוד כדי לגרום לבידול נוסף של פנוטיפ כמו melanocyte-שבו התאים מתחילים ליצור דנדריטים. יש לנו גם מצאנו בפרוטוקול זה מניב תאים כמו melanocyte הליכה מלב בוגר שאפשר לקיים עד 10 ימים בתרבות. עם זאת, מעבר ל10 ימים בתאים כמו melanocyte תרבות מבודד מלב בוגר יפסיקו מתרבים ועלולה להפוך מזדקן. מלנוציטים לב מבודדים והמצופים עשויים לשמש לניתוח אלקטרו סלולארי או ניתוח אחר מולקולרי / סלולארי ביולוגי, כגון אפיון RNA או מחקרים כדי להעריך את התגובות הפיזיולוגיות שלהם לגורמים חיצוניים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
יש לנו מה למסור.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות בפרס R01 HL105734 לVVPMDL נתמך, בין שאר, על ידי המכון הלאומי לבריאות בקריירה מחקר פרס K08 HL094748. VVP הוא חוקר חדשני של איגוד הלב האמריקאי נתמך על ידי מענק 11IRG900384.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in water |
| DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock conc.: 1x Working conc.: 1x |
| Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock conc.: 100x Working conc.: 1x |
| Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working conc.: 4% |
| TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | Dissolve in DMSO Stock conc.: 3.2 μM Working conc.: 32 nM |
| Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | Dissolve in DPBS Stock conc.: 0.1 mg/ml Working conc.: 1 μg/ml |
| Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | Dissolve in DPBS Stock conc.: 0.5 mM Working conc.: 5 μM |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | Dissolve in 10 mM acetic acid Stock conc.: 1 mg/ml Working conc.: 5 μg/ml |
| Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Dissolve in water Stock conc.: 4 ng/μl Working conc.: 4 ng/ml |
References
- Hornyak, T. J., et al. Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation. Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).
- Yonetani, S., et al. In vitro expansion of immature melanoblasts and their ability to repopulate melanocyte stem cells in the hair follicle. J. Invest. Dermatol. 128, 408-420 (2008).
- Levin, M. D., et al. Melanocyte-like cells in the heart and pulmonary veins contribute to atrial arrhythmia triggers. J. Clin. Invest. 119, 3420-3436 (2009).
- Patel, V. V. Novel insights in the cellular basis of atrial fibrillation. Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 8, 907-915 (2010).
- Sviderskaya, E. V., et al. Functional neurons and melanocytes induced from immortal lines of postnatal neural crest-like stem cells. FASEB J. 23, 3179-3192 (2009).
- Sviderskaya, E. V., et al. P16Ink4a in melanocyte senescence and differentiation. J. Natl. Cancer. Inst. 94, 446-454 (2002).
- Cook, A. L., et al. Human melanoblasts in culture: Expression of BRN2 and synergistic regulation by fibroblast growth factor-2, stem cell factor, and endothelin-3. J. Invest. Dermatol. 121, 1150-1159 (2002).
- Fang, D., et al. Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells. Stem Cells. 24, 1668-1677 (2006).
- Brito, F. C., et al. Timeline and distribution of melanocyte precursors in the mouse heart. Pigment Cell Melanoma Res. 21, 464-470 (2008).
- Yajima, I., et al. The isolation of heart melanocytes is specified and the level of pigmentation in the heart may correlate with coat color. Pigment Cell Melanoma Res. 21, 471-476 (2008).
