Una lectura molecular de adaptación a largo plazo olfativa en<em&gt; C. elegans</em

Chao He; Jin I. Lee; Noelle L'Etoile; Damien O'Halloran

doi:10.3791/4443

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Artículo de método

Una lectura molecular de adaptación a largo plazo olfativa en

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DOI:

10.3791/4443

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22 de diciembre de 2012

Chao He¹ , Jin I. Lee² , Noelle L'Etoile³ , Damien O'Halloran¹

¹Department of Biological Sciences and Institute for Neuroscience, George Washington University, ²Fred Hutchinson Cancer Research Center, ³Department of Cell and Tissue Biology, University of California San Francisco

En este artículo

Resumen

Aquí describimos una lectura molecular de adaptación a largo plazo olfativo en Caenorhabditis elegans. La proteína quinasa G, EGL-4, es necesario para las respuestas de adaptación estables en el par de neurona sensorial primaria llamada AWC. Durante la exposición prolongados olor EGL-4 transloca del citosol al núcleo de la AWC.

Resumen

Durante la estimulación sostenida neuronas sensoriales más adaptarán su respuesta al disminuir su sensibilidad a la señal. La respuesta de adaptación ayuda a la atención de forma y también protege las células de la sobre-estimulación. La adaptación en el circuito olfatorio de C. elegans fue descrita por primera vez por Colbert y Bargmann ^1,2. Aquí, los autores definieron los parámetros del paradigma de la adaptación olfativa, que se utiliza para diseñar una pantalla genética para aislar mutantes defectuosos en su capacidad para adaptarse a los olores volátiles detectados por las células amphid Ala tipo C (AWC) neuronas sensoriales. Cuando wildtype C. elegans animales se exponen a un atractivo AWC-detectados olor ³ de 30 min se adaptarán su capacidad de respuesta al olor y entonces ignorar el olor en la adaptación de un ensayo de quimiotaxis de comportamiento para ~ 1 hr. Cuando wildtype C. elegans animales se exponen a un atractivo AWC-detectados olor de ~ 1 hr luego de ignorar el olor en la adaptación de achemotaxis comportamiento ensayo para ~ 3 h. Estas dos fases de adaptación olfativa en C. elegans fueron descritos como de corto plazo adaptación olfativa (inducido después de 30 min de exposición olor), y adaptación a largo plazo olfativo (inducido después de 60 min de exposición olor). Un trabajo posterior de L'Etoile et al., ⁴ descubierto una proteína kinasa G (PKG) llamado EGL-4 que se requiere tanto para la adaptación olfativa a corto plazo ya largo plazo en las neuronas de AWC. El EGL-4 proteína contiene una secuencia de localización nuclear que es necesaria para la respuesta a largo plazo de adaptación olfativas pero prescindible para respuestas a corto plazo de adaptación olfativas en el AWC ^4. Mediante el etiquetado de EGL-4 con una proteína fluorescente verde, que era posible visualizar la localización de EGL-4 en la AWC durante la exposición prolongada olor. El uso de este completamente funcional GFP-etiquetados EGL-4 (GFP :: EGL-4) molécula hemos sido capaces de desarrollar una lectura molecular de adaptación a largo plazo olfativo en la AWC ^5. El uso de este molecular lectura de la adaptación olfativa hemos sido capaces de realizar ambas pantallas genéticas de avance y retroceso para identificar animales mutantes que exhiben defectuosos patrones de localización subcelular de GFP :: EGL-4 en la AWC ^6,7. Aquí se describe: 1) la construcción de GFP :: EGL-4 animales que expresan; 2) el protocolo para el cultivo de los animales para los ensayos a largo plazo inducida por la translocación olor nucleares, y 3) la puntuación de la largo plazo olor inducida evento translocación nuclear y la recuperación (re-sensibilización) de la GFP nuclear :: EGL-4 Estado.