Separazione di tipi di cellule della spermatogenesi Usando STA-PUT velocità di sedimentazione

Jessica M Bryant; Mirella L Meyer-Ficca; Vanessa M Dang; Shelley L Berger; Ralph G Meyer

doi:10.3791/50648

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Articolo metodologico

Separazione di tipi di cellule della spermatogenesi Usando STA-PUT velocità di sedimentazione

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DOI:

10.3791/50648

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9 ottobre 2013

Jessica M Bryant¹^,² , Mirella L Meyer-Ficca³ , Vanessa M Dang¹ , Shelley L Berger¹^,⁴^,⁵ , Ralph G Meyer³

¹Department of Cell and Developmental Biology, University of Pennsylvania, ²Biomedical Graduate Studies, University of Pennsylvania, ³Department of Animal Biology and Center for Animal Transgenesis and Germ Cell Research, University of Pennsylvania, ⁴Department of Genetics, University of Pennsylvania, ⁵Department of Biology, University of Pennsylvania

In questo articolo

Sommario

Il metodo STA-PUT consente la separazione delle diverse popolazioni di cellule spermatogenesi in base alle dimensioni e densità.

Abstract

Spermatogenesi mammifero è un processo di differenziazione complesso che avviene in più fasi nei tubuli seminiferi dei testicoli. Attualmente, non esiste un sistema di coltura cellulare affidabile consentendo differenziazione spermatogenesi in vitro, e la maggior parte degli studi biologici di cellule spermatogenesi richiedono raccolta dei tessuti da modelli animali come il topo e nel ratto. Poiché il testicolo contiene numerosi tipi di cellule - sia non spermatogenesi (Leydig, Sertoli, mieloidi e cellule epiteliali) e spermatogenesi (spermatogoni, spermatociti, spermatidi rotondi, a condensazione spermatidi e spermatozoi) - Studi dei meccanismi biologici coinvolti nella spermatogenesi richiedono l'isolamento e arricchimento di questi tipi di cellule differenti. Il metodo STA-PUT consente la separazione di una popolazione eterogenea di cellule - in questo caso, dai testicoli - attraverso un gradiente lineare BSA. Tipi di cellule individuali sedimentano con velocità di sedimentazione diversa a seconda cedimensioni ll, e le frazioni arricchito da diversi tipi di cellule possono essere raccolti e utilizzati in ulteriori analisi. Mentre il metodo STA-PUT non comporta frazioni altamente puri di tipi di cellule, ad esempio come possono essere ottenuti con determinati metodi di separazione delle cellule, esso fornisce un rendimento molto più elevato di cellule totali in ogni frazione
(~ 1 x 10 ⁸ cellule / tipo di cellula spermatogenesi da una popolazione iniziale di 7-8 x 10 ⁸ cellule). Questo metodo alto rendimento richiede solo vetreria specializzata e può essere eseguita in qualsiasi ambiente freddo o grande frigorifero, che lo rende un metodo ideale per i laboratori che hanno accesso limitato alle attrezzature specializzate come una fluorescenza attivato cell sorter (FACS) o elutriator.

Introduzione

Spermatogenesi mammifero è un processo di differenziazione complesso che avviene in più fasi nei tubuli seminiferi dei testicoli ^1. In breve, staminali come gli spermatogoni che risiedono vicino l'epitelio del tubulo seminifero divide e differenziarsi in spermatociti, che poi subiscono le divisioni meiotica. Dopo meiosi è completa, le cellule aploidi risultante o spermatidi rotondi, subiscono spermiogenesi, un processo di differenziazione che coinvolge lo spargimento del citoplasma e compattazione del nucleo. Spermatidi gradualmente sviluppano un flagello e subiscono l'allungamento e la condensazione del nucleo, producendo allungamento e poi a cond....