Havaya duyarlı bir titanyum ve vanadyum anti-kanser ajanlarının sentezi için bir yöntem olup, MTT testi ile insan kanser hücre çizgisi karşı sitotoksik aktivitenin değerlendirilmesi ile birlikte tarif edilmiştir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
MTT deneyi ile sentez ve Sitotoksisite Değerlendirilmesi: Anticancer Metal Kompleksleri
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Titanyum (IV) ve vanadyum (V) komplekslerinin yüksek ölçüde kuvvetli anti-kanser ajanlardır. Bunların sentezinde bir meydan okuma hidrolitik kararsızlık anlamına gelir, bu nedenle bunların hazırlanması bir inert atmosfer altında yapılmalıdır. Bu komplekslerin Antikanser aktivitesinin değerlendirilmesi MTT deneyi ile elde edilebilir.
MTT deneyi, bu canlı hücreler maruz kaldığı zaman formazan MTT molekülün enzimatik azalma dayanan kolorimetrik canlılık deneyidir. Indirgeme sonucu, MTT molekülünün bir renk değişimdir. Bir kontrole göre emme ölçümleri bileşik, anti-kanser aktivitesi ve IC50 değerlerine çevrilmiştir bir test edilen bileşiğin, değişen konsantrasyonları ile tedavi sonrası canlı kalan kanser hücrelerinin yüzdesini belirlemek. MTT deneyi doğruluğu, hız ve nispi basitliği nedeniyle sitotoksisite çalışmalarda yaygın olarak yaygındır.
Burada biz preHücre plakaların hazırlanması hücreleri ile inkübe bileşiklerin dahil olmak üzere hava duyarlı metal bazlı ilaç ve hücre canlılığı ölçümlerin sentezi için ayrıntılı bir protokol gönderilen, MTT deneyi ve IC50 değerlerinin tayini kullanılarak canlılığı ölçümleri.
Giriş
Kemoterapi hala çeşitli kanser hastalıkları için klinikte kullanılan tedavilerin temel derslerden biridir ve araştırma böylece büyük miktarda yeni ve geliştirilmiş antikanser ilaçlar geliştirmek amacı ile dünya çapında yapılır. Bu tür çalışmalar, daha çok in vitro sitotoksik biyolojik özelliklerinin değerlendirilmesi ardından bileşiklerin tasarımı ve hazırlığı ile, kimyasal düzeyinde başlar. Hücre canlılığı, hücresel aktivite 1-2 ile ilgili bilgi sağlayacak çeşitli deneyleri ile değerlendirilebilir.
Cisplatin yaygın olarak testis ve yumurtalık kanserlerinde 3-4 için ağırlıklı olarak etkili bir tedavi olarak ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
- V hazırlanması (V) kompleksi (Şekil 2); 18 davranış bir eldiven kutu içinde 1,1-1,4 adımları, bir eldiven kutusu mevcut değilse, alternatif atlayın 2 (2,1-2,6) adım.
- Ligandların 0,42 mmol, kuru THF H 2 L çözülür ve THF içinde VO eşdeğer miktarda eden karıştırılan bir çözeltiye (O i Pr) 3 ekleyin.
- 15 dakika boyunca oda sıcaklığında reaksiyon karışımını karıştırın ve vakum altında uçucu maddeler uzaklaştırılmıştır.
- Soğuk hekzan ekleyin ve vakum altında çıkarın. Koyu mor renkli bir toz kantitatif bir verimle elde edilmelidir.
- Bir Eppendorf şişede elde edilen bileşik 8 mg tartılır. 3. adıma....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu kompleksler, yerleşik prosedürlere 18,28 ve saflığı NMR ve element analizi ile değerlendirilebilir göre hazırlanmıştır.
MTT deneyi alınan veriler, bileşiğin 18,21 sitotoksisitesini değerlendirmek için analiz edilir. İlk olarak, tüm diğer değerleri işlenmemiş kontrol absorbans değerinin çıkarılması gerçekleştirilir. İkinci olarak, çözücü THF kontrol değeri bileşiği herhangi bir büyüme inhibe edici olarak ilave edildi,% 100 canlılığı ayarlanır. Diğer tüm değerler kontr.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu yazıda tarif edildiği gibi bir yöntem, biyolojik hücre canlılığı deneyi ile, kimyasal sentez birleştirir. Canlı hücreler ile ilgili herhangi bir biyolojik yöntemlerle olduğu gibi, laminar bir kaput çalışma ve steril organik çözücülerin kullanılması dahil olmak üzere steril koşullar korumak için çok önemlidir. Ayrıca, hidrolitik olarak stabil olmayan metal bazlı ilaçların hazırlanması ve depolanması için olan bir eldiven kutusu ya da bir Schlenk hat teknikleri kullanılması gerekmektedir, atıl koşullar altında gerçekle.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarları var beyan.
Teşekkürler
Finansman Avrupa Topluluğu Yedinci Çerçeve Programı (FP7/2007-2013) kapsamında Avrupa Araştırma Konseyi alındı / ERC Hibe sözleşmesi hiçbir [239603]
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktif/Malzeme | |||
| fetal sığır serumu (FBS) | Biyolojik Endüstriler | 04-007-1A | |
| Hekzan AR | Gadot | 830122313 | Bir solvent kurutma sistemi kullanılarak kurutulmuştur |
| HT-29 hücre hattı | ATCC | HTB-38 | |
| İzopropanol AR | Gadot | 830111370 | |
| L-glutamin | Biyolojik Endüstriler | 03-020-1B | |
| MTT | Sigma-Aldrich | M5655-1G | |
| Penisilin / streptomisin antibiyotikler | Biyolojik Endüstriler | 03-031-1B | |
| RPMI-1640 fenol kırmızısı ile L-glutamin | Sigma-Aldrich | R8758 | |
| RPMI fenol kırmızısı olmadan | Biyolojik Endüstriler | 01-103-1A | |
| Tetrahidrofuran (THF) AR | Gadot | 830156391 | bir solvent kurutma sistemi kullanılarak kurutulur |
| Ti(OiPr)4 | Sigma-Aldrich | 205273-500ML | neme duyarlı |
| Tripsin/EDTA | Biyolojik Endüstriler | 03-052-1B | |
| VO(OiPr)3 | Sigma-Aldrich | 404926-10G | nem sensitive |
| equipment | |||
| >12 kanallı pipet 30-300 & mu; l | Thermo Scientific | ||
| 12 kanallı pipet 5-50 μ l | Finnpipet | ||
| 75 cm 2< / sup> şişesi | NUNC | 156472 | |
| kapaklı 96 oyuklu plaka (düz tabanlı) | NUNC | 167008 | |
| CO2 İnkübatör | Bağlayıcı | APT.line C150 | |
| Sayaç odası | Marienfeld-Superior | 650030 | |
| Eppendorf şişesi | KARTELL | ||
| Torpido gözü | M. Braun | ||
| Laminer akış başlığı | ADS LAMINAIRE | OPTIMALE 12 | |
| Mikroplaka okuyucu spektrofotometresi | Bio-Tek | El-800 | |
| Mikroskop | Nikon | Eclipse TS100 | |
| Pipet 20-200 μ l | Finnpipette | ||
| Pipet 5-50 μ l | Finnpipet |
Kaynaklar
- Niles, A. L., Moravec, R. A., Riss, T. L. Update on in vitro cytotoxicity assays for drug development. Expert Opinion on Drug Discovery. 3, 655-669 (2008).
- Hatok, J., et al. In vitro assays for the evaluation of drug resistance in tumor ce....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
