Makrofajlar uzun doğal ve adaptif immün yanıtları kritik bir bileşeni olarak kabul edilmiştir. Makrofajlar ve mikrop arasındaki etkileşimin, evrimsel genetik ve biyokimyasal yönleri ile ilgili bilginin son patlama makrofajlara bilimsel ilgi yenilenmiştir. Bu makalede, fare kemik iliği makrofajları ayırt etmek için bir yöntem tarif edilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kemik İliği Makrofaj üretim kaynaklı
Bu makalede
Özet
Özet
Makrofajlar, doğal ve adaptif immün yanıtları kritik bileşenleri ve bunlar nedeniyle güçlü mikrobisidal faaliyetlerinin yabancı işgalcilere karşı ilk savunma hattı vardır. Makrofajlar, tüm vücuda yaygın şekilde dağıtılmıştır ve lenfoid organlarda bulunurlar, karaciğer, akciğer, gastrointestinal sistem, merkezi sinir sistemi, kemik ve deri. Çünkü onların yeniden bölme içinde, bunlar, fizyolojik ve patolojik işlemler geniş bir yelpazede katılabilir. Makrofajlar microenvironmental değişiklikleri tanımak ve doku dengesini korumak için mümkün oldukça çok yönlü hücrelerdir. Çok sayıda patojenler, hayatta çoğaltmak ve enfekte insan ve hayvanları hem vücutta yayılmasına için Truva atları gibi makrofajlar kullanmak için mekanizmalar gelişmiştir. Konak-patojen etkileşimleri, evrimsel genetik ve biyokimyasal açıdan ilgi son patlama makrofajlar ilgili bilimsel ilgi yeniledi. Burada, bir tarifkonukçu-patojen etkileşimlerine okuyan hem de diğer işlemler için makrofajların sayıda sağlayacak faregiller kemik iliğinden izole makrofajlar ve yetiştirmek için prosedür.
Giriş
Makrofaj fonksiyonunun önemli bir yönü doğal ve adaptif bağışıklık rolleri olduğunu. Çünkü asal partiküller, bakteri veya parazit fagosite kapasiteleri, makrofajlar yabancı işgalcilere karşı ilk savunma hattı vardır. Bir kez içselleştirilmiş, mikroplar fagolizozomları içinde parçalanırlar. Aynı zamanda makrofajlar, T lenfositler ve diğer bağışıklık hücrelerinin için işe alım sinyalleri ve antijenlerini gönderebilirsiniz. Makrofajlar monositlerden elde edilmiştir. Monositler miyeloid kök hücrelerden kemik iliği ortaya çıkan ve makrofajlara ayırt periferik kan ve çeşitli dokulara göç ederler. Sağlıklı yetişkin fare, çeşitli organ ve dokularda (Tablo 1),
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Etik Bildirimi
Kurallara uygun olarak Aix-Marseille Üniversitesi'nden hayvan taşınması için protokol bizim kurumsal Hayvan Etik Kurul "Conseil Scientifique du Centre de Formation et de Recherche Deneysel Médico-chirurgical" tarafından onaylandı (CFREMC, Eric Ghigo Proje izni 10-300.122.013) bir Décret N 1987/10/19 arasında 87-848 °. Deneyler Faculté de Médecine de la Timone (Eric Ghigo için Deneme İzni numarası 13.385) gerçekleştirildi.
1.. Malzeme ve Kültür Ortamı Hazırlama
- Iki forseps, iki makas, iki cerrahi bıçaklar, bir havan ve havan sterilize edin.
- % 10 fetal buzağı serumu (FCS), 2 ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu yöntemin amacı, kolayca birkaç gün makrofajların çok sayıda elde etmek olmuştur. Kemik iliği hücre hazırlama, Şekil 1 'de gösterilmiştir. Arka bacak kemikleri toplanır ve bir havanda ezildi. Makrofajlar yerleşik kemik iliği hücre hazırlama çıkarıldı sonra, kemik iliği hücreleri, GM-CSF (Gün 0) ile inkübe edildi. 3 gün sonra, kültürden önce yuvarlak ve nonadherent olan hücreler, makrofajlar içine farklılaştırmak ve (Şekil 1A) uymak başlar. F4/80 sitometri analizi ile ve HLA-DR bel.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada tarif edilen protokol BMDMs çok sayıda üretilmesi için bir yöntem göstermektedir. BMDM birincil hücreler ve olgunlaşmamış makrofaj hücre hatları, aksine, olgun vardır, çünkü biyolojik fonksiyonunu ve monositler ayırt makrofajların özelliklerine sahiptir. BMDMs genetik tarama (RNAi), ilaç tarama, fonksiyonel çalışmalar, konak-patojen etkileşimi çalışmaları ve soruşturma diğer birçok alanda kullanılabilir.
Burada sunulan işlem çok basittir ve herhangi bir özel ekipman gerektirmez, bu ne.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Hiçbir çıkar beyan çatışmalar vardır.
Teşekkürler
Bu çalışma CNRS (RESİMLER EG 2012-2014) tarafından ve Regione Campania (LR n.5, Giovanna Mottola 2002/03/28) bir hibe ile desteklenmiştir. Filippo Conti Bilimsel İşbirliği Vakfı'' Infectiopole Sud bir üyesidir.'' Nicola Boucherit Araştırma ve Teknoloji Bakanlığı Fransız bir adam olduğunu. Finansman kaynakları çalışma tasarımı, veri toplama, veri analizi, yayınlamak kararı, ya da yazının hazırlanmasında hiçbir rolü vardı.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco Yaşam Teknolojileri | 21969-035 | |
| Fetal Buzağı Serumu | Gibco Yaşam Teknolojileri | 10270 | |
| Penisilin / Streptomisin | Gibco Yaşam Teknolojileri | 15070 | |
| Glutamin | Gibco Yaşam Teknolojileri | 25030-024 | |
| PBS (10x) | Lonza | BEM515F | |
| Kırmızı Kan Hücresi Lizisi tampon | Sigma | R7757 | |
| Hücre süzgeci 70 & mu; m Naylon | BD Falcon | 352350 | |
| Hücre süzgeci 40 μ m Naylon | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml tüpler | herhangi bir tedarikçi | n/a | |
| 15 ml tüpler | herhangi bir tedarikçi | n/a | |
| Petri kapları (100/20 mm) | herhangi bir tedarikçi | n/a | kültürle işlenmiş |
| Petri kapları (35/10 mm) | herhangi bir tedarikçi | n/a |
Kaynaklar
- Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited. J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).
- Van Furth, R. Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderm....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
