Neuronale Plastizität ist eine zunehmend erkannt, aber unzureichend verstanden Funktion des Magen-Darm (GI-Trakt). Hier im Beispiel der menschlichen Bauchspeicheldrüse, stellen wir einen in vitro-Assay Neuroplastizität für die Untersuchung der neuronalen Plastizität im GI-Trakt sowohl morphologischen und funktionellen Niveau.
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Methodenartikel
Simulation von Bauchspeicheldrüsenneuroplastizität:
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Neuroplastizität ist ein inhärentes Merkmal des enterischen Nervensystem und Magen-Darm-(GI) Innervation unter pathologischen Bedingungen. Allerdings bleibt die pathophysiologische Rolle der Neuroplastizität in GI-Erkrankungen bekannt. Neuartige experimentelle Modelle, die Simulation und Modulation der Neuroplastizität GI erlauben kann verbesserte Wertschätzung des Beitrags der Neuroplastizität insbesondere GI Krankheiten wie Bauchspeicheldrüsenkrebs (PCA) und chronischer Pankreatitis (CP) zu ermöglichen. Hier stellen wir ein Protokoll für die Simulation von Bauchspeicheldrüsen neuroplasticity unter in vitro Bedingungen mit neugeborenen Rattenhinterwurzelganglien (DRG) und Plexus myentericus (MP) Neuronen. Diese Dual-Neuron-Ansatz ermöglicht nicht nur die Überwachung der beiden Orgel intrinsische und extrinsische-Neuroplastizität, sondern auch ein wertvolles Werkzeug, um neuronale und gliale Morphologie und Elektrophysiologie zu beurteilen. Darüber hinaus ermöglicht es funktions Modulation der mitgelieferten Mikroumgebungs Inhalte für das Studium ihrer impact auf Neuroplastizität. Einmal eingerichtet, ist die vorliegende Neuroplastizität Assay trägt das Potenzial, für das Studium der Neuroplastizität in jedem GI Orgel.
Einleitung
Veränderungen im Magen-Darm-(GI) Nerven Morphologie und Dichte haben die Aufmerksamkeit der Gastroenterologen und Pathologen für eine lange Zeit gefangen, aber ihre Bedeutung für die Pathophysiologie der GI-Erkrankungen ist unbekannt 03.01. Tatsächlich sind mehrere hoch gemeinsamen GI-Erkrankungen wie Gastritis, Reflux-Ösophagitis, Kolitis, Divertikulitis, Appendizitis und mit erhöhter Innervationsdichte in entzündeten Gewebebereiche 1 zugeordnet. Es wurde jedoch keine echte Aufmerksamkeit bisher auf die Mechanismen und Bedeutung der Neuroplastizität im GI-Trakt bezahlt. Sie morphologisch veränderten GI Nerven unterscheiden sich von normalen GI ....
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Protokoll
Alle Tierversuchsverfahren im Protokoll befolgen Sie die Tierpflege-Richtlinien der Technischen Universität München, Deutschland.
1. Medien / Auszug Vorbereitung
- Gewebehomogenisierung
Die Qualität der Homogenisierung Gewebe ist für den nachfolgenden Nachweis von neuroplastischen Veränderungen in kultivierten Neuronen. Hier wird empfohlen, die ein Homogenisator Gewebedissoziation ermöglicht ohne große Erhöhung der Gewebetemperatur.- Über 5 mm x 5 mm x 5 mm große Würfel von Pankreasgewebe direkt von -80 ° C bis flüssigem Stickstoff und in einer festen Phase im Gewebe homogenator. Die ideale homogenator würde das Ge....
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Ergebnisse
Morphologische Neuroplastizität
In der angegebenen Altersbereich von neugeborenen Ratten (P2-12) und den Einsaatdichten, MP und DRG-Neuronen bereits dichte neuronale Netze bauen nach 48 h (Abbildung 2A). Vergleich von Neuriten Dichte zwischen Neuronen in PCa, CP kultiviert und NP Extrakte zeigt größere Dichte von Neuriten-DRG-Neuronen in PCa-oder CP-Extrakte als NP-Extrakte (2A) 5. Wir bevorzugen insbesondere MP Neuronen für Messungen an .......
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Diskussion
Das vorliegende Protokoll soll die Methodik hinter der in-vitro-Assay Bauchspeicheldrüsenneuroplastizität, die kürzlich von unserer Arbeitsgruppe entwickelt wurde, um die Mechanismen der Neuroplastizität bei PCa und CP 5 studieren zu veranschaulichen. Das Protokoll beinhaltet einen dreitägigen Prozedur, die leicht angewendet werden können, sobald die Darsteller hat ausreichende Erfahrung bei der Isolierung und Kultur von DRG-und MP-Neuronen gewonnen werden. Darüber hinaus stellt es ein wertvolles Wer.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben keine konkurrierenden Interessen und keine finanziellen Angaben.
Danksagungen
Alle Autoren trugen in Richtung der Etablierung und Validierung des vorgestellten Assay und dem Entwurf des Manuskripts.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Poly-D-Lysinhydrobromid | Sigma-Aldrich | P1149 | |
| Ornithin/Laminin | Sigma-Aldrich | P2533/L4544 | |
| 13 mm Deckgläser | Merck | Zur Verwendung in 24-Well-Platten | |
| Dismembranator S | Sartorius | ||
| Anti-Beta-III-Tubulin-Antikörper | Millipore | MAB1637 | 1:200 |
| Anti-GFAP-Antikörper | DAKO | M0761 | 1:400 Konzentration |
| RIPA Puffer + Proteaseinhibitor | Beliebiger Lieferant | ||
| Neurobasales Medium | Gibco/Life Sciences | 21103-049 | |
| B-27 Supplement | Gibco/Life Sciences | 17504044 | Qualität von B-27 hängt bekanntlich von der Chargennummer |
| ab Gentamicin/Metronidazol | Beliebig Lieferant | ||
| Minimal Essential Medium | Gibco/Life Sciences | 31095-029 | |
| Hank' s Balanced Salt Solution (HBSS) | Gibco/Life Sciences | 24020133 | Verbessert die Kollagenase-Aktivität bei Gehalt an Ca/Mg-Kollagenase |
| Typ II | Worthington Biochemical | CLS-2 | Erhalten Sie Chargen mit mindestens 200 U/mg Aktivität |
| Trypsin-EDTA 0,25 % | Gibco/Life Sciences | 25200056 | |
| 4 % Paraformaldehyd | Jeder Lieferant | ||
| analySIS docu Software | Olympus |
Referenzen
- Demir, I. E., Schafer, K. H., Tieftrunk, E., Friess, H., Ceyhan, G. O. Neural plasticity in the gastrointestinal tract: chronic inflammation, neurotrophic signals, and hypersensitivity. Acta Neuropathol. 125, 491-509 (2013).
- Vasina, V., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
