Abstract
Eiwit-eiwit interacties mediëren meeste processen in de levende cel en controle homeostase van het organisme. Verminderde eiwit interacties kunnen leiden tot ziekte, waardoor eiwit interacties belangrijke drug targets. Het is dus zeer belangrijk deze interacties op moleculair niveau te begrijpen. Eiwit interacties worden bestudeerd met verschillende technieken, variërend van cellulaire en biochemische assays kwantitatieve biofysische bepalingen en deze kan worden uitgevoerd hetzij met volledige lengte proteïnen, met eiwitdomeinen of peptiden. Peptiden dienen als uitstekende tools waarmee eiwit interacties te bestuderen omdat peptiden gemakkelijk kan worden gesynthetiseerd en laat de focus op specifieke interactie sites. Peptide arrays mogelijk zijn om de interactie plaatsen tussen twee eiwitten en het screenen op peptiden die het doelwit eiwit binden voor therapeutische doeleinden. Ze laten ook een hoge doorvoersnelheid SAR studies. Voor de identificatie van bindingsplaatsen, een getypeerdcal peptide matrix bevat meestal gedeeltelijk overlappende 10-20 resten peptiden afgeleid van de volledige sequenties van één of meer partnereiwitten van de gewenste doeleiwit. Screening van de array voor het doeleiwit bindende onthult de bindende peptiden overeenkomend met de bindingsplaatsen in de partnereiwitten, op een gemakkelijke en snelle manier met slechts kleine hoeveelheid eiwit.
In dit artikel beschrijven we een protocol voor het screenen van peptide-arrays voor het in kaart brengen van de interactie plaatsen tussen een target eiwit en haar partners. Het peptide array is ontworpen op basis van de sequenties van de partner eiwitten rekening houdend met hun secundaire structuren. De arrays gebruikt in dit protocol waren Celluspots arrays bereid door Intavis Bioanalytisch Instruments. De array wordt geblokkeerd aspecifieke binding en vervolgens geïncubeerd met het onderzochte eiwit te voorkomen. Detectie met behulp van een antilichaam blijkt de binding peptiden die overeenkomen met de specifieke interactieplaatsen tussen de eiwitten.
Introduction
Eiwit-eiwit interacties mediëren meeste processen in de levende cel. Verminderde eiwit interacties kunnen leiden tot ziekte, waardoor eiwit interacties belangrijke drug targets. Het is dus zeer belangrijk deze interacties op moleculair niveau te begrijpen. Eiwit interacties worden bestudeerd met verschillende technieken, variërend van cellulaire en biochemische assays kwantitatieve biofysische bepalingen en deze kan worden uitgevoerd hetzij met volledige lengte proteïnen, met eiwitdomeinen of peptiden. Peptiden dienen als uitstekende tools waarmee eiwit interacties te bestuderen. Dit is omdat peptiden gemakkelijk worden gesynthetiseerd en laat het richten op een specifieke interactie plaats enerzijds en meerdere targets in high throughput wijze anderzijds 1,2. Peptide matrix screening is een snel, gemakkelijk te voeren werkwijze voor het verkrijgen van een grote hoeveelheid gegevens over de interactie van een doeleiwit met talrijke partners in korte tijd 3. In tegenstelling tot andere biochemische of biofysische werkwijzen voor het detecteren en analyseren van eiwit-eiwit interacties, peptide matrix screening vereist een zeer lage concentratie van eiwit en kan detecteren zeer zwakke binding. Peptide arrays kunnen worden gebruikt voor vele toepassingen in peptide-eiwit interacties, zoals in kaart brengen van eiwit-eiwit of receptor-ligand interactie plaatsen 4, homo- of hetero-oligomerisatie interfaces, karakteriseren antilichamen epitopen 5, bestuderen enzymactiviteiten 6 en high throughput structuur- activiteit (SAR) bestudeert 7. Voor een diepgaande review over peptide-array screening zie Katz et al. 4
Verschillende soorten peptide arrays momenteel bestaan. Er zijn twee belangrijke synthetische strategieën om peptide arrays: synthese van de peptiden voordat ze aan de vaste drager, of synthese van peptiden direct aan de vaste drager, meestal via de SPOT techniek 4,8. Hetpeptiden gesynthetiseerd op vaste drager gewoonlijk met 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) chemie 8. Onder de gemeenschappelijke synthetische schema zijn peptide bevestiging via de N-terminus (bijv JPT Pepstar arrays 9) en peptide bevestiging via de C-terminus (bijv PEPSCAN pepchip arrays 10, JPT pepspot arrays 9 en Intavis celluspot arrays 11) 4. De vaste drager kan variëren en dus ook de chemie van het peptide koppeling aan. Cys eindigende peptiden kunnen via de thiolgroep 12 worden bevestigd aan glasplaatjes. De N terminus van een peptide covalent gebonden aan een hydroxylgroep op het cellulose membraan door verestering van het aminozuur bevestigd 8.
Hier presenteren we een gedetailleerd protocol voor het screenen van peptide arrays als een methode voor het bestuderen van eiwit-eiwit interacties. De matrix we gebruikten de Celluspots array, die een micro-array met grote amount plekken (duplicaten tot 384 spots) op een kleine cellulose membraan ondersteund door een glasplaatje. Dit maakt het werken met lage hoeveelheden eiwitten en antilichamen en het verkrijgen van aanzienlijke hoeveelheid data per afzonderlijk experiment. Deze array bevat ook een hoge dichtheid peptide dat detectie van lage affiniteit binden toelaat. De matrix werd gebruikt voor het afbeelden van de STIL-CHFR interactie, die zeer belangrijk is voor het regelen van normale celproliferatie 13. Ongecontroleerde interactie tussen de twee eiwitten kan leiden tot de ontwikkeling van kanker. Door het in kaart brengen van deze interactie vonden we de specifieke bindingsplaats en bindende residuen 14. Dit maakt de weg vrij voor het ontwerpen van een rationele remmers dat deze interactie eiwit-eiwit te remmen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Het ontwerpen van een Peptide Array
- Verdeel de sequentie van het doeleiwit in gedeeltelijk overlappende peptiden 10-20 residuen. Bepalen hoeveel overlapping op de specifieke experiment en de middelen van de uitvoerende lab maar in principe hoe langer de overlap beter. Bij het ontwerpen van de peptiden rekening houdend met bekende secundaire structuur elementen in het eiwit dat verantwoordelijk is voor de interactie kan.
- Bestel het ontworpen peptide-array via commerciële leveranciers. Hier, gebruik peptiden covalent gebonden aan de matrix via de C-terminus.
2. blokkeren aspecifieke binding
- Maak een 50 mM Tris of fosfaatbuffer bevattende 0,05% Tween 20 (TBST / PBST) en op de gewenste pH met een afgemeten hoeveelheid HCl of NaOH (om precies ionsterkte kennen) en de gewenste ionsterkte met NaCl . Hier, gebruik een pH van 7,5 en een ionensterkte van 150 mM.
- Maak een blokkerende oplossing van2.5% (w / v) magere melkpoeder in TBST / PBST.
- Om niet-specifieke binding te voorkomen, dompel de array in 5 ml blokkeeroplossing. Incubeer de array voor 2-4 uur bij kamertemperatuur of overnacht bij 4 ° C op een schudinrichting.
3. incuberen met Protein
- Was de matrix eerst met 5 ml blokkerende oplossing gedurende 30 seconden en vervolgens tweemaal met 5 ml TBST / PBST gedurende 5 minuten op een shaker bij kamertemperatuur.
- Incubeer de matrix gewassen met 5 ml van His-gemerkt eiwit oplossing bevattende 2,5% (w / v) magere melkpoeder niet-specifieke binding te voorkomen. Hier gebruiken 4.5 uM eiwitoplossing (STIL 500-650) opgelost in de beschreven blokkerende oplossing.
OPMERKING: Meestal 5-10 uM eiwit worden gebruikt voor de screening, maar de eiwitconcentratie zelfs zo laag als 2-3 uM, afhankelijk van de bindingsaffiniteit en de lokale concentraties van de peptiden die aan de matrix gebonden (efficiëntie van de synthese). De buffer waarin het eiwitopgelost kan variëren, maar is gebruikelijk om het eiwit verdunnen met dezelfde blokkerende oplossing hierboven beschreven. - Incubeer de array in de eiwitoplossing gedurende 3-8 uur bij kamertemperatuur of overnacht bij 4 ° C.
4. incuberen met antilichaam
- Was de serie drie keer met 5 ml TBST / PBST. De eerste wasbeurt is 30 seconden, gevolgd door twee wasbeurten van 5 minuten shaker bij kamertemperatuur.
- Incubeer de matrix gewassen met 5 ml van verdunde HRP-geconjugeerd antilichaam (1: 1500) in een incubatiebuffer die dezelfde ingrediënten bevat in dezelfde concentraties als de blokkerende oplossing gedurende 1 uur op een schudinrichting bij kamertemperatuur. Het antilichaam kan ofwel het doeleiwit of tag bindt.
- Controlemetingen experimenten testen van de interactie van het antilichaam met peptiden van de array, vooral indien de array peptiden uit het doeleiwit (bijvoorbeeld voor oligomerisatie studies) door herhaaldelijk hetzelfde protocol zonder step 3, incuberen met het eiwit.
- Was de serie drie keer met 5 ml TBST / PBST. De eerste wasbeurt is 30 seconden, gevolgd door twee wasbeurten van 5 minuten shaker bij kamertemperatuur.
5. Het lezen van de Array
- Voeren chemiluminescentie ontwikkeling met een ECL-western blotting substraat kit.
- Voer de detectie van een luminescerende beeldanalyse.
- Analyseer de resultaten. Zorg ervoor dat zowel duplicaten op de array vertonen dezelfde signalen, zodat de resultaten betrouwbaar zijn. Indien de structuur van het eiwit partner bekend is, zoekt de structuur van het bindende peptiden en zoek de bindingsplaatsen. Ook peptiden die ver in de sequentie dicht bij elkaar in de tertiaire structuur en een bindingsplaats.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
STIL is een zeer belangrijk centrosomal eiwit. Het controleert de normale celdeling en celproliferatie 13,15 - 19. STIL interageert met verschillende eiwitten 18,20,21, en de meeste interacties plaatsvinden via het middengedeelte, dat een intrinsiek ontvouwen gebied (IDR) 14. We ontwierpen een serie samengesteld uit peptiden afgeleid van de STIL bindend eiwit CHFR. CHFR is een tumor suppressor die wordt geïnduceerd in reactie op stress 22 mitose. Omdat de structuur van de STIL bindingsdomein van CHFR onbekend was op het moment hebben we de eiwit domein 15 resten lange peptiden met een overlap van 7 residuen zoals beschreven in stap 1.1 in het protocol. We voerden een peptide matrix screening voor het identificeren van de CHFR STIL-bindingsplaatsen, zoals in bovenstaande protocol en in figuur 1. We gebruikten een Intavis Celluspot reeks bestaande uit 384 peptiden in duplo, die kan zorgen enorme hoeveelheid informatie zoals aangetoond in figuur 2. Met dit peptide matrix we vonden de bindingsplaatsen voor STIL in het bindende eiwit CHFR (figuur 3). Elke zwarte vlek in de array vertegenwoordigt een CHFR afgeleid peptide dat STIL gebonden. Merk op dat elk peptide komt tweemaal omdat het bestaat in tweevoud, waarbij de betrouwbaarheid van de resultaten controleert. De interactie tussen STIL en CHFR werd eerder aangetoond op eiwitniveau 13,14. Het peptide matrix screening onthulde 7 CHFR afgeleide peptiden die STIL IDR gebonden residuen 500-650 (Figuur 3, Amartely et al. 14). Deze resultaten konden we de bindingsplaats van STIL op CHFR kaart. Ondanks de afstand van deze peptiden op 7 CHFR primaire sequentie vormen ze een welomschreven bindingsplaats voor STIL in CHFR (figuur 4) 14.
7 / 52097fig1highres.jpg "/>
Figuur 1: een schema van peptide matrix screening A- ontwerpen van een peptide array bestaat uit gedeeltelijk overlappende peptiden afgeleid van één of meer partnereiwitten, rekening houdend met hun secundaire structuren;. B- incuberen met het doeleiwit; C incuberen met een antilichaam voor detectie; D- Detection (kan door chemiluminescentie, fluorescentie, enz.); E- Het analyseren van de resultaten aan de eiwitbindingsplaatsen onthullen. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Figuur 2. Een voorbeeld van peptide matrix screening Detectie bereikt middels chemiluminescentie De slede bevat twee identieke arrays duplicaten..es / ftp_upload / 52097 / 52097fig2large.jpg "target =" _ blank "> Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Figuur 3: Screening van een peptide array voor binding van STIL IDR naar CHFR eiwit: 4,5 uM-His STIL 500-650 werd gescreend op binding van de array. Elke zwarte vlek geeft binding tussen de STIL fragment en de CHFR-afgeleide peptide 14. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Figuur 4: De STIL bindingsplaats in CHFR die op de structuur van de CHFR Cys rijke domein (resten 424-661, PDB ID: 2XPO) De zeven.peptiden die STIL gebonden in de matrix peptide screening kan worden verdeeld over drie regio gekleurde roze, oranje en rood, die ver in de primaire sequentie, maar dicht bij elkaar in de 3D structuurcreërende één bindingsplaats. Deze volledige regio vormt een bindingsplaats voor STIL in het dimeer CHFR 14. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Peptide-array screening is een uitstekend hulpmiddel voor het identificeren van de bindingsplaatsen van een doelwit eiwit in haar partners. Deze test is gemakkelijk uit te voeren en de resultaten kunnen worden verkregen in één of twee dagen. Peptide matrix screening is veelzijdig en kan worden gebruikt voor vele doeleinden. Het kan gebruikt worden voor het karakteriseren na translatie modificaties zoals fosforylering en substraten te identificeren van kinasen. Bijvoorbeeld: de FLT3 kinase, die gerelateerd is aan acute myeloïde leukemie, fosforyleert Tyr-substraat peptiden gevonden door een reeks peptide screening 6. De remmende eigenschappen van de tyrosine kinase inhibitoren pazopanib en lapatinib werd getest met behulp van peptide-array screening 23. Peptiden array kan worden gebruikt om de sites die eiwit-eiwit interacties mediëren identificeren. Voorbeelden van dergelijke eiwitten onderzocht in ons laboratorium met deze methode zijn: de wisselwerking tussen HIV-1 Vif eiwit en cellulaire A3G eiwit werd gekarakteriseerd onsing een peptide-array 24; peptide matrix screening werd gebruikt om de interacties van de anti-apoptotische Bcl-2 studie met de pro-apoptotische eiwit ASPP2 25 en bestuderen de binding van tBID, lid van BCL-2 familie, met het mitochondriale eiwit MTCH2 26; de intramoleculaire interactie tussen myosine IIC domeinen werd geanalyseerd middels peptide matrix screening 27. Hier presenteren we een voorbeeld van hoe we vroeger peptide-array screening voor het identificeren van de websites waar de STIL-CHFR interactie, een eiwit-eiwit interacties belangrijk in proliferatie en kanker 14 bemiddelen. Het openbaren van de exacte bindingsplaats kan dienen als basis voor het rationeel ontwerpen van remmers van de bestudeerde interactie.
Het peptide matrix screening geen kwantitatieve assay. Het semi-kwantitatief aangezien de hoeveelheid peptide in elke spot op de array varieert als gevolg van verschillen in de synthese opbrengst en zuiverheid peptide. Dit op zijn beurt afhankelijk is van de Peptide volgorde, lengte, enz. De variatie in opbrengst en zuiverheid kan soms ook leiden tot vals-negatieve of vals positieve resultaten. Vergelijking tussen de intensiteiten binnen dezelfde array kan worden gemaakt, waardoor semi-kwantitatieve ranking. Maar dergelijke vergelijking tussen verschillende arrays of verschillende experimenten met dezelfde array niet betrouwbaar. Om de binding te kwantificeren, dient de peptiden in het peptide matrix screening worden gesynthetiseerd en getest op binding het doeleiwit met biofysische werkwijzen zoals fluorescentie anisotropie isothermische titratie calorimetrie (ITC), surface plasmon resonance (SPR), etc. Dergelijke assays niet altijd gevoelig voor zwakke binding omdat daarvoor een hoge concentratie van het eiwit zoals binding te detecteren. Het peptide matrix screening, anderzijds, is zeer gevoelig voor zwakke binding. Dus sommige van de waargenomen in de matrix screening interacties kon niet worden waargenomen of gekwantificeerd middels werkwijzen zoals fluorescentie anisot ropy 14. Dat peptide matrix screening vereist zeer lage concentraties eiwit gecombineerd met de hoge gevoeligheid van de assay maakt het peptide matrix een bruikbare werkwijze voor het screenen van eiwit-peptide interacties in een breed scala van affiniteiten.
Vals negatieve resultaten kunnen ook vanwege het feit dat lineaire peptiden niet goed vertegenwoordigen de 3D structuur van de bindingsplaats in het eiwit. Dit is echter geen probleem intrinsiek ontvouwen eiwitten, die goed worden voorgesteld door peptiden. Vals positieve resultaten kunnen ook worden veroorzaakt door binding van het antilichaam aan de matrix. Deze kunnen worden gedetecteerd door het uitvoeren van een controle-experiment zoals beschreven in de paragraaf protocol 4.3. Vals negatieve resultaten kunnen ook worden verkregen indien het eiwit epitoop dat wordt herkend door het antilichaam worden onbelichte bij binding aan de peptide array. Dit probleem is niet gebruikelijk, maar kan worden opgelost door toepassing van een polyklonaal antilichaam tegen het eiwit.
jove_content "> Het peptide matrix screening kan ook worden gebruikt voor het verbeteren lood peptiden, waaronder alanine scan en SAR studies 7. Zodra de bindingsplaats van het doel bekend is, kan een matrix op basis van de sequentie worden ontworpen met verschillende modificaties zoals vervanging van elk residu Alanine (Ala scan) de belangrijke resten identificeren de interactie. Op soortgelijke wijze kan SAR studies worden uitgevoerd door het veranderen van verschillende eigenschappen van de bindende peptiden. Deze omvatten het variëren van de lengte van het peptide, vervangen door de overeenkomstige resten D amino zuren en andere modificaties zoals methylatie, glycosylering en vervangen door niet- natuurlijke aminozuren. Dergelijke gemodificeerde peptiden, allemaal gebaseerd op een doelsequentie kan worden gesynthetiseerd op een array en gescreend op binding het doeleiwit in een gemakkelijk experiment , een schat aan informatie voor het verbeteren van een mogelijke inhibitor en het begrijpen van de moleculaire mechanismen van de interactie.electro-4. De peptide-array hierin beschreven is voor eenmalig gebruik en kan niet worden hergebruikt.
De hier gepresenteerde protocol toont de brede bruikbaarheid van peptide arrays. Met behulp van een goed ontworpen array, kan bindingsplaatsen tussen twee eiwitten geïdentificeerd worden in detail. Zodra de bindingsplaats goed gekarakteriseerd kan worden gebruikt als een drug target site remmen van de relevante eiwit-eiwit interactie. Gebaseerd op de bindende peptiden in de matrix screening kunnen remmende kleine moleculen worden ontworpen en gescreend als geneesmiddel leidt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
AF werd ondersteund door een starting grant van de European Research Council onder het zevende kaderprogramma van de Europese Gemeenschap (FP7 / 2007-2013) / ERC Grant overeenkomst n ° 203413 en door de Minerva Centrum voor Bio-hybride complex systems.HA en AI worden ondersteund door de Dalia en Dan Maydan Fellowship voor geavanceerde graad studenten aan de Hebreeuwse Universiteit van Jeruzalem.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Peptide array | INTAVIS Bioanalytical Instruments | ||
| His-probe Antibody (H-3) HRP | Santa Cruz Biotechnology | sc-8036 HRP | |
| EZ-ECL Kit | Biological industries | 20-500-120 | |
| Skim Milk | Becton, Dickinson and Company | 232100 | |
| LAS-3000 camera | FUJI film |
References
- Benyamini, H., Friedler, A. Using peptides to study protein–protein interactions. Future Medicinal Chemistry. 2 (6), 989-1003 (2010).
- Geysen, H. M., Wagner, C. D. Isotope or mass encoding of combinatorial libraries. Chemistry & Biology. 3 (8), 679-688 (1996).
- Frank, R. Spot-synthesis: an easy technique for the positionally addressable, parallel chemical synthesis on a membrane support. Tetrahedron. 48 (42), 9217-9232 (1992).
- Katz, C., Levy-Beladev, L., Rotem-Bamberger, S., Rito, T., Rudiger, S. G., Friedler, A. Studying protein-protein interactions using peptide arrays. Chem Soc Rev. 40 (5), 2131-2145 (2011).
- Hansen, L. B., Buus, S., Schafer-Nielsen, C. Identification and Mapping of Linear Antibody Epitopes in Human Serum Albumin Using High-Density Peptide Arrays. PLoS ONE. 8 (7), (2013).
- Uecker, A. A substrate peptide for the FLT3 receptor tyrosine kinase. British Journal of Haematology. 144 (1), 127-130 (2009).
- Gabizon, R., Faust, O., Benyamini, H., Nir, S., Loyter, A., Friedler, A. Structure-activity relationship studies using peptide arrays: the example of HIV-1 Rev-integrase interaction. Med. Chem. Commun. 4 (1), 252-259 (2013).
- Frank, R. The SPOT-synthesis technique: Synthetic peptide arrays on membrane supports—principles and applications. Journal of Immunological Methods. 267 (1), 13-26 (2002).
- Innovative Peptide Solutions. , http://www.jpt.com (2014).
- PEPSCAN shaping peptides to perfection. , http://www.pepscan.com (2014).
- Intavis Bioanalytical Instruments. , http://www.intavis.com (2014).
- Falsey, J. R., Renil, M., Park, S., Li, S., Lam, K. S. Peptide and Small Molecule Microarray for High Throughput Cell Adhesion and Functional Assays. Bioconjugate Chemistry. 12 (3), 346-353 (2001).
- Castiel, A., Danieli, M. M. The Stil protein regulates centrosome integrity and mitosis through suppression of Chfr. Journal of Cell Science. 124 (4), 532-539 (2011).
- Amartely, H., David, A., Lebendiker, M., Benyamini, H., Izraeli, S., Friedler, A. The STIL protein contains intrinsically disordered regions that mediate its protein-protein interactions. Chemical Communications. 50, Cambridge, England. 5245-5247 (2013).
- Izraeli, S., Lowe, L. A. The SIL gene is required for mouse embryonic axial development and left-right specification. Nature. 399 (6737), 691-694 (1999).
- Izraeli, S., Colaizzo-Anas, T., Bertness, V. L., Mani, K., Aplan, P. D., Kirsch, I. R. Expression of the SIL gene is correlated with growth induction and cellular proliferation. Cell Growth Differ. 8 (11), 1171-1179 (1997).
- Arquint, C., Sonnen, K. F., Stierhof, Y. -D., Nigg, E. a Cell-cycle-regulated expression of STIL controls centriole number in human cells. Journal of Cell Science. 125 (5), 1342-1352 (2012).
- Tang, C. J., Lin, S. Y. The human microcephaly protein STIL interacts with CPAP and is required for procentriole formation. Embo J. 30 (23), 4790-4804 (2011).
- Vulprecht, J., David, A. STIL is required for centriole duplication in human cells. Journal of Cell Science. 125 (5), 1353-1362 (2012).
- Campaner, S., Kaldis, P., Izraeli, S., Kirsch, I. R. Sil phosphorylation in a Pin1 binding domain affects the duration of the spindle checkpoint. Mol Cell Biol. 25 (15), 6660-6672 (2005).
- Kasai, K., Inaguma, S., Yoneyama, A., Yoshikawa, K., Ikeda, H. SCL/TAL1 interrupting locus derepresses GLI1 from the negative control of suppressor-of-fused in pancreatic cancer cell. Cancer Res. 68 (19), 7723-7729 (2008).
- Chaturvedi, P., Sudakin, V. Chfr regulates a mitotic stress pathway through its RING-finger domain with ubiquitin ligase activity. Cancer Res. 62 (6), 1797-1801 (2002).
- Olaussen, K. a, Commo, F. Synergistic proapoptotic effects of the two tyrosine kinase inhibitors pazopanib and lapatinib on multiple carcinoma cell lines. Oncogene. 28 (48), 4249-4260 (2009).
- Reingewertz, T. H., Britan-Rosich, E. Mapping the Vif–A3G interaction using peptide arrays: A basis for anti-HIV lead peptides. Bioorganic & Medicinal Chemistry. 21 (12), 3523-3532 (2013).
- Katz, C., Benyamini, H. Molecular basis of the interaction between the antiapoptotic Bcl-2 family proteins and the proapoptotic protein ASPP2. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (34), 12277-12282 (2008).
- Katz, C., Zaltsman-Amir, Y., Mostizky, Y., Kollet, N., Gross, A., Friedler, A. Molecular Basis of the Interaction between Proapoptotic Truncated BID (tBID) Protein and Mitochondrial Carrier Homologue 2 (MTCH2) Protein: KEY PLAYERS IN MITOCHONDRIAL DEATH PATHWAY. Journal of Biological Chemistry. 287 (18), 15016-15023 (2012).
- Rosenberg, M. M., Ronen, D., Lahav, N., Nazirov, E., Ravid, S., Friedler, A. High resolution characterization of myosin IIC tailpiece and its effect on filament assembly. Journal of Biological Chemistry. 288 (14), 9779-9789 (2013).
