We present a surgical protocol detailing how to perform a cut or crush axotomy on the facial nerve in the mouse. The facial nerve axotomy can be employed to study the physiological response to nerve injury and test therapeutic techniques.
Bu cerrahi protokolün amacı Stylomastoid foramende onun çıkışında yüz kasları innerve yüz siniri, ortaya çıkarmak ve ya kesme veya periferik sinir hasarı neden onu ezmek için. Bu ameliyatın avantajları böylece diğer sinir yaralanması modellere kıyasla nispeten hafif cerrahi sonuç sonuçlanan sadeliği, yüksek tekrarlanabilirlik ve sonraki yüz felci hayati fonksiyonları veya hareketlilik üzerindeki etkisinin olmamasıdır. Kranial sinir yaralanması modelini kullanarak önemli bir avantajı motor nöronlar motor nöron hücre gövdeleri çalışma basitleştirilmesi, pons yüz motorlu çekirdeğinde nispeten homojen nüfus ikamet olduğunu. Çünkü yüz sinir innervasyon simetrik yapısı ve yüz motorlu çekirdekleri arasındaki karışma eksikliği, çalışma unaxotomized tarafı eşleştirilmiş iç kontrol olarak hizmet veren tek taraflı yapılabilir. Analiz çeşitli eşek postoperatif yapılabilirBu makalenin kapsamı dışındadır ayrıntıları fizyolojik tepki, s. Örneğin, kas fonksiyonunun geri kazanılması; innervasyonun bir davranış markör olarak görev yapabilir veya motor nöronlar hücre yaşamını ölçmek için sayısal olarak belirlenebilir. Ayrıca, motor nöronlar doğru moleküler analiz için lazer mikrodiseksiyon kullanılarak yakalanabilir. Yüz siniri axotomy minimal invaziv ve iyi tolere edilir, çünkü bu genetik olarak tadil edilmiş farelerin çok çeşitli kullanılabilir. Ayrıca, bu ameliyat modeli periferik sinir yaralanması tedavilerinin etkinliğini analiz etmek için kullanılabilir. Yüz sinir hasarı sadece motor nöronlar araştırılması için bir araç sağlar, ancak merkezi ve çevresel glial mikro-bağışıklık sistemi ve hedef kas da yanıtlar. fasial sinir hasarı modeli sinir hasarı ve yenilenme eğitim için güçlü bir araç olarak hizmet yaygın olarak kabul gören periferik sinir yaralanması modelidir.
Birçok periferik sinir yaralanması modelleri var, ama motor nöronlar çalışma için göze çarpan bir fasiyal sinir aksotomi modelidir. Ayrıca kranial sinir VII olarak bilinen fasial sinir, pons kaynaklanır ve yüz ifadesi 1,2 kasları innerve eder. Bu cerrahi protokolde, fasial sinir Stylomastoid foramende onun çıkışında maruz kalan ve kesilmiş veya ezilmiş ya edilir. Sinir hasarı şiddeti sırayla akson demetleri etrafına sarın bağ dokusu katmanları olan aksonlar, endoneurium, perinörium ve epinörium devamlılığı dayalı yaralanma ayıran Sunderland 3 sınıflandırmaları, aşağıdaki sınıflandırılabilir. Ezilme yaralanması (aksonotmezis) olarak, aksonlar kopmuş, ancak perinevre ve epinöriyuma korunur. Sağlam sinir kılıfı aksonlar 4,5 regrow, içinde bir kanal olarak hizmet vermektedir, çünkü yüz siniri ezmek Komple fonksiyonel iyileşme yaklaşık 11 gün içinde gerçekleşir. ÜzerindeÖte yandan, kesme yaralanması (nöromezis) içinde, aksonlar ve 3 bağ dokusu katmanları kopmuş olup, tüm distal sinir kas innervasyon geri regrow gerekir. Epinörium Cerrahi yeniden bağlanma genellikle sinirin yaralanması yaralanması olan insan hastalarda yapılır, ancak kurtarma sonuçları nadiren uygun bulunmaktadır. Daha fazla çalışma sinir hedefine regrow başarısız ve hangi tedaviler geliştirmek ve rejeneratif sürecini hızlandırmak için istihdam edilebilir anlamak için gereklidir.
Fasial sinir aksotomi modeli kullanılarak sinir yaralanması okuyan birçok avantajı vardır. İlk olarak, fasial sinir aksotomi prosedürü, hızlı, kolay ve son derece tekrarlanabilir; ve yüz kaslarının felci hayati fonksiyonları etkilemez ve iyi hayvan tarafından tolere edilir. Bu motor nöronlar th nispeten homojen nüfus ikamet çünkü basitleştirilmiş motonöron hücre gövdeleri okuyan bir kranial sinir hasarı modeli olduğundan,pons e fasiyal motor çekirdeği. Yedi subnuclei kasların belirli bir grup innerve her özel olarak orada nüfus, yüz motorlu çekirdeğinin içinde subnuclear desen dayalı farklılık yok, bu yüzden axotomy yanıt olarak subnuclear farklılıklar sonuçları 2,6,7 etkileyebilir.
Fasial sinir yaralanması modelinde önemli bir yararı sinir innervasyon son derece simetrik ve yüz motorlu çekirdekleri 8 arasında çapraz olduğundan unaxotomized tarafı eşleştirilmiş iç kontrol olarak hizmet verebilir olmasıdır. Bu cerrahi yöntemi kullanmanın bir diğer avantajı, doğrudan merkezi sinir sistemine travma ya da kan-beyin engeli 9. bozulması eksikliğidir. Aşırı kanama ve enfeksiyon gibi komplikasyonlar bu prosedür ile nadirdir.
Analiz, çeşitli sinir yaralanmasına bağlı fizyolojik tepkisini tayin etmek için gerçekleştirilebilir. göz kırpma refleksinin ve visker etkinlik geri kazanımı davranışsal olarak kullanılabilirFonksiyonel iyileşme 10,11 ölçüsü. Burun kılı aktivite video kayıt şu anda yüz sinir innervasyon 12,13 kurtarma tespit için en güçlü yöntemdir. Ötenazi sonra, beyin sapı histolojik analiz yüz motorlu çekirdeğin içinde motonöron hücre gövdeleri üzerinde yapılabilir. fasiyal motor çekirdeği yaralanmasına 2,6 yanıtları diferansiyel inceleme için izin, yedi subnuclei, belirli yüz kasları her özel bölünmüştür. Yüz motor nöronlar hücre yaşamını ölçmek için sayılabilir ya da immünohistokimya, biyolojik göstergeleri ve özel hücre popülasyonlarının 14 tanımlamak için kullanılabilir. fasiyal motor çekirdeği doğru sinir hasarı 15,16 hücresel yanıtın moleküler analiz için lazer yakalama kullanılarak microdissected edilebilir. Fasial sinir aksotomisi etkileri motor korteks 17,18 analiz edilebilir. Ayrıca, sinir Wallerian dejenerasyon çalışma çıkarılmasına olanak 19 ya daakson rejenerasyonu 20, ve kaslar kas kavşakları 21 çalışma çıkarılabilir. fasial sinir aksotomi da kas 21, ve bağışıklık sistemini yanıtı 23, ilişikteki santral ve periferik glial hücreleri 22 çalışma hedef için kullanılabilir. Çok fasial sinir aksotomi modeli 24 okuyan başarılı olmasına rağmen sinir hasarı hastaları için önemli bir sorundur ve güncel tedaviler iyi sonuçlar üretmek için başarısız çünkü, periferik sinir hasarı daha fazla çalışma gereklidir. Bu model sinir yaralanması fizyolojik yanıtı inceleyerek ve sinir rejenerasyonu tedavilerin etkinliğini analiz etmek için güçlü bir araçtır.
The critical step for this protocol is positioning the mouse properly before surgery is begun. If the mouse is not lying flat on its side, the ear is not taped at the correct angle, or the incision is made in an incorrect location, then finding the facial nerve becomes much more difficult. When this technique is mastered, surgeries will take only minutes per mouse.
Either sutures, glue, or wound clips can be used to close the wound. Wound clips are preferred because of the small size of incis…
The authors have nothing to disclose.
This work is funded by NIH RO1 NS 40433 (K.J.J.).
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Stereo Microscope | Leica | M60 | |
Labeling tape | Fisher Scientific | 15-952 | |
Vannas-Tübingen Spring Scissors – Straight/Sharp/8.5cm/5mm cutting edge | Fine Science Tools | 15003-08 | Sterilize before use |
Dumont #5/45 Forceps – Standard tips/Angled 45°/Dumoxel/11cm | Fine Science Tools | 11251-35 | Sterilize before use |
Michel Suture Clips – 7.5mm x 1.75 mm | Fine Science Tools | 12040-01 | Described as "wound clip" in protocol, sterilize before use |
Hagenbarth Cross Action Wound Clip Applier 5" | George Tiemann & Co | 160-910 | Used to apply wound clip, sterilize before use |
Michel Suture Clip Applicator & Remover – For 7.5 mm Clips | Fine Science Tools | 12029-12 | Used to remove wound clip |
0.9% Sodium Chloride Injection, USP | Hospira | 0409-4888-10 | |
Betadine, 16 oz, with dispenser | Fisher Scientific | 19-027132 | |
70% Ethanol | |||
Glass Bead Sterilizer |