Protocol
注：使用小鼠实验是按照该机构的动物福利委员会（IACUC）的指导方针进行。
1.重构的RAG-1 - / -小鼠I N 体外培养Th17细胞（前三天感染）
- 在U型底96孔板单独或联合培养它们沿着用3×104 CD4 + CD25 +的Foxp3 + Treg细胞在可溶性存在建立Th17细胞，培养的CD4 + CD44low CD62Lhigh CD25 - 幼稚T细胞（3×104） α-CD3（1微克/毫升），α-CD28（2微克/毫升）的抗体和抗原呈递细胞，Th17的条件下（使用的IL-6（25毫微克/毫升），TGF-β极化（2纳克/毫升） α-IFN-γ（2微克/毫升）和α-IL-4（2微克/毫升））为三到四天。
注：使用荧光激活细胞分选的幼稚细胞和T 暂存器被排序（FACS）的ð磁性细胞分离程序和培养如前面描述19-22。 - 在第4天，再悬浮用吸管Th17细胞后，从培养物收集它们，并且离心它们在无菌条件下。
- 取一小等分这些细胞，研究其可行性和表型。重悬他们在500μlRPMI培养基中，加入碘化丙啶（200毫微克/毫升），并通过流式细胞立即评估其可行性术。通过流式细胞仪再刺激评估IL-17A生产进行分型（见6.3）。
- 离心机，在4℃下在所有的步骤洗涤细胞的主要散装在无菌PBS以480×g离心6分钟，除非另有规定。
- 使用这些细胞过继转移到6-8周龄CD45.2 RAG1 - / - 免疫缺陷小鼠。
- 使用冷无菌PBS悬浮细胞以1×10 7个细胞/ ml的细胞密度。
- 注入由intrap 100微升的细胞eritoneal注射，使用上1毫升结核菌素注射器地下25针，使得一只小鼠接收1×10 6个细胞。一些小鼠只接受PBS或Th17细胞，和其它的小鼠将收到的Th17细胞共培养与Treg细胞。
注：执行所有步骤无菌。
2.成长C.白色假丝酵母感染（前一天感染）
- 接种前，驱散CAF2-1 C.五殖民地白色念珠菌实验室菌株在100微升无菌PBS悬浮，并将悬浮液添加到无菌肉汤。
- 接种C. 5殖民地白色念珠菌在50毫升的酵母氮碱（YNB无氨基酸）/蛋白胨/右旋糖肉汤培养基，孵育在摇床培养箱中在30℃下15-18小时，在130转。
- 监视肉汤为混浊，因为这是一个指示用于对真菌的生长。
3. 念珠菌收获和计数过程（感染的日）
- 收集10毫升念珠菌肉汤的15ml管中。对于较大的卷，收集念珠菌在50毫升管。
- 离心芽生孢子在1900×g离心5分钟，在RT中的所有步骤，除非另有规定。沉淀芽生孢子通过离心，然后除去上清液。
- 如果有一个以上的管，从多个管凝聚念珠菌芽生孢子，加入无菌PBS的颗粒和重悬它们在10ml PBS中用于计数。
- 采取20微升的芽生孢子在1.5ml微量离心管中，加入20微升2倍多聚甲醛和在室温下孵育15-20分钟。计数采用显微镜下血球固定芽生孢子。
注意：多聚甲醛是致癌物质。打开仅在通风橱的原液。 - 在此期间，重复洗涤该芽生孢子的至少两倍，通过离心吨下摆的PBS，造粒的芽生孢子。保持在15ml管中的颗粒在室温，在ABSL1罩，准备感染。
- 留下一些无菌PBS在室温下重悬芽生孢子感染。
- 计数后，添加无菌PBS到芽生粒料以调节酵母细胞芽生号码的酵母细胞/ ml 2×10 8。这是芽生孢子悬浮液，将被用于感染的小鼠。
注：执行所有步骤无菌。
4.感染小鼠（细胞转移后3-5天）
注：基本感染过程如前面19,23-25 所述进行。
- 权衡RAG-1 - / - 小鼠接受PBS或细胞三天前。
- 计算的使用他们的体重麻醉剂的剂量。麻醉小鼠通过施用氯胺酮/甲苯噻嗪混合物（16.1毫克/毫升和1.6毫克/毫升），利用地下25针上1毫升结核菌素注射器，由INTRaperitoneal注入。
- 管理每10克的机身重量50微升。 （ 即，分别为0.8毫克氯胺酮和0.08毫克的甲苯噻嗪/ 10克体重或80毫克氯胺酮和每公斤体重甲苯噻嗪的8毫克）。观察的脚趾捏响应麻醉后，每15分钟。
注意：此剂量将诱发60-90分钟麻醉的，这是不够的感染过程。 - 适用的眼用润滑剂软膏在小鼠的眼中，以防止角膜干燥。由于眼睛的润滑剂可以干出，重复眼科润滑每隔45分钟。
- 管理每10克的机身重量50微升。 （ 即，分别为0.8毫克氯胺酮和0.08毫克的甲苯噻嗪/ 10克体重或80毫克氯胺酮和每公斤体重甲苯噻嗪的8毫克）。观察的脚趾捏响应麻醉后，每15分钟。
- 注入1毫升盐水（0.9％NaCl）中皮下注射在背部邻接到前肢，帮助麻醉期间小鼠的补液。
- 获得一个新的，干净的笼子。按照感染的程序一个鼠标的时间，将每只小鼠成一旦感染新的笼子。首先执行PBS /假感染，然后进行念珠菌感染GROups。
- 拿起麻醉鼠标，打开口宽透露舌根。
- 放置用50μlPBS或芽生孢子悬浮液的饱和3毫米直径棉球，舌下在口腔中90分钟。翻转小鼠每隔15分钟正面和背面，以防止肺充血，确保棉球不移动。
- 设置一个定时器，每鼠，以确保在口腔中90分钟的深水或念珠菌接种。
- 让他们下的热灯（4英尺远）一个笼子，每只小鼠对热凝胶垫。
- 确保该舌片从牙齿内部和远离撤出，以避免齿划破舌头。
- 在90分钟结束时，从鼠的口中除去棉花球。留意任何鼠标可能从麻醉中恢复早于75分钟。在这样的情况下，只用氯胺酮（40毫克/千克）再次麻醉它们。
5.后ProcedurE监测（90分钟麻醉过程中）
- 在90分钟的麻醉过程中使用的热凝胶垫。
- 为了保持体温，防止窒息，不要让老鼠恢复的常规玉米芯鼠标床上用品。
- 从麻醉中恢复后，施用额外的1毫升无菌的0.9％NaCl皮下的，背面的两个位置。
- 跟上五PBS（假）每笼接种小鼠。房子只有1-2元笼感染小鼠。
- 每天在手术后填写过程卡缩写记下的变化的体重，疏导习惯和总体健康状况。
6.评估炎症
6.1）减肥
- 每天在感染期间称重小鼠，开始在感染前过程的那一天。
注：通常情况下，注射Th17细胞和不要选丁字暂存器的免疫缺陷小鼠死于20-30％的重量损失是由于增加的真菌负担19和加剧炎症。
6.2）组织学舌得分
- 牺牲小鼠用CO 2窒息之后颈脱位。
- 打开颌骨和解剖用剪刀和镊子的舌头。使用钝钳保持舌，以及使用该剪刀接触到口腔的后部，以切开舌的后端。
- 对于免疫细胞化学苏木精和曙红舌组织（H＆E）染色，冲洗舌组织用冰冷的PBS。加入5毫升10％的福尔马林2-3舌头和解决这些问题O / N在15毫升管。
- 第二天，除去福尔马林浸泡组织在5毫升70％的乙醇，以防止超固定。送他们到商业服务，继续用石蜡包埋，切片和石蜡切片染色。
注：商业组织学服务用来执行这些步骤。 - 一旦载玻片从商业组织学服务回，等级炎症通过观察在光学显微镜下的组织切片。
- 得分从0至5，其中0是无炎症，和5是最严重的炎症。评分使用表1中的炎症。
6.3）细胞因子产量Th17细胞
注意：过量TNF-α生产的读数过度免疫病理之一。当小鼠过继与Th17细胞转移只，它导致了与过度的TNF-α产生中Th17细胞相关的免疫病理学。
- 收集来自脾脏，颈部淋巴结，腋窝淋巴结和舌单细胞悬浮液，使用先前描述的方法19,26。
- 重新刺激细胞与佛波醇肉豆蔻乙酸酯（PMA）（50纳克/毫升）和离子霉素（500毫微克/毫升）4小时用布雷菲德菌素A（10微克/毫升），在升加入AST 2小时。用PBS洗涤细胞，并使用根据制造商的说明商用固定/透化试剂盒解决这些问题。
- 使用荧光染料缀合的抗TNF-α，抗IL-17A和ROR-γT抗体如先前19描述的执行帧内蜂窝细胞因子染色。
- 简言之，将悬浮在与抗TNF-α，抗IL-17A和ROR-γT抗体，每种抗体在2的鸡尾酒的1X透化缓冲液中的细胞 - 3微克/毫升的最终浓度。
- 孵育细胞1小时，在室温。
- 培养后，洗涤细胞用1X透化缓冲液。
- 重悬在500μlPBS中的0.5％牛血清白蛋白进行流式细胞术分析细胞沉淀。
- 第二天，除去福尔马林浸泡组织在5毫升70％的乙醇，以防止超固定。送他们到商业服务，继续用石蜡包埋，切片和石蜡切片染色。
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Representative Results
在这个模型中，无论是念珠菌 -感染的小鼠和未感染的小鼠中RAG-1 - / -背景的免疫缺陷过继与Th17细胞3-5天前，感染传送。总共10-12只小鼠用于实验，用2只小鼠中每一深水感染组，并且在每个所述念珠菌感染的群体的4-5。幼稚细胞来自同类Thy1.1的或CD45.1小鼠，使注入的Th17细胞被跟踪中使用Thy1.1的或CD45.1染色分别（ 图1A） 的体内 。联合转移的T 暂存器来源于CD45.2小鼠从CD45.1 Th17细胞区分开来。对于一些实验，CB-17 SCID Thy1.2受体小鼠中，使用从Thy1.1系Balb / C小鼠，并从同类Thy1.2小鼠获得Ť 暂存器获得的Th17供体细胞。只有念珠菌感染的小鼠，但不是未受感染的小鼠表现出的招聘和扩大重组CD45.1的+ 图1A）启动的。结果表示来自一只小鼠的每个组中的数据。
仅在被共转移以T 暂存器的小鼠，在CLN检测FOXP3 + CD45.1阴性CD4 +细胞。这表明，所注入的Ť 暂存器还招募到感染部位（ 图1B）。结果表示来自一只小鼠的每个组中的数据。而感染RAG-1 - / -减肥和4天后感染的痊愈，可的松免疫抑制小鼠没有恢复，但进一步丢失的重量，如前面27所示。两者的小鼠的组接受Th17细胞在T 暂存器的存在或不存在初始体重减轻。但是，接收由体重减轻回收Ť 寄存器和小鼠解决了感染。 2米冰被深水感染组中的每个念珠菌感染组中使用，和4。有3只小鼠中可的松组。接收Th17细胞的小鼠，体重减轻逐步（ 图2）19。一些小鼠在该组中的不得不被安乐死。这些结果表明，所有的小鼠在该组中的权值的平均值。虽然中性粒细胞所需的感染的初始间隙，其连续存在和招聘的组织是未解决的炎症标志。因此中性粒细胞浸润进行了检查，在受感染的舌，通过确定在稍后的时间点，如天-7感染后嗜中性粒细胞标记物的Gr-1的表达，。该接收到的Th17细胞的小鼠只，有较高的炎性浸润（ 图3A），甚至包括天-4-的Gr-1 +嗜中性粒细胞在感染后，相对于注射以T 暂存器 （ 图3B）的小鼠。这些结果表明，在presencË了T 暂存器，小鼠解决炎症更有效地从感染中康复。
在感染后7天，脾（SPLN），CLN和舌组织中分离，单细胞悬液的流式细胞仪分析发了言。 CLN透露在接受仅Th17细胞的小鼠增加的CD45.1 Th17细胞（ 图1）和提高的TNF-α产生（ 图4A，4B）。另一方面，T 章收件人表现由Th17细胞（ 图1及图4A，4B）Th17细胞的频率和降低的TNF-α生成减少。在这些实验中，示出从CLN一个鼠标的，和舌组织数据采集并汇集来自2只小鼠。虽然在早期的时间点T中的IL-17A的产量为更高章收件人19，在两个组中，IL-17A的生产由Th17细胞是最小的（数据未示出）后面的时间点。碘酸雪夫氏染色舌显示增加真菌菌丝在于只收到Th17细胞小鼠，而接收Ť 暂存器小鼠以及清零天-5和天7真菌感染（ 图5）之后。此外，舌炎症组织病理学评分也显示降低的炎症分数接受Ť 暂存器小鼠相比，仅接受Th17细胞（ 图6）的小鼠。得分炎症是基于舌组织病理学参数，如，乳头的存在，表面上皮细胞层，可见酵母或菌丝，侵入菌丝指示非解决感染的完整性，基底层的增厚（指示正在进行组织修复），和浸润免疫细胞（嗜中性粒细胞和Th17细胞）的存在。这些结果表明，注射Th17细胞没有直接减少感染但增加所造成的初级C.真菌负担和免疫病理学白色念珠菌 infec化，而 共转移了T 暂存器改善免疫病理学。
图1.注射Th17细胞和调节性T细胞的招募和扩大C的引流淋巴结（CLN） 白色念珠菌感染小鼠（A）RAG-1 - / - CD45.2小鼠重组与Th17细胞或Th17细胞+ 调节性T Th17的条件下极化5天的细胞。 Th17细胞被从CD45.2小鼠获得CD45.1同类系小鼠和T reg细胞获得。一些小鼠没有接受任何细胞（深水或念珠菌+ PBS）中。受体小鼠各组感染了假性对照或C.白色念珠菌 。在感染后5天，CLN是isolat编使单细胞悬浮液，并掌握其注入CD45.1表达Th17细胞通过流式细胞术（选通在FSC，SSC分散所有白细胞）（B）的 RAG-1 - / - CD45.2小鼠重构与Th17细胞或Th17细胞+ T reg细胞，如“A”和感染下进行 。 白色念珠菌。CLN中分离，使单细胞悬浮液，并测量CD45.1并通过流式细胞术的细胞内Foxp3的表达（门上的所有的CD4细胞）。在情节的调节性T门显示CD45.1负，FOXP3 + CD4 +细胞。 请点击此处查看该图的放大版本。
图2.注入Th17细胞导致体重减轻用C 白色念珠菌感染的小鼠对T 寄存器和共同给药改善从重量损失恢复。SCID CB-17小鼠重构与Th17细胞或Th17细胞+ T reg细胞如在图1A中。 3天后，将受体小鼠被感染C.白色念珠菌，每组中的一些小鼠感染与假控制。免疫抑制小鼠接受醋酸可的松（皮质醇）注射。百分重量变化在复原用表示细胞和感染白色念珠菌小鼠，相对于D-1（前一天感染）被示出。数据标准化相对重量数据未感染（深水+ PBS）的小鼠。 请点击此处查看该图的放大版本。
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图3.注入Th17细胞引起舌免疫病理学在C中。 白色念珠菌感染的小鼠和共同给药对T 暂存器降低 C的舌片的免疫病理组织学评估白色念珠菌感染小鼠。小鼠重组，指示细胞和病毒感染如在图1A中。感染后第5天，舌片是从小鼠中分离。（A）的舌片的矢状切片用H＆E以评估炎症和免疫细胞的浸润（IF）。 （PA）和（EP）表示乳头和舌分别上皮层。显微图像观看at50X倍率的幻灯片。（B）的组织学免疫染色，使用抗Gr-1抗体的Gr-1的中性粒细胞标记物 （CLONE：1A8-Ly6g）在第5天的舌片部感染后（褐色，表示为IF）。放大100倍观察显示的幻灯片显微图像。 请点击此处查看该图的放大版本。
对T 暂存器图4.联合政府减少注射Th17细胞TNF-α。 （A）RAG-1 - / - CD45.2小鼠重组与Th17细胞或Th17细胞+ Treg 细胞和感染C.白色念珠菌 ， 如图1A。在感染后第5天，CLN和舌组织中分离，使单细胞悬浮液。将这些细胞再刺激用PMA和离子霉素的细胞内staini之前纳克和流式细胞术分析。流式细胞等高线图内的ROR-γT的Th17细胞和TNF-α的表达示（选通对CD4 +细胞）。（B）的TNFαpositive细胞从实验中的“A”进行的百分比的统计表示。数据代表4只未感染组，6只在每个感染组，并从两个独立的实验汇集。 请点击此处查看该图的放大版本。
图5.增加免疫病理学还与C升高真菌的负担有关。 白色念珠菌感染小鼠。CB-17 SCID麦克风E的重组，BALB / c小鼠Th17细胞，Th17细胞或+ Treg 细胞在Figure1A，并感染了C.白色念珠菌 。示从感染小鼠舌的组织学评价。于感染后第7天，舌收获并用高碘酸席夫（PAS）染色，以评估真菌损害，炎症和浸润细胞（IF），并以检测真菌（CA）。幻灯片被视为at100X放大。 请点击此处查看该图的放大版本。
图6.牛逼暂存器改善免疫病理学用C。白色念珠菌感染小鼠。 SCID小鼠重构与BALB / c小鼠Th17细胞，或Th17细胞+ T reg细胞如在图1A中 ，与感染了C。白色念珠菌 。从评估， 如图5感染小鼠的舌头的平均组织学评分的统计表示。 请点击此处查看该图的放大版本。
| 得分 | 特点 |
| 0 | 0 - 没有可见的酵母或菌丝，在舌背表面完好表面上皮，乳头清楚本和完好的（可以是或可以不是浸润在组织内的单核细胞），无增稠基底层，没有浸润免疫细胞。 |
| 1 | 1 - 没有明显的酵母或菌丝E，衣衫褴褛或轻微受损表面上皮，乳头明显存在以最小的损伤和偶发浸润的免疫细胞。 |
| 2 | 2 - 乳头减少，但目前有损伤，基底层增厚和频繁浸润的免疫细胞。 |
| 3 | 3 - 可见酵母和菌丝侵入，乳头破损，受损上皮病变偶尔，基底层增厚和小簇浸润的免疫细胞的证据偶尔集群。 |
| 4 | 4 - 频繁的集群可见的酵母和菌丝侵入，乳头破损，受损的上皮细胞，免疫细胞浸润很小，基底层和频繁集群浸润的免疫细胞增厚频繁病变的证据。 |
| 五 | 5 - 入侵的菌丝，整个背表面广泛受损上皮细胞，大量渗入广泛的证据免疫细胞，很少或根本没有检测到乳头，基底层增厚和高频率和大集群浸润的免疫细胞。 |
表1：组织学评分值
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Discussion
该模型是基于对诱导口服C.白色念珠菌感染相关的Th17细胞炎症。因为没有T 暂存器的，所述的Th17细胞诱导的炎症是无节制，并导致解决不良免疫病理学。 体外衍生的极化作为Th17细胞被用于过继转移幼稚的CD4细胞。 40 - 培养的CD4 +细胞的50％表现出约3天可检测的IL-17A的表达（Th17细胞），并因此被用于注射的小鼠。模型的主要优点是，Th17细胞引起，可有效地改善与调节性T注射感染特定免疫病理学。因此该模型可用于测试和T 章注射免疫调节策略作为阳性对照。炎症是容易评估的基础上的重量损失，病理组织学得分和促炎性细胞因子产生的感染小鼠的Th17细胞。
吨后，他收养Th17细胞的转移，他们迁移到二级淋巴器官和各种组织，包括舌，感染的原发部位。感染后，其他炎性细胞也招募到舌头清除感染。然而，如果没有调节性T介导的免疫调节，Th17细胞本身并没有解决感染，但引起高度免疫病理学。共转移了T 暂存器彻底解决了炎症。有趣的是，小鼠在没有T 暂存器加剧炎症，也显示增加的真菌负担。我们之前的报告显示，这是由于减少了IL-17A生产的小鼠，比起那些以T 暂存器 。我们目前的实验支持这样的想法，这也可能是由于增加的TNF-α是恶化的炎症，可能通过增加上皮细胞凋亡和增加的真菌负担28。考虑的IL-17A的在粘膜免疫保护作用我们认为，炎性病理学，我们观察到与增加的真菌负担是不是由于由Th17细胞或缺乏宿主抗性的产生的IL-17A。它是由于TNF-α和由注入Th17细胞产生的可能的其它促炎细胞因子引起的。 - / -小鼠缺乏Th17细胞仅显示最小的炎症和随后的感染的分辨率，只有那些接受Th17细胞屈服于严重的体重减轻（ 图1），这可以通过该碎布观测进行验证。一致的这一数据，它也已表明以前碎布- / -小鼠清除主OPC感染没有太多的免疫病理学27。在这些条件下，依赖于IL-17A产生先天免疫细胞代偿机制已显示以清除感染的碎布- / -小鼠17,29,30。综合来看，虽然IL-17A由Th17细胞和中性粒细胞招聘生产的演奏感染的最初阶段起保护作用，EXCessive生产TNF-α和其他细胞因子的Th17细胞和嗜中性粒细胞的原因的继续存在的加剧免疫病理学。除了由Th17细胞产生的TNF-α促炎性细胞因子的作用保持在免疫病理学的上下文中进行调查。
该模型的主要限制是问题是否是生理有关人类的OPC。虽然Th17细胞被证明是病理介质在几个口腔疾病，Th17细胞的慢性活化是否是致病OPC中仍进行调查。与最近的发现暗示C的作用在炎症和癌症白色念珠菌 ，Th17细胞免疫病理学在口腔中是调查31的一个活跃的领域。从而此处描述的模型可以用于更仔细研究Th17细胞的具体作用和它们与先天免疫细胞如何相互作用，从而在口腔免疫疾病和口腔癌详细的见解。
在该技术的关键步骤是合适的招聘和扩张的过继转移Th17细胞。这是高度依赖于生存力和IL-17A的生产移交前的体外极化Th17细胞。最好是测试他们的生存能力和细胞因子的产生，流式细胞仪分析19。妥善地执行的Th17细胞注射和小鼠感染会导致感染相关的Th17细胞免疫病理。该模型可用于测试策略，以挫败Th17细胞免疫病理学和口腔炎症的其他感染的上下文中也是如此。此外，使用该模型，可以执行二次再感染和研究在慢性感染的上下文中加剧免疫病理学Th17细胞的作用。作为该模型涉及到免疫缺陷的小鼠，它可能是非常相关的口腔生态失调见于艾滋病和PID的患者，谁重演慢性念珠菌感染患。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| CAF-2 | University of Pittsburgh (Sarah Gaffen) | - | Candida culture |
| U-bottom 96 well plates | Fisher | 055588 | Used for cell culture |
| a-CD3 | eBiosciences | 16-0031-85 | Polarization of cells to Th17 conditions |
| a-CD28 | eBiosciences | 16-0281-85 | Polarization of cells to Th17 conditions |
| m-IL-6 | Bio Basic | RC232 | Polarization of cells to Th17 conditions |
| h-TGF-b | R&D | 240-B | Polarization of cells to Th17 conditions |
| a-IFN-g | eBiosciences | 16-7311-85 | Polarization of cells to Th17 conditions |
| a-IL-4 | eBiosciences | 16-7041-85 | Polarization of cells to Th17 conditions |
| α-IL17A ef660 | eBiosciences | 50-7177-82 | Used for cell culture - 1:50 |
| α-TNFa-PE-Cy7 | eBiosciences | 25-7423-41 | Used for cell culture - 1:100 |
| α-RORgt PE | eBiosciences | 12-6981-82 | Used for cell culture - 1:50 |
| YNB w/o amino acids)/Peptone/Dextrose broth medium | Bio Basic | S507.SIZE | Mediium for candida growth |
| Shaker incubator | New Brunswick Scientific | Innova 4300 | Incubation growth for candida |
| 15 ml tubes | Bio Basic | BT888-SY | Used for cell culture and candida growth |
| 50 ml tubes | Bio Basic | CT 788-YS | Used for cell culture and candida growth |
| Table top Centrifuge | VWR International LLC | 82017-654 | For pelleting candida -900 g |
| Allegra Centrifuge | Beckman Coulter | 392302 | Cell culture - 480 g |
| 1.5 ml eppendorf tubes | Bio Basic | BT620-NS | Preparing final concentration of candida |
| 2x paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | Fixing candida for count |
| Hemocytometer | VWR International LLC | 15170-172 | Counting cells |
| PBS - Phosphate Buffered Saline | Bio Basic | PD8117 | Preparation of buffers |
| Ketamine/xylazine | Case Western Reserve University - Animal Resource Center | - | Obtained from ARC approved protocol for anesthesia |
| Ophthalmic lubricant ointment | Allergan | - | Eye ointment for animals to prevent dryness |
| Saline (0.9% NaCl) | G Biosciences | 786-561 | Administerd to animals to prevent dehydration |
| 3-mm-diameter cotton wool ball | VWR International LLC | BP7603 | 3 mm balls for candida infection |
| Heat gel pads | Case Western Reserve University - Animal Resource Center | - | for maintaining the body temperaturre and fast recovery |
| Hematoxylin and Eosin staining | Histoserv - MD | - | Tissue histology |
| 10% formalin | Electron Microscopy Sciences | JC1111/MC | Tissue histology |
| 70% ethanol | VWR International LLC | 97064-490 | Sterilization purpose |
| PMA - Phorbol 12-myristate 13-acetate | Sigma-Aldrich | P1585-1MG | Restimulation of cells |
| Ionomycin | Life Technologies | 124222 1mg | Restimulation of cells |
| Fixation permeabilization kit | eBiosciences | E16913-106 | Fixing cells for Flow cytometry |
| Tuberculin syringes | BD Biosciences | 309659 | Mice injection |
| 25 G x 3/8 needles | BD Biosciences | 309626 | Mice injection |
| Rag1 -/- mice | Jackson laboratories | Stock no: 002216 | Recipient mice |
| CD45.1 congenic mice | Jackson laboratories | Stock no:002014 | Donor Th17 cells |
| CB17-SCID mice | Jackson laboratories | Stock no: 001303 | Recipient mice |
| Balb/c mice | Jackson laboratories | Stock no: 000651 | Donor Th17 cells |
References
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