We present here a protocol for the isolation of islets from the mouse model of type 2 diabetes, Leprdb and details of a live-cell assay for measurement of insulin secretion from intact islets that utilizes 2 photon microscopy.
टाइप 2 मधुमेह 2013 में 382 मिलियन लोगों को प्रभावित करने के लिए एक भयंकर रोग है, और पिछले 2 दशकों के दौरान। 2035 द्वारा 1 592,000,000 करने के लिए स्पष्ट रूप से 2 स्थापित किया गया है टाइप 2 मधुमेह में बीटा सेल में शिथिलता की भूमिका बढ़ने की उम्मीद है। अनुसंधान प्रगति अग्नाशय islets के अलगाव के लिए तरीकों की आवश्यकता है। आइलेट अलगाव के प्रोटोकॉल जंगली प्रकार और मधुमेह Lepr डीबी (डीबी / DB) चूहों दोनों से अलग islets की उपज और गुणवत्ता में सुधार करने के लिए कुछ संशोधनों के साथ, शेयरों यहां अन्य समूहों से प्रोटोकॉल के साथ कई आम चरणों प्रस्तुत किया। एक जीवित कोशिका 2 फोटॉन इमेजिंग विधि तो टापू भीतर इंसुलिन के स्राव का नियंत्रण जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि प्रस्तुत किया है।
रोग में बीटा सेल में शिथिलता की भूमिका को व्यापक रूप से 3,4 में पहचाना गया है। ऐसे MIN6 और आईएनएस-1 के रूप में सेल लाइनों बीटा सेल व्यवहार के जीव विज्ञान को समझने के लिए उपयोगी उपकरण हैं। हालांकि, इंसुलिन का स्राव के शारीरिक नियंत्रण Langerhans के टापू के भीतर जगह लेता है। ये टापू कसकर बांध बीटा कोशिकाओं के हजारों है, साथ ही रक्त वाहिकाओं और अन्य अंत: स्रावी सेल प्रकार के होते हैं। आइलेट के भीतर इस माहौल इंसुलिन के स्राव को प्रभावित करती है और मधुमेह में महत्वपूर्ण होने की संभावना है। इसलिए, इंसुलिन का स्राव के शारीरिक नियंत्रण, और रोग के pathophysiology को समझने के लिए, इसे बरकरार टापू अध्ययन करने के लिए आवश्यक है।
आइलेट अलगाव
टाइप 2 मधुमेह के रोगियों से विशेष रूप से, मानव टापू में लाइव मानव islets और प्राप्त करने के लिए कठिन हैं। इसके अलावा, मानव टापू प्रयोगात्मक आणविक हेरफेर के लिए सीमित संभावनाएं हैं। शोधकर्ताओं इसलिए है कार्यरत हैजानवरों और टाइप 2 मधुमेह के पशु मॉडल से की सुविधा देता है। ऐसा ही एक रोग मॉडल DB / DB चूहा है। इस मॉडल को बारीकी से मानव रोग 5,6 समानताएं कि एक phenotype प्रगति के साथ टाइप 2 मधुमेह है कि एक सहज उत्परिवर्तन है। मधुमेह DB / DB चूहों से आइलेट अलगाव के लिए यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल बेहतर उपज, शुद्धि और बढ़ाया आइलेट अस्तित्व के लिए कुछ शोधन के साथ अन्य समूहों के साथ आम में कई कदम है।
2 फोटॉन इमेजिंग
यहाँ वर्णित रहते सेल 2 फोटॉन परख संख्या यों और 7 और जंगली प्रकार मधुमेह 8,9 islets के कई कोशिकाओं से ही इंसुलिन युक्त कणिकाओं की विशेषताओं का मूल्यांकन करने के लिए शोधकर्ताओं सक्षम बनाता है।
आइलेट अलगाव में सबसे महत्वपूर्ण कारक अग्न्याशय की प्रारंभिक छिड़काव है; एक के तहत एक काफी कम आइलेट उपज में अग्न्याशय परिणामों perfused। अन्य कारकों को भी इस तरह के पाचन के समय और आंशिक रूप से छिड़काव के स्तर…
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by an Australian Research Council Grant DP110100642 (to PT) and National Health and Medical Research Council Grants APP1002520 and APP1059426 (to PT and HYG).
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Liberase TL 5mg | Roche | -5401020001 | |
Collagenase type IV-1g | Gibco-Life Technologies | 17104-019 | |
Histopaque 1077 500ml | Sigma Aldrich | 10771 | |
RPMI 1640 Medium (10X) 1L | Sigma Aldrich | R1383 | to prepare isolation media |
RPMI 1640 (1X) 500ml | Gibco-Life Technologies | 21870-076 | to prepare cultured media |
Penicillin-Streptomycin 100ml | Gibco-Life Technologies | 15140-122 | to prepare cultured media |
Fetal bovine serum 500ml | Gibco-Life Technologies | 10099-141 | to prepare cultured media |
DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) | Gibco-Life Technologies | 11966-025 | to dilute the liberase |
Metamorph program | Molecular Devices, USA | to analyze the 2-photon images |