Evaluatie van tumor-infiltrerende leukocyten subsets in een subcutane tumormodel

Russell K. Pachynski; Alexander Scholz; Justin Monnier; Eugene C. Butcher; Brian A. Zabel

doi:10.3791/52657

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Evaluatie van tumor-infiltrerende leukocyten subsets in een subcutane tumormodel

20.1K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/52657

⸱

13 april 2015

Russell K. Pachynski¹ , Alexander Scholz³ , Justin Monnier²^,³ , Eugene C. Butcher³ , Brian A. Zabel²

¹Division of Oncology, Department of Medicine, Washington University School of Medicine, ²Palo Alto Institute for Research and Education, Veterans Affairs Palo Alto Health Care System, ³Laboratory of Immunology and Vascular Biology, Department of Pathology, Stanford University School of Medicine

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een methode voor de gedetailleerde evaluatie van leukocytensubsets binnen de tumormicro-omgeving in een muistumormodel. Chemerin-uitdrukkende B16 melanoomcellen werden subcutaan geïmplanteerd in syngene muizen. Cellen uit de tumormicro-omgeving werden vervolgens gekleurd en geanalyseerd door middel van flowcytometrie, wat gedetailleerde leukocytensubsetanalyses mogelijk maakt.

Samenvatting

Gespecialiseerde immuuncellen die de tumor micro infiltreren reguleren de groei en overleving van neoplasie. Kwaadaardige cellen moet ontwijken of te ondermijnen anti-tumor immuunrespons om te overleven en te bloeien. Tumoren maken van een aantal verschillende mechanismen van het immuunsysteem "escape", waaronder de werving van tolerogene DC, immunosuppressieve regulerende T-cellen (Tregs) en myeloide suppressor cellen (MDSC) dat cytotoxische anti-tumor responsen te remmen. Immunostimulerende dendritische cellen, natuurlijke killer cellen die aangeboren anti-tumor immuniteit haven en cytotoxische T-cellen allemaal kunnen deelnemen aan tumorsuppressie: Omgekeerd kunnen anti-tumor effector immuuncellen de groei en uitbreiding van maligniteiten vertragen. De balans tussen pro- en anti-tumor leukocyten bepaalt uiteindelijk het gedrag en het lot van de getransformeerde cellen; een veelheid van menselijke klinische studies hebben aangetoond dit uit. Zo, gedetailleerde analyse van leukocyten subsets binnende tumor micro-omgeving is steeds belangrijker geworden. Hier beschrijven we een werkwijze voor het analyseren infiltrerende leukocyten subsets aanwezig in de tumor micro-omgeving in een muizen tumormodel. Muis B16 melanoma tumorcellen werden subcutaan geïnoculeerd in C57BL / 6 muizen. Op een bepaald tijdstip, werden tumoren en de omliggende huid weggesneden en bloc en in enkele cel suspensies, die vervolgens werden gekleurd voor multi-color flowcytometrie verwerkt. Hand van diverse leukocyten deelverzameling markers, konden we de relatieve percentages van infiltrerende leukocyten subsets tussen controle en chemerin expressie tumoren vergelijken. Onderzoekers kunnen dergelijke gebruiken om de immune aanwezigheid in de tumor micro-omgeving en in combinatie met traditionele schuifmaat maat metingen van tumorgroei, zal mogelijk kunnen zij het effect van veranderingen in immune samenstelling op tumorgroei helderen bestuderen. Een dergelijke techniek kan worden toegepast op elk tumormodel waarin de tumor en de micro Ceen worden gereseceerd en verwerkt.

Inleiding

Het evenwicht tussen groei en bevordering tumor regressie is gedeeltelijk afhankelijk van de balans tussen pro- en anti-tumor-infiltrerende leukocyten aanwezig in de micro ^1,2. Om de tumor micro studie (TME) en specifiek de infiltrerende leukocyten subpopulaties, ontwikkelden we een methode voor de evaluatie van subcutane tumoren in een murine tumormodel. Het belang van het bestuderen van de tumor micro-omgeving is bekend en ondersteund in de literatuur. Talrijke studies hebben aangetoond dat de balans van pro- en anti-tumor infiltrerende immuuncellen kan invloed hebben op de resultaten van tumorgroei, niet alleen in muizen maar ook menselijke studies (bes....