Method Article

Eisenchlorid-induzierte Thrombose Mausmodell für Halsschlagader und Mesentery Vessel

DOI:

10.3791/52838

⸱

June 29th, 2015

 , 
1Vascular Biotechnology Laboratory, Baker IDI Heart and Diabetes Institute

In This Article

Summary

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Das FeCl3-induzierte Thrombosemodell bei Mäusen wird hierin beschrieben. Es wird eine Methode zur Überwachung des Thrombuswachstums durch intravitalmikroskopische Beobachtung an einem Mesenterialgefäß und durch Blutflussmessung in der Halsschlagader vorgestellt.

Abstract

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Schwere Thrombosen und ihre ischämischen Folgen wie Myokardinfarkt, Lungenembolie und Schlaganfall sind weltweit große Gesundheitsprobleme. Die Eisenchlorid-Verletzung ist heute eine gut etablierte Technik, um schnell und genau die Bildung von Thromben in freiliegenden Venen oder Arterien mit kleinem und großem Durchmesser zu induzieren. Dieses Modell hat eine Schlüsselrolle bei der Erforschung der Pathophysiologie von Thrombosen, bei der Entdeckung und Validierung neuartiger Antithrombotika und beim Verständnis des Wirkmechanismus dieser neuen Wirkstoffe gespielt. Im Folgenden wird die Implementierung dieser Technik an einem Mesenterialgefäß und einer Halsschlagader bei Mäusen vorgestellt. Die Methode beschreibt, wie zirkulierende Leukozyten und Blutplättchen mit einem Fluoreszenzfarbstoff markiert und intravitalmikroskopisch am exponierten Mesenterium ihre Anreicherung an der verletzten Gefäßwand beobachtet werden kann, was zur Bildung eines Thrombus führt. An der Halsschlagader wird der durch die Gerinnselbildung verursachte Verschluss durch Überwachung des Blutflusses mit einer Dopplersonde gemessen.

Introduction

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Die Untersuchung der Mechanismen der Entstehung von Thrombosen und der Bewertung der Wirksamkeit der anti-thrombotischen Arzneimitteln zu erfordert etablierten experimentellen Tiermodellen. Großtiermodellen waren die ersten, verwendet werden, da sie große Schiffe mehr ähnlich wie beim Menschen als Nagetiere 1. Jedoch hohe Kosten, die größeren Einrichtungen erforderlich, und die Schwierigkeiten bei der Manipulation von ihnen genetisch sind große Nachteile auf ihre Verwendung und große Tiere werden nun bis zum späten präklinischen Studien beschränkt, sobald vorläufige Tests an Nagetieren haben aussagekräftige Ergebnisse 2 angegeben. Mit breiten Ve....

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Protocol

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Alle Experimente mit Tieren wurden von der Alfred Medical Research and Education Precinct Tierethikkommission (E / 1534/2015 / B) freigegeben. Alle chirurgischen Manipulationen wurden unter Vollnarkose durchgeführt und die Tiere nicht Schmerzen können jederzeit auftreten. Alle beschriebenen Versuche sind keine Wiederherstellung.

1. Vorbereitung

  1. Geschnitten dünne Bänder aus Filterpapier (1 mm x 2 mm).
  2. Frisch herzustellen 2 Eisenchloridlösungen von 4% (w / v) bis 6% (w / v) in entionisiertem Wasser verdünnt. Vorbereitung Rhodamin 6G Lösung 0,3% in PBS, durch 0,22 um filtriert.
  3. Schneiden Sie ein kleines Stück (....

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Results

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Die Leuchtstoffintravitalmikroskopie Beobachtung des Mesenterium wird die Ansammlung von Rhodamin 6G zeigen markierte Thrombozyten und Leukozyten entlang der Gefäßwand durch FeCl 3 verletzt. Die fortschreitende Bildung eines Teil Thrombusbildung wird in einem 200 & mgr; m Mesenterium Gefäß (Abbildung 1) überwacht. Ein Thrombus langsam auftaucht und eindeutig identifizierbar ist nach der ersten Minute der Exposition gegenüber FeCl 3 (Abbildung 1, t = 60 s). 40 s.......

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Discussion

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Das Eisenchlorid induzierte Thrombose-Modell ist eine hervorragende Forschungswerkzeug. Wie in dieser Studie gezeigt, ist es sehr einfach zu implementieren und in Kombination mit Intravitalmikroskopie oder Doppler-Durchflussmesser verwendet wird, eine gute Echtzeit-Überwachung der Thrombusbildung liefert sie. Einstellen der Belichtungszeit und der Konzentration von FeCl 3, sondern bietet auch die Möglichkeit, entweder nicht-okklusiv oder okklusive Thromben erzeugen.

Jedoch hat die.......

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Disclosures

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Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Acknowledgements

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Die Autoren möchten sich an den technischen Support von Joy Yao und Dr. Karen Alt sowie Mittel aus dem NHMRC und NHF anzuerkennen.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Whatman Chromatographie-PapierGE Healthcare3030917
Eisen(III)-chlorid 40% (w/v)VWR24212.298
Rhodamin 6GSigmaR4127
Inverses Mikroskop OlympusIX81
Digitale Schwarz-Weiß-Kamera OlympusXM10
Doppler-DurchflussmessgerätTranssonicTS420
Nano-Doppler-DurchflusssondeTranssonic0,5 PBS
KetaminHospira 0409-2051-05
Xylazin (Rampun)Bayer75313 
PetrischaleSarstedt82.1472
Insulinspritze (29 G)BD Ultrafeine326103
Applikatoren mit WattespitzeBSN medical211827A
Dynek dysilk NahtmaterialDynek Pty LtdCS30100
Dulbecco's Phosphatpuffer Kochsalzlösung (PBS)Gibco life technologies21600-069
HeizkissenKirchnerT60

References

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  1. Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
  2. Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L.

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Ferric Chloride ThrombosisMouse ModelCarotid ArteryMesentery VesselIntravital MicroscopyDoppler Flow MeterFluorescent LabelingThrombus FormationBlood Flow MeasurementVessel Occlusion

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