Bu protokol, eksize edilmiş bağırsak dokusu preparatlarının veya "bağırsak keselerinin" bağırsak bariyer fonksiyonunun ex vivo modeli olarak kullanımını tanımlar. Bu model, sindirim hastalığının hayvan modellerinde belirli bağırsak bölgelerinde hem epitel bariyerinin hem de mukoza jel tabakasının bütünlüğünü değerlendirmek için kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için
Bu makalede
Özet
Özet
epitelyal bariyer gastrointestinal sistemin ilk doğal savunma ve seçici küçük epitel boyunca moleküller ve neredeyse tamamen epitel makromoleküler taşıma yasaklayan taşınmasını kısıtlayan, altta yatan doku bölmelerine lümenin ulaşım düzenler. Bu seçicilik, lipofilik moleküller ve hem apikal reseptörleri ve epitelyumun dar kavşak protein kompleksleri taşıma sınırlar mukoza jel tabakası ile tespit edilir. Epitel in vitro hücre kültürü modelleri uygun olmakla birlikte, bir model olarak, bu eksikliği Mikrobiyota, mukoza-jel, epitel ve bağışıklık sistemi arasındaki etkileşimlerin karmaşıklığı. Öte yandan, alana özgü hiçbir gösterge ile bağırsak emilim veya geçirgenlik in vivo değerlendirilmesi gerçekleştirilebilir, ancak bu deneyler, genel olarak mide-bağırsak absorpsiyonu ölçülür. Ex vivo geçirgenlik deneyleri "intestinal kesesi" kullanılarak; Bağırsak sitesi özgüllük avantajıyla genel bağırsak bütünlüğü veya belirli bir molekülün karşılaştırmalı taşınmasını ya ölçme hızlı ve hassas bir yöntemdir. Burada geçirgenlik çalışmaları için bağırsak keseleri hazırlanması ve belirgin geçirgenlik (P app) hesaplanmasını tarif intestinal bariyer boyunca bir molekülün. Bu teknik değerlendirme ilaç emiliminin bir yöntem olarak kullanılabilir, ya da gastrointestinal hastalıkların hayvan modellerinde bölge epitelyal bariyer yetmezliği incelemek.
Giriş
Mide-bağırsak sisteminin intestinal epitelyal bariyer Yetişkin bir insanda, 400 m2'de yaklaşık mukozal yüzey alanıdır. Sonuç olarak, sürekli mikrop, yutulan ilaç, besin ve bakteriyel toksinler karşı maruz kalmaktadır. ev sahibi sadece tolere ortakçı bakteri ve potansiyel patojenler arasında ayrım olmamalıdır, ama aynı zamanda besinlerin emilimini sağlarken, epitel bariyerini geçen bu türlerin ve salgılanan molekülleri engellemek gerekir. Bu nedenle, bağırsak epiteli rolü lümen içeriği 1 için seçici bir bariyer olarak hareket etmektir. Bu kurucu ve uyarılabilir mekanizma 2 oluşan bir yanıt biyolojik sistem yoluyla hareket mukozada ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu protokol tüm hayvan çalışmaları prosedürleri onaylı Newcastle Hayvan Etik Kurulu Üniversitesi'ne sıkı sıkıya bağlı kalmanın ile yapılır.
Araçların, Kültür Medya ve Yemekleri 1. Hazırlık
- 37 önceden sıcak Ortam 199 (TC199) veya Dulbecco Modifiye Eagle Ortamı (DMEM) ortamı ° C. Ön oxygenate% 95 O 2 /% 5 CO 2 ile köpüren ile orta. Orta 7.3 bir son pH değerine sahip olduğunu kontrol edin.
- Her kese için iki adet 5 cm bölümleri keserek dikiş hazırlayın. Döngü kapatılmamış bir düğüme dikişler.
2. Diseksiyon ve gastrointestinal sistemde hazırlanması
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu protokol, mide-bağırsak hastalığının hayvan modellerinde intestinal bariyer fonksiyonu bölgesel değişiklikler incelemek için kullanılabilir. Gastrointestinal sistemin 7 değişen alanlarında mukozal yüzeyi boyunca paraselüler prob akışı ölçülerek, epitelyal sıkı bütünlüğü değerlendirilebilir. Buna ek olarak, boyut (Şekil 2) ya da hidrofob (Şekil 3), epitelyal pertürbasyon derecesi ya da mukoza jel tabakasının bütünlüğünün paraselüler prob doğ.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada, mukozal bariyer fonksiyonunu ex vivo değerlendirmek için izolasyon ve bağırsak keselerinin hazırlanmasını ayrıntılı var. Bağırsak kese hazırlıkları öncelikle bağırsak boyunca aday ilaçların emilimini inceleyerek, ilaç araştırma faydalanılmıştır. Bununla birlikte, bu deney, eşit ölçüde iyi barsak hastalığı çalışma için uygundur. bölge ve geçirgenlik sahaya özgü değerlendirilmesi ile büyük ölçüde değişebilir bağırsak geçirgenliği sindirim hastalıklarında mukozal bütünlüğün bölgesel öneminin daha iyi anlaş.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.
Teşekkürler
Bu çalışma, Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Projesi Hibe APP1021582 ve Sparke Helmore/NBN Triatlonu ve merhum Leslie Kenneth McFarlane'in Malikanesi'nin sponsorluğunda bir Hunter Tıbbi Araştırma Enstitüsü hibesi tarafından finanse edilmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Dekantel Emilmeyen İpek sütür | Braintree Scientific | SUT-S 116 | |
| Media 199 (TC199) | Yaşam Teknolojileri | 11043-023 | Floresan ile etkileşime girdiği için fenol kırmızısı yok |
| Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı (DMEM) | Yaşam Teknolojileri | 21063-045 | Floresan |
| N-asetilsistein | Sigma Aldrich | Ortamda 10 mM'de kullanım | |
| Küçük hayvan vasküler kateter: Physiocath | Data Sciences International | 277-1-002 | |
| FITC-Dekstran 4.400 MW | Sigma Aldrich | FD-4 | |
| FITC-Dekstran 20.000 MW | Sigma Aldrich | FD-20 | |
| FITC-Dekstran 70.000 MW | Sigma Aldrich | FD-70 |
Kaynaklar
- Goggins, B. J., Chaney, C., Radford-Smith, G. L., Horvat, J. C., Keely, S. Hypoxia and Integrin-Mediated Epithelial Restitution during Mucosal Inflammation. Frontiers in immunology. 4, 272(2013).
- Otte, J. M., Kiehne, K., Herzig, K. H. Antimicrobia....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
