La inyección intracerebroventricular de péptidos beta-amiloide en ratones normales para inducir de forma aguda déficits cognitivos como la enfermedad de Alzheimer,

Resumen

El amiloide-β (Aß): se inyecta modelo animal permite la administración de una cantidad y especies de fragmentos Aß definido y reduce las diferencias individuales dentro de cada grupo de estudio. Este protocolo describe la inyección intracerebroventricular (ICV) de Aß sin instrumentos de estereotaxia, permitiendo la producción de anomalías en el comportamiento de Alzheimer como en ratones normales.

Resumen

El β de amiloide (Aβ) es un importante mediador patológico de la enfermedad de Alzheimer (EA) tanto familiar como esporádica. En el cerebro de los pacientes con EA, se observa una acumulación progresiva de oligómeros y placas de Aβ. Se cree que estas anomalías de Aβ bloquean la potenciación a largo plazo, deterioran la función sináptica e inducen déficits cognitivos. Las evidencias clínicas y experimentales han revelado que el aumento agudo de los niveles de Aβ en el cerebro permite el desarrollo de fenotipos similares al Alzheimer. Por lo tanto, en muchos casos es necesario un protocolo detallado que describa cómo generar de forma aguda un modelo de ratón con EA mediante la inyección intracerebroventricular (ICV) de Aβ. En este protocolo, se incluyen los pasos del experimento con un ratón inyectado en Aβ, desde la preparación de péptidos hasta la prueba de anomalías de comportamiento. El proceso de preparación de las herramientas y los sujetos animales antes de la inyección, de inyectar el Aβ en el cerebro del ratón mediante la inyección de ICV y de evaluar el grado de deterioro cognitivo se explican fácilmente a lo largo del protocolo, con énfasis en los consejos para una inyección efectiva de ICV de Aβ. Al imitar ciertos aspectos de la EA con una inyección designada de Aβ, los investigadores pueden evitar el proceso de envejecimiento y centrarse en la patología posterior de las anomalías de Aβ.

Introducción

Dado que el amiloide-β (Aß) es una característica patológica de la enfermedad de Alzheimer (EA), el desarrollo de modelos animales de AD se ha centrado en la sobreexpresión neuronal de Aß. Debido a que las mutaciones en la proteína precursora amiloide (APP) o la presenilina (PS) conducen a la perturbación del equilibrio Aß y en última instancia a la patogénesis de la EA familiar ^1, los modelos de ratón que implican APP o PS mutaciones genéticas han sido generalmente aceptada. Entre la amplia gama de ratones transgénicos, los modelos prototípicos de ratón incluyen los siguientes: Tg2576, PDAPP, APP / PS1 y APP23. En el cerebro, estos ratones exhiben general....

Protocolo

Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud de Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (NIH Publications No. 8023, revisada 1978) y con el Comité de Cuidado y Uso de Animales del Comité de Cuidado y Uso de Animales institucional de KIST (Seúl, Corea).

1. Preparación de los animales

1. Preparar un grupo de ratones ICR macho de 7 semanas de edad (o C57BL / 6).
2. Deje que los ratones se someten a un proceso de aclimatación durante 3-7 días después del transporte para restaurar la homeostasis. En general, colocar un grupo de 4-5 ratones en cada jaula y mantenerlas a 22-23 °....

Resultados

Esta sección ilustra ejemplos de los resultados que se pueden obtener por la confirmación de la agregación de Aß y evaluación Y-laberinto de los déficits de memoria. Uso de la longitud completa de Aß se produjo (1-42) péptido de 42 aminoácidos, mezcla de monómeros Aß, oligómeros y fibrillas (Figura 3). A través de la etapa de monomerización HFIP inducida, se obtuvieron monómeros relativamente homogéneos (carril B). Después de la incubación de 7 días, diversos tamaños de .......

Discusión

El paso más importante en este protocolo es la inyección ICV de Aß. Este protocolo está diseñado para inyectar Aß en la región de ICV de los ratones sin instrumentos estereotácticas ^11,12. Antes de iniciar un experimento, un período preliminar de las inyecciones de práctica con un tinte azul en lugar de Aß debe llevarse a cabo para alcanzar la suficiente destreza. Inmediatamente después de la inyección, es necesario comprobar si la inyección de pigmento se lleva a cabo correctamente. Retire cuidadosamente el .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Ratón ICR	Orientbio		macho, 6-8 semanas, 27-29 g de peso corporal
C57BL/6 ratón	Orientbio		macho, 6-8 semanas, 21-23 g de peso corporal
Amiloide-beta1-42	en síntesis interna		concentración de stock: 1 mM/DMSO, concentración inyectada: 100 μ Jeringa de inyección M/10% DMSO y 90% PBS
ICV (calibre 26s)	Hamilton	80308
Evans blue dye (EBD)	abcamBIochemicals	ab120869	1% EBD en PBS
DMSO	Sigma	D2650
PBS	gibco	10010-023
Gradi-GelTM II Gradient PAGE Kit	ELPiS Biotech	EBS-1056	15% Gel
Precision Plus ProteinTM Dual Xtra Standards	Bio-Rad	161-0377
Kit de tinción de plata	GE-Healthcare	17-1150-01
LabDiet	Orientbio	5053