Studieren Wnt Signaling Während Patterning of Conducting Airways

John Snowball; Manoj Ambalavanan; Debora Sinner

doi:10.3791/53910

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Methodenartikel

Studieren Wnt Signaling Während Patterning of Conducting Airways

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DOI:

10.3791/53910

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16. Oktober 2016

John Snowball¹ , Manoj Ambalavanan¹ , Debora Sinner¹^,²

¹Neonatology and Pulmonary Biology-Perinatal Institute, Cincinnati Children’s Hospital Medical Center, ²University of Cincinnati, College of Medicine

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Die Verwendung von Reporter - Mäuse gekoppelt ganze Berg und Abschnitt Färbung, Mikroskopie und in - vivo - Tests erleichtert die Analyse der Mechanismen , die die normale Strukturierung der Atemwege zu Grunde liegen. Hier beschreiben wir, wie diese Techniken zur Analyse der Wnt-Signal während trachealen Entwicklung beigetragen.

Zusammenfassung

Wnt-Signalwege spielen eine entscheidende Rolle während der Entwicklung der Atemwege. Die Definition präziser Mechanismen der Differenzierung und Morphogenese, die durch den Wnt-Signalweg gesteuert werden, ist erforderlich, um zu verstehen, wie Gewebe während der normalen Entwicklung strukturiert sind. Dieses Wissen ist auch entscheidend für die Bestimmung der Ätiologie von Geburtsfehlern wie Lungenhypoplasie und Tracheobronchomalazie. Die Analyse der frühesten Entwicklungsstadien der Atemwege stellt eine Herausforderung dar, da die begrenzte Menge an Gewebe die Durchführung von Standardprotokollen verhindert, die besser für postnatale Studien geeignet sind. In diesem Artikel diskutieren wir Methoden zur Untersuchung der Zelldifferenzierung und -proliferation in den Atemwegen. Wir beschreiben Techniken wie die Färbung des gesamten Passepartouts, die Verarbeitung des Gewebes für die konfokale Mikroskopie und die Immunfluoreszenz in Paraffinschnitten, die bei der Entwicklung der trachealen Lunge angewendet werden. Wir diskutieren auch Methoden zur Untersuchung der Differenzierung des trachealen Mesenchyms, insbesondere der Knorpelbildung. Die in der vorliegenden Arbeit diskutierten Ansätze und Techniken umgehen die Begrenzung des Materials bei der Arbeit mit embryonalem Gewebe und ermöglichen ein besseres Verständnis des Strukturierungsprozesses bei der Entwicklung leitender Atemwege.

Einleitung

Respirationstrakt Entwicklung wird durch embryonaler Tag 9 (E9) mit dem Auftreten von Nkx2.1 - positiven Zellen in der Bauch endodermalen foregut ^1,2 eingeleitet. Ösophagus-Trachealtubus Trennung wird durch E11.5 lösen , wenn die Rohre als getrennte Einheiten unterschieden werden kann, die jeweils ³ durch mesenchymale Gewebe umgeben. Wnt - Signalisierung spielt eine Schlüsselrolle in der Spezifikation des Respirationstraktes wie Deletion Wnt2 und Wnt2b durch die splanchnic Mesenchym und Löschung von β-Catenin von der endodermalen respiratorischen Epithels exprimiert wird in Lunge agenesis ^4,5 führen. Unsere ....