Abstract
Periferik arter hastalığı (PAH) güvenilir bu hastalık için yeni tedavilerin geliştirilmesi için gerekli olan insan hastalığı yeniden kardiyovasküler morbidite ve gelişmiş ülkelerde ölüm ve hayvan modellerinde önde gelen nedenidir. Fare hindlimb iskemi modeli yaygın olarak bu amaçla kullanılmaktadır, ancak femoral arter ligasyonu ile akut ekstremite iskemisi uyaran standart bir uygulama iskemi vasküler ve iskelet kas dokusu yanıtları incelemek için araştırmacıların yeteneğini tehlikeye, önemli doku nekrozuna neden olabilir . Femoral arter ligasyonu için alternatif bir yaklaşım AMEROID konstriktör- kullanımı yoluyla yavaş yavaş femoral arter oklüzyonu meydana gelmesidir. daha yavaş, sub-akut iskemi ile sonuçlanır - 3 gün, femoral arter ligasyonu siteleri ile aynı ya da farklı yerlerde femoral arter etrafına yerleştirildiğinde, bu cihazlar üzerinde 1 arter tıkanması. Bu w, daha az önemli iskelet kası doku nekrozuna nedenhich daha yakından insan PAD görülen yanıtları taklit edebilir. genetik altyapı etkiler hem akut ve subakut iskemi modellerinde çıktıları, çünkü fare suşu dikkate en iyi modeli seçiminde önemlidir çalışılmaktadır. Bu yazıda fare subakut veya akut hindlimb iskemi ikna etmek için uygun prosedür ve fare femoral arter üzerinde bitişik harfler veya AMEROID konstriktör- anatomik yerleşimi anlatılır.
Introduction
Periferik arter hastalığı (PAH), gelişmiş ülkelerde 1 kardiyovasküler morbidite ve mortalitenin önde gelen nedenidir. Elde edilen egzersiz veya dinlenme ağrısı ve bazen bacak amputasyon gerektiren ülser ve kangren iyileşmeyen ile ekstremite iskemi neden periferik arterlerin aterosklerotik tıkanması PAD sonuçları. Esasen etkili medikal tedaviler 4 mevcut olarak PAD hedefleyen terapiler, öncelikle endovasküler 2 veya cerrahi revaskülarizasyon 3 yöneliktir.
Baypas greft bazı toplumlarda (örneğin, sigara içen kadınlar, sigara safen ven greft) 6,7 kötüdür 5 (5 yıl içinde% 50 kadar) yüksek başarısızlık fiyat bilgisi Ne yazık ki, revaskülarizasyon, genellikle sınırlı fayda sağlar. Böyle anjiyoplasti ve stent olarak Endovasküler yaklaşımlar, aynı zamanda (1 yıl içinde% 50 fazla) yüksek restenoz oranları tehlikeye edilir, i özellikleilaç salınımlı balonlar ve stentler kullanımı biraz 9-11 sonuçlar alınmasını sağlamıştır rağmen n, hastalık 8 Femoropopliteal. PAD için yeni tedaviler geliştirmek için güvenilir insan hastalığı yeniden hayvan modelleri geliştirmek için gereklidir.
Bugüne kadar, PAD en yaygın model en çok farelerde 12,13 gerçekleştirilir arka bacak iskemisi modeli (HLI) 'dir. en yaygın belirtisi, model proksimal ve distal femoral arter cerrahi ligasyonu gerektirir ve müdahil yan dalları kan akımı ve akut ekstremite iskemi indüksiyon tıkanması ile sonuçlanan geminin eksizyonu ile izledi. HLI periferik ekstremite kas dokusunda anjiyojenik ve arteriyojenik tepkiler ve bu tepkilerin çeşitli terapiler (örneğin, ilaçlar, gen aktarım, kök hücreler) etkilerini incelemek amacıyla öncelikle kullanılır olmuştur. Daha yakın zamanlarda, bizim grup iskelet kas hücrelerinin rolünü incelemek için bu modeli kullandı in tepki iskemi ve sonuçları 14 genetik farkların etkilerini ekstremite için.
HLI modeli mevcut iskemi damar ve kas yanıtları genetik (yani, doğal suş) 15 bağlıdır anlayış, yaş 16 ve diyabet 17 de dahil olmak üzere, diğer hastalıklar veya ateroskleroz ile ilgili koşullar, varlığını veya yokluğunu kolaylaştırmıştır hiperkolesterolemi 18. Ancak, geleneksel HLI modelinin önemli bir zayıflık insan PAD periferal arterlerde tıkayıcı aterosklerotik lezyonların kademeli gelişmenin bir sonucu olarak kronik iskemi neden halbuki, akut ekstremite iskemisi 12,13 modeli olmasıdır.
Bu zayıflığı aşmak için bir girişim, Tang ve arkadaşları başlangıçta AMEROID konstriktör- 19 kullanılarak kademeli femoral arter tıkanıklığı bir fare modeli, ve daha sonra d aynı grup geliştirdiBenzer bir fare modeli 20 eveloped. AMEROID konstriktör- kronik miyokardiyal iskemi 21,22 bir köpek modelinde 1950'lerde ilk açıklanmıştır. Bu cihazlar, genellikle kazein, higroskopik bir malzemeden bir iç tabaka saran bir dış metal manşon, ve bir arter etrafına yerleştirilen zaman çevre dokulardan nemi emer onlar yavaş yavaş damar tıkanıklığı neden olur. Modelin bunların modifikasyonda, Yang ve ark., Proksimal ve cerrahi ligasyon sitelerinin benzer yerlerde distal femoral arter hem konstriktör- yerleştirilir ve geleneksel modelde olduğu gibi, femoral arter yan dalları bağlanmıştır. Ameliyat sonrası 5 hafta ve daha az kas nekrozu 20 - Akut HLI karşılaştırıldığında, AMEROID konstriktör kaynaklı iskeminin enflamatuar ve kesilme baskısı bağımlı gen alt ekspresyonu, düşük kan akışı geri 4 sonuçlandı. Bu gözlemlere dayanarak, bu kademeli arter tıkanıklığı P bir model olabilir hissedildiinsan hastalığı için daha uygun AD.
Özellikle, ilk çalışmada, AMEROID konstriktör kaynaklı iskeminin etkileri yalnızca işemi kaynaklı kas nekroz 15 göreceli olarak dirençli olan, C57BL / 6 fareleri 19 incelendi. Son zamanlarda daha yavaş iskemi modelinde değişik ve daha iskemi, hassas BALB / C fare türünde 23 etkilerini inceledi. Modelin ilk tezahürü olarak, proksimal ve distal femoral arter hem konstriktör- yerleştirilen ancak bozulmamış tüm yan dalları bıraktı. İkinci, daha hafif değişiklik, biz sadece proksimal femoral arter tek bir yılanı yerleştirilir ve yine bozulmamış arterin tüm yan braches bıraktı. Bu modele göre, her iki modifikasyon, biz, bu BALB / c fareleri, ancak C57BL / 6 fareleri bulunan benzer kan akışını ve vasküler yoğunluğa sahip olmasına rağmen önemli bir kas nekrozunu gösterilir. Önceki çalışmamızda 14 benzer şekilde, bu bulgular o bacak kası gösterdiYaralanma sadece kan akımı etkisinde, ancak kısmen genetik yapılarına bağlı olduğu değildir. Ayrıca, biz ekstremite kan akımı böylece modeli birden fazla 'subakut' yerine kademeli ekstremite iskemi gibi görünüyor, 3 gün içinde nadir düştü bulundu.
Bu önceki çalışmalara göre, arka bacak iskemisi uyarılması için tek bir yöntem, her durumda uygun olmayabilir açıkça görülmektedir. Koşullarında (örneğin, genetik farklılıkları ve varlığı ya da ko-morbid koşullar yokluğunda) etkisi damar ve iskelet kas özel cevapları, çeşitli araştırmacılar bulabilir için gerekli kronik olup ve / veya en iyi şekilde arka bacak iskemisi şiddetini değiştirmek için kendi amaçlarına uygun. Ayrıca, model önceki tariflerde tipik haliyle tekniğin güvenilir arası Araştırmacı tekrarlanabilirliği kolaylaştırmak için uygun bir anatomik yerler yoktu. Bu yazıda, fare akut veya subakut ya hindlimb iskemi uyarılması için yöntemleraçıklanmaktadır ve hassas anatomik oluşumlar bulunur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bütün hayvan deneyleri Duke Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış bir protokole göre gerçekleştirilmiştir. her iki cinsten kullanılabilmesine rağmen çalışma bilimsel bir amaç için belirtildiği gibi erkek fareler, bu çalışmada kullanılmıştır.
1. Epilasyon
- 37 ° C'de ayarlanmış bir kapalı ısıtma yastığı ve izofluran sürekli akışına bağlı bir roket ucu konisi bağlantı oluşan bir ameliyat öncesi hazırlama alanı kurmak anestezinin indüksiyonu öncesinde.
- Anestezi indüksiyon odasında fare yerleştirin. % 3 - 1 ile 1 L / dk ve izofluran O 2 debimetre ayarlayın.
Not: Anestezi, tipik olarak% 2 izofluran ile 25 g fare indüklenir. - yavaşça odasına sallanan ve bir düzeltilmesi refleksi eksikliği gözlemleyerek farenin teşvik yanıtını kontrol edin.
- Açılış öncesinde izofluran temizlemek için O 2 ile odasına yıkayın. Hızla ısıtma p için fareyi hareket ettirinreklam ve roket ucu konisi yoluyla izofluran bağlayın.
- % 1.5 izofluran ayarlayın. Pedal refleks (ayak tutam) tarafından uyaran yanıtını kontrol edin.
- Ameliyat sırasında kurumasını önlemek için her iki göze liberal oftalmik yağ sürün.
- küçük bir elektrik düzeltici kullanarak her iki arka bacaklarda saç tıraş. Cildi laserasyon yaralanmasıdır önlemek için tıraş sırasında gergin cildi tutun.
- Önceden ısıtılmış epilasyon kremi uygulayın ve 1 dakika boyunca bekletin. Yavaşça nemlendirilmiş gazlı bez kullanılarak silin.
- daha sonra cerrahi işlem için, izofluran kapatın ve kafes yatak aspire olmayan fare sağlamak için boş bir kağıt havlu kaplı kurtarma kafesine fareyi hareket ettirin. sternal yatma koruyabilmiştir kadar hayvan izleyin. Aksi takdirde, cerrahi masaya fareyi hareket ettirin.
NOT: Epilasyon işlemi cildi tahriş ve perfüzyon ölçümleri etkileyebilir. p önce hayvanın saçlarını çıkardıktan sonra 2 gün, 1 - beklenmesi tavsiye edilirBir ameliyat öncesi perfüzyon taraması erforming veya ameliyat gerçekleştirmek.
2. Ön-Cerrahi Hazırlık
- Bu işlem sırasında aşağıdaki araçları kullanın; küçük düz cerrahi makas, 2 ince uçlu açılı forseps, küçük Graefe forseps, iğne sürücü forseps, 3 retraktörleri, küçük yaylı makas ve ince uçlu pamuklu çubuk.
- Ameliyat başlamadan önce bir otoklav kullanarak tüm araçları sterilize edin. En fazla 5 hayvanlar için, her cerrahi işlem öncesi ve arasında sıcak boncuk sterilizatör kullanın. 5 daha büyük gruplar ameliyatlar için ek cerrahi alet paketleri sterilize edin.
- kapalı ısıtma yastığı ve izofluran port oluşan steril cerrahi alanında hazırlayın. 10 Stereo diseksiyon mikroskobu altında tüm çalışmaları gerçekleştirmek.
- Anestezisi ve adımları 1.5 1.1 de tarif edildiği gibi fare hazırlamak.
- Fare tamamen uyuşturulmuş olup olmadığını kontrol edin ve cerrahi masaya bir yatar pozisyonda içine yerleştirin. Cerrahi bant kullanarak iki bacak sabitleyin. </ Li>
- sıcaklık kontrollü ısıtma yastığı kullanılarak, sıcaklık probu takmak ve yanlışlıkla işlem sırasında çıkardı olmayacak emin olmak için cerrahi bant kullanarak cerrahi platformunun tabanına sabitleyin.
- 3 alternatif povidon-iyot ve alkol mendil kullanarak kesi sitesine temizleyin. Steril cerrahi örtü ile hayvan örtün ve kesi sitesine ortaya çıkarmak için bir delik.
Bacak İskemi 3. İndüksiyon
- Karın doğru diz çalışan, medial uyluk merkezi boyunca bir başlangıç kesi yapmak ve ince makas (Şekil 1A) ile yaklaşık 1 cm kesi uzatmak için bir neşter kullanın.
Şekil 1. Cerrahi Alan ve Fare Arka ayağın İskemi Cerrahisi Damar Anatomik Merkezi. (A) Dış görünümyatar pozisyonda bir fare hindlimb. Yumurtadan çizgi düzgün hindlimb iskemi işlemleri gerçekleştirmek için kesi sitesini gösterir. Proksimal fare hindlimb damarsal (B) Görünüm. Femoral arter (FA) yakın ucu, inguinal ligamanın (IL) altından çıkar. FA uzak ucu popliteal arter (PA) ve safen arter (SA) ayrılmasından yer almaktadır. FA kapalı ana teminat arterler lateral sirkumfleks femoral arter (LCFA), proksimal kaudal femoral arter (PCFA) ve yüzeysel kaudal epigastrik arter (SCEA) bulunmaktadır. femoral ven (FV) FA bitişik çalışır ve venöz şube büyük arter dalları paralel görülebilir. Yıldız (*)., AMEROID konstriktör- veya bitişik harfler yerleştirme için yakın ve uzak siteleri göstermek subakut veya akut iskemi kaynaklı olacak bağlı olarak , lütfen cliBu rakamın büyük halini görmek için buraya ck.
- forseps kullanarak, kesi açın ve kasık yağ dokusu (IFT) kapsayan membran maruz kalmaktadır.
- delmek IFT ve karın arasındaki ayrılık içine zarından, kapalı forseps kullanma. Yavaşça altında nörovasküler demet açığa karın kaslarının gelen IFT ayırmak için forseps üzerindeki baskıyı bırakın. Önemli anatomik (Şekil 1B) olarak proksimal ve yüzeysel kaudal şube gözlemleyin.
- Retractor takın ve proksimal AMEROID yılanı veya ligasyon sitesi, lateral sirkumfleks femoral arter (Şekil 1B) sadece proksimal maruz proksimal karın dokusu çekin. Lateral sirkumfleks arter proksimal ve yüzeysel kaudal arterlere yaklaşık 5 mm proksimal yatıyor.
- , Kesi distal parçası haline iki retraktörler, bir medial ve lateral birini eklemek distale uzak IFT çekmeyecerrahi alan cerrahi alanında genişletmek için.
- nörovasküler demet kaplayan en dıştaki zar kaldırmak için iki ince forseps kullanın. Yavaşça onları birbirine bağlayan zarının altında forseps ucu kayma, ven ve arter arasındaki ince forseps ucu yarısını yerleştirin. forseps kapatın ve hafifçe membran yırtın.
- ven ve arter arasında kapalı forseps ucunu yerleştirin ve forseps üzerindeki baskıyı bırakarak aralarında bir boşluk oluşturun. arter ve sinir arasında bir boşluk oluşturmak için bu tekniği tekrarlayın.
- Subakut ekstremite iskemi, proksimal femoral arter (Şekil 2) bir AMEROID yılanı yerleştirin.
- Proksimal AMEROID yılanı yüklemek için, nörovasküler demet onu izole etmek femoral arter altında bir forseps ucunu kaydırın. kavrama yılanının kenarına angled- forseps ikinci bir set kullanın ve femoral arter altında rehberlik.
- s içine femoral arter Layyılanının lot. Popliteal arter ve safen arter (Şekil 2) içine femoral arter çatallanma hemen proksimal konumlandırma, uzak yılanının için tekrarlayın.
AMEROID konstriktör- ve ligatürler Şekil 2. Yerleştirme. Subakut hindlimb iskemi ikna etmek için femoral arter üzerine yerleştirilen iki AMEROID konstriktör- (A) örneği. Proksimal yılanı lateral sirkumfleks femoral arter (LCFA) sadece yakın yerleştirilir. Distal constrictor popliteal (PA) ve safen arterler (SA) çatallanma sadece yakın yerleştirilir. Konstriktör- arter sağlamak için yukarı bakacak yuva düzgün yılanının içinde ayarlanır ile yüklenir. Akut hindlimb iskemi ikna etmek için femoral arter bitişik harfler (B) örneği. Ligatures (sarı oklar) onlar paneli (B) konstriktör- konumunu kanadını şekilde yerleştirilir ve femoral arter iki bitişik harfler (yıldız) her set arasında transeksiyon edilir. Bar, 1 mm. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
- Akut ekstremite iskemi, bağlanır ve proksimal femoral arter transect.
- femoral arter transect için, iplik 7 - yakın yılanının pozisyonuna sadece proksimal arter Ç dikiş ve düğüm (Adım 3.7). İlk 1 mm distalinde bir ikinci bitişik harfleri kravat.
- İki bitişik harfler arasındaki arter transect için yaylı makas kullanın. distal arteryel transeksiyonu için, popliteal arter ve safen arter içine femoral arter çatallanma ayrı, sadece yaklaşık 1 mm yaklaşık iki bitişik harfler yerleştirerek ancak yüzeysel Caud distal olmasını sağlamak, bu adımları yineleyinal epigastrik arter (Şekil 1)
- O Vicryl sütürler - kesi kapatın kullanarak 5 kesildi.
4. Perfüzyon Görüntüleme
- Lazer Doppler perfüzyon kamera (LDPI) altında ayarlanmış 37 ° C ısıtma pedi için fareyi hareket ettirin ve izofluran kaynağına bir roket ucu konisi yoluyla bağlayın. herhangi bir sıcaklık izleme mevcuttur, fare, 37 ° C 'ye kadar ısınmaya için, 5 dakika izin verir.
- kamera açın ve görüntü yakalama yazılımı başlatmak.
- 'Tarayıcı Ayarları' penceresini açmak için 'Yeni Tek Resim' simgesini tıklayın. '4 ms / piksel' ile 'Büyük' ve 'Tarama Hızı' ile 'Tarama Boyutu' olarak ayarlayın. 'Tarama Alanı (adet)' bölmesinde x ve y değerlerini değiştirerek tarama alanını ayarlayın.
- video beslemesini görüntülemek için 'Video ve Distance' sekmesini tıklayın ve kırmızı çizgileriyle de gösterildiği tarama alanına sığdırmak için fareyi düzenlemek. kalibre etmek 'Otomatik Mesafe tıklayınkonuya lazer mesafe. 'Konu Detayları' penceresini açmak için 'Next' tıklayın.
- konu bilgi ve ilgili yorumlarınızı girin. tarama penceresine geçmek için 'İleri' düğmesine tıklayın.
- 'Onayla veya Scan Distance geçersiz kıl' açmak iletişim için 'Başlat Ölçülmesine' düğmesine tıklayın. Tarama mesafe onaylamak için 'OK' tıklayın. Tarama alanının büyüklüğüne bağlı olarak 8 dakika - tarama işlemi başlayacak ve 4 aday gözlemleyin.
- Tarama işlemi tamamlandıktan sonra, 'Farklı Kaydet' penceresini gözlemleyin. Dosyayı adlandırın ve kaydedin.
- izofluran kapatın ve boş bir kurtarma kafesine fareyi ve hayvan sternum yatma koruyabilmiştir kadar izler. diğer farelerin bir kafesin içine anestezi kurtarma fare koymayın.
- Görüntü analiz yazılımı açın. 'Aç' simgesine tıklayın ve gidin ve analiz için görüntü dosyasını açın. Dosya penceresinde, akı gözlemlemek,fare fotoğraf ve renkli görüntüler.
- akı resmin üzerine ilgi alanları (ROI) bölgesini işaretlemek için, 'Show ROI' simgesini tıklayın. Sonraki 'Ekle Poligon' düğmesini tıklayın ve ROI çizmek için cerrahi olmayan uzuv imleci sürükleyin. şekli kapatmak için sağ tıklatın. Seç tekrar 'Poligon Ekle' ve cerrahi uzuv etrafında eşleşen ROI çizin.
- 'Görüntü ROI İstatistik Sonuçları (PU)' penceresi açmak için 'İstatistikler' simgesini tıklayın. 'Akı%' sütununda akı yüzde farkını dikkate alınmalıdır.
NOT: referans olarak görev yapacak çekilen ilk ROI.
NOT: Her bir sonraki perfüzyon sintigrafisi öncesinde fare uyutmak için Bölüm 1'de özetlenen adımları izleyin ve adım görüntüye 4.11 4.1 hayvan olarak.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Fare arka bacak damar sistemini uygun şekilde tanımlanması, burada açıklandığı gibi, subakut ve akut arka bacak iskemisi uyarılması için teknikler tekrarlanabilirliği sağlamak için çok önemlidir. Hayvan çalışmalarında kalıcı sapması, ilave olarak, diğer faktörler anestezi Çeşidi, hayvan pozisyonu (sırtüstü vs eğilimli) ve vücut sıcaklığına (bakınız Şekil 3) de dahil olmak üzere, lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI) değişkenliği neden olabilir. Buna ek olarak, sub-akut arka bacak iskemisi modeli, belirli bir parti içinde geniş ölçüde değişebilir AMEROID konstriktör- kalitesine bağlıdır (bakınız Şekil 4). Bu sorunların her LDPI ile ölçülen akış nicelendirilmesi üzerinde önemli etkilere sahip olabilir ve aşağıda daha ayrıntılı olarak ele alınmıştır.
subakut hindlimb iskemi modeli veya ligasyon içinde AMEROID konstriktör- yerleştirme ardındanHayvan hala (Şekil 5) ameliyatın etkilerini göstermek ve perfüzyon bir temel post-operatif seviyede kurmak için anestezi sırasında ve akut hindlimb iskemi modelinde femoral arter transeksiyonunun, LDPI görüntüleri hemen ameliyat sonrası alınmalıdır. perfüzyon kantitasyonu iskemik hindlimb etrafında faiz (ROI) bir bölge ve iskemik olmayan hindlimb etrafında benzer bir ROI çizerek yapılır. Perfüzyon en sık olmayan iskemik ekstremite edilene iskemik ekstremite perfüzyon oranı olarak ifade edilir ve bu oran değişiklikleri zaman ölçülür. Bu yazıda, hayvan hareketi ve sonraki bir zaman noktasında ayak konumlandırılması değişikliklere daha az değişkenlik eğilimli pozisyonunda bulunan bu görüntüleme fareler bulduk. Ayrıca, üst kalça perfüzyon farenin sırt üstü konumda olduğunda daha değişken olma eğilimindedir. arka bacak perfüzyon tam kaybı akut ekstremite indüksiyonundan sonra dikkate alınmalıdıriskemi, perfüzyon sadece hafif bir azalma genellikle subakut modelinde AMEROID konstriktörleriyle yerleştirilmesinden sonra gözlemlenmektedir (Şekil 5). Bazı durumlarda, biz hemen ameliyat sonrası perfüzyon elde edilen dramatik kaybı ile hızlı constrictor tıkanıklık gözlemledik.
35 ° C, 37 ° C'de% 1.5 izofluran ile anestezi ve sırt üstü ve yüzüstü pozisyonda hem taranan Arka ayağın Pozisyonu ve tek BALB / c fare Vücut Isısı. Lazer Doppler perfüzyon görüntüleri dayanarak Perfüzyon Görüntüleme Şekil 3. değişimi, ve 38 ° C. izofluran anestezi ile, hayvanın arka ayaklarında eğilimli görüntülere göre sırtüstü üzerinde daha sık gözlenir bir dışlayıcı (yatay çizgiler) sonuçlanan solunum hareket eğilimindedir. yüzükoyun pozisyonda, kesin açı yeniden oluşturmak için çok daha kolaydırayak, daha hassas zamanla perfüzyon ölçümü yapmak. Vücut ısısı 37 ° C'nin altına düştüğünde görüntüleri yüksek sıcaklıklarda doymuş ise perfüzyon ölçüde azalır. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Mevcut Ticarete Şekil 4. Değişkenlik AMEROID konstriktör- (A) üniforma yuva şekli ve kazein kalınlığı (B - D) ile ideal 0,25 mm iç çapı (çift başlı ok) yılanının bir örneği.. Yuvası şekil değişiminin Örnekleri. Yuvaları bazen 'd' şekli (B ve C) ya da 'b' şekli (D) görüntüleyebilir. Bu gibi durumlarda, kazein oldukça eşit olarak dağıtılır ve yuvaları ho yeterince derinld arter. (E) düzensiz kazein kalınlığının bir örnek. Bu yılanı atılır olacaktır. (F) daralma sırasında yerinde arteri tutmak için çok sığ bir yuvaya bir örnek. Bu yılanı da atılmalıdır. Olurdu bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 5. Perfüzyon Görüntüler hemen Subakut veya Akut Arka ayağın İskemi İndüksiyonunun ardından. Subakut hindlimb iskemi veya yerleşim ikna etmek için sol femoral arterden iki AMEROID konstriktör- yerleştirme geçirmiş BALB / c farelerde sırtüstü ve yüzüstü pozisyonda hem Temsilcisi perfüzyon görüntüleri iki bitişik harfler ve sol femoral arter kesisi akut hindlimb iskemi ikna etmek. Bu perfusio Notesasen akış femoral arterin çift ligasyon / transeksiyondan hemen sonra tespit edildiğinde ise n, azaltılmış ancak AMEROID constrictor yerleştirildikten sonra hala saptanabilir edilir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Belki de bu prosedürde en zorlu aşama femoral venden femoral arter ayrılmasıdır. büyük çaplı ve arterin kıyasla femoral ven daha ince duvarları delmek karşı duyarlılığının artırılması ve cerrahi manipülasyon sırasında yırtılma. ven kesintiye olasılığı PBS ile nemlendirilmiş steril bez kullanarak nemli yara tutarak azaltılabilir. Tüm forseps, keskinleştirilmiş hizalanır ve damar ve çevre dokular hassas işleme izin vermek için aralarında serbest olmasını sağlamak için de önemlidir. Kanama durana kadar meydana kanama durumunda, steril gazlı bez ile bölgeye basınç uygulayın. uzun vadede bir istemeden daha şiddetli iskemik yaralanma temsil edebilir 'minör' kanama olaylar olarak algılanan ne olabilir detaylı cerrahi notları, her bir hayvan için muhafaza edilmelidir. veri tutarlılığı için, ameliyatlar hiçbir venöz veya teminat arteriyel kanama içerening olaylar önem taşımaktadır.
Bu tekniğin bir sınırlama şiddeti ve / veya (subakut AMEROID konstriktör modelinde) iskeminin başlamasından çeşitli faktörlere bağlı olarak geniş ölçüde değişebilir olmasıdır. Proksimal yılanı / ligasyonu sitesi birçok teminat arterler iskemi indüksiyonla nasıl etkilendiğini belirler. Olarak not rağmen yaralanma şiddeti belirli genetik geçmişleri bile hafif hayvanlarda, yani belirli bağlamlarda, bozulmamış teminat dalları azaltır bırakarak, subakut iskemi önemli doku nekrozuna 23 neden olabilir. Bundan başka, bir ikinci uzak constrictor ya ligatür eklenmesi akut ve sub-akut modelinde 23 hem de perfüzyon azaltacaktır. Bazı araştırmacılar bağlandı ya da lateral sirkumfleks arterin proksimal kaudal femoral arter ve yüzeyel kaudal epigastrik arter 24 kapalı teminat dalları aşındırılması için bir elektrokoter kullandık. Bu, daha şiddetli iskemi sonuçlanırBu da genetik kökenli bağlı olmasına rağmen nd, daha fazla kas yaralanması neden olabilir. Elektrokoter çevre dokulara zarar verir olasılığı daha yüksektir olabilir ve bu nedenle dikkatli kullanılması gerektiğini dikkat etmek önemlidir.
Bu değişkenlerin ışığında, vasküler anatomi doğru oklüzyon siteyi seçmeden önce tanımlanan kritik önem taşımaktadır. Kochi ve ark., 25 isim ve fare hindlimb kan damarlarının yerleri ile ilgili çok sayıda raporlar arasında bir uzlaşma belirgin eksikliği kaydetti, ve biz herkes bu üstlenilmesi için önemli bir rehber olduğuna inanıyoruz arteriyel anatominin çok ayrıntılı bir açıklama sağladı prosedür. Bu dergide önceki bir yayın vasküler anatomik yerlerine iyi tanımlanmış değil ancak bu raporda, akut ekstremite iskemisi 13 uyarılması için teknik yeteneklerini. Bu raporun önemli bir hedefi geliştirilmiş bir görsel sunum o sağlamak oldusubakut ekstremite iskemi kullanarak teknik bir değişiklik gösteren ek olarak bu noktalara f.
Bu yaklaşımın bir başka sınırlaması subakut iskemi modelinde, iskeminin başlamasından birini kullanır AMEROID konstriktör- kalitesinin bir fonksiyonudur olmasıdır. Ticari amaçlı konstriktör- derin ve iç yuvası şekline (Şekil 4) 'de değişebilir bulduk. yuva çok sığ ise, damar kasılması esnasında ekstrüde edilebilir. kırık kazein ya da bozuk yuvaları konstriktör- atılmalıdır. Buna ek olarak, yılanının olan kazein tutarsız dağılımı oklüzyonu hızlandırılmış oranlarının neden olabilir. Farelerin büyüklüğü ve yaş 8 yaş ve yaş 30 hafta arasında önemli farklılık gösterebilir 'yetişkin' farelerde damar boyutları olarak, dikkate başka önemli faktördür. veri setleri oluşturmak için, farelerin çok bağımsız kohortları kullanılırken bu görünüşte Smal olarak özellikle önemlidirl yaş aralıkları (örneğin, 10 - 16 hafta) tıkanıklığı ve iskemik ekstremite yaralanmanın şiddeti tutarsız oranlarının neden olabilir.
Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme miktarının da yaygın olarak hayvanın vücut sıcaklığı ve konumuna (Şekil 4) bağlı olarak değişiklik gösterir, hem de anestezik madde kullanılır. Fare perfüzyon görüntüleme sırasında 37 ° C vücut ısısını korumak çok önemlidir. Sıcaklık daha büyük 37 ° C ise perfüzyon görüntüsü, doymuş olacaktır. Sıcaklık 36 ° C'nin altında ise perfüzyon sinyal çok zayıf olabilir. Ayrıca, (non-iskemik ekstremite karşılaştırıldığında iskemik ekstremite perfüzyonu) doğru bir perfüzyon oranını elde etmek için mümkün olduğu kadar simetrik iki bacağını tutmak önemlidir. sırtüstü yatarken fareler sıklıkla görüntülü rağmen, simetri bu pozisyonda korumak için daha zor olabilir. Ayrıca, görüntüleme alanının birçok kısım halinde kan akışında değişimi, yani, PRoximal but, kantitatif değişkenliğe sebep olabilir. Buna ek olarak, izofluran ile anestezi genellikle da LDPI ile elde edilen sinyal bacak hareketi ve sorunlara yol açmaktadır artan göğüs hareketi ile sonuçlanır. Biz yüzüstü pozisyonda hayvanları yerleştirerek ekstremite perfüzyon (Şekil 5) daha tekrarlanabilir ölçümü ile sonuçlanır kolay konumlandırma ve büyük ölçüde azaltılmış hareket için izin bacaklarda daha fazla destek verdiğini bulduk. Bundan başka, eğimli pozisyonu da kantitatif tekrarlanmasını arttırır taranmış uzuvların, 37 ° C sıcaklık, (Şekil 5) daha tutarlı bakımını kolaylaştırır. izofluran ile karşılaştırıldığında, ketamin ekran ile anestezi fareler sırtüstü görüntüleme az değişken hale göğüs hareketi azalmıştır. Ancak, ketamin da 16 değerleri önemli ölçüde artmıştır mutlak perfüzyon sonuçlanan, anestezi indüksiyon ve iyileşme süresini artıracaktır. vücut pozisyonu ve ANEST Her kombinasyonuinfographie ajan böylece sonraki tüm perfüzyon ölçümleri karşısında bu yöntemlerin her biri için tutarlı bir tekniği kullanmak önemlidir, ayrı bir perfüzyon görüntü değerini oluşturabilirsiniz.
Tekniğin diğer bazı sınırlamaları tanımak önemlidir. Model sıklıkla damar hastalıklarına yatkınlık, obezite, hiperlipidemi, ateroskleroz, diyabet, ve diğer faktörler gibi herhangi bir komorbiditelerde olmadan farelerde yapıldığından, ekstremite iskemi indüksiyon mükemmel klinik PAD patoloji çoğaltmak asla. Belirtildiği gibi, akut ekstremite iskemi etkileri, yaşlı diyabetik ve hiperkolesterolemik farelerde değerlendirilmiştir ve gelecekte subakut uzuv iskemi tepkiler üzerine bu eşlik eden durumların etkilerini belirlemek için yararlı olacaktır. PAD kronik bir hastalık, hatta subakut ekstremite iskemi çünkü Ayrıca, klinik senaryo kusurlu bir modeldir. Nedenle, modeller geliştirmeye devam etmek önemli olacakGerçek kronik ekstremite iskemi neden ve kardiyovasküler risk faktörleri modelleri ile birlikte bunları test etmek. kullanılan bakılmaksızın hayvan modelinin lazer Doppler görüntüleme yöntemi bir teknik sınırlama nedenle belirli bir hayvan içinde kan akımı nispi değişiklikleri karşılaştırmak için sadece kullanılabilir, kan akım hızı ve mutlak doku perfüzyonunu ölçer olmasıdır. Özellikle, uzuv kaybına neden olur iskemi bağımsız kan akışı 23 değişikliklerin azaltılmış perfüzyon oranı ile sonuçlanacaktır.
Özetle, biz iskelet kası ve damar yeniden üzerindeki etkilerini analiz etmek amacıyla farelerde akut ve subakut arka bacak iskemi uyarmak için ayrıntılı yöntemler sağlar. Özel dikkat doğru intra ve model arası operatör tekrarlanabilirliği kolaylaştırmak için kritik vasküler yerlerinden kimlik verilir. Tekniğin daha rafine sonunda kronik iskemi modeli gelişmesine neden olabilir doğru olduğunuly klinik PAD patogenezi çoğaltır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | Dumoxel |
| Dumont Style 5 Mini Forceps | Fine Science Tools | 11200-14 | Inox |
| Extra Fine Bonn Scissors | Fine Science Tools | 14084-08 | |
| 7 - 0 Silk Suture | Sharpoint | DA-2527N | |
| 5 - 0 Coated Vicryl Suture | Ethicon | J463G | |
| Graefe Forceps | Fine Science Tools | 11053-10 | |
| Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| Artifical Tears Ointment | Rugby Laboratories | 0536-6550-91 | |
| Surgical Tape | 3M | 1530-0 | |
| Fine Cotton Swabs | Contec | SC-4 | |
| Temperature Controller | Physitemp | TCAT-2DF | |
| Ameroid Constrictors | Research Instruments SW | MMC-0.25 x 1.00-SS | |
| Hot Bead Sterilizer | |||
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | 10010-023 | |
| Moor LDPI | Moor Instruments | moorLDI2 | |
| moorLDI Measurement software | Moor Instruments | v. 6.0 | |
| Hair Removal Cream | Nair |
References
- Criqui, M. H., Aboyans, V. Epidemiology of peripheral artery disease. Circ. Res. 116, 1509-1526 (2015).
- Thukkani, A. K., Kinlay, S. Endovascular intervention for peripheral artery disease. Circ. Res. 116, 1599-1613 (2015).
- Vartanian, S. M., Conte, M. S. Surgical intervention for peripheral arterial disease. Circ. Res. 116, 1614-1628 (2015).
- Bonaca, M. P., Creager, M. A. Pharmacological treatment and current management of peripheral artery disease. Circ. Res. 116, 1579-1598 (2015).
- Conte, M. S., et al. Design and rationale of the PREVENT III clinical trial: edifoligide for the prevention of infrainguinal vein graft failure. Vasc Endovascular Surg. 39, 15-23 (2005).
- Pomposelli, F. B., et al. A decade of experience with dorsalis pedis artery bypass: analysis of outcome in more than 1000 cases. J. Vasc. Surg. 37, 307-315 (2003).
- Willigendael, E. M., et al. Smoking and the patency of lower extremity bypass grafts: a meta-analysis. J. Vasc. Surg. 42, 67-74 (2005).
- Schillinger, M., et al. Balloon angioplasty versus implantation of nitinol stents in the superficial femoral artery. N. Engl. J. Med. 354, 1879-1888 (2006).
- Marmagkiolis, K., et al. 12-month primary patency rates of contemporary endovascular device therapy for femoro-popliteal occlusive disease in 6,024 patients: beyond balloon angioplasty. Catheter. Cardiovasc. Interv. 84, 555-564 (2014).
- Rosenfield, K., et al. Trial of a Paclitaxel-Coated Balloon for Femoropopliteal Artery Disease. N. Engl. J. Med. 373, 145-153 (2015).
- Tepe, G., et al. Drug-coated balloon versus standard percutaneous transluminal angioplasty for the treatment of superficial femoral and popliteal peripheral artery disease: 12-month results from the IN.PACT SFA randomized trial. Circulation. 131, 495-502 (2015).
- Couffinhal, T., et al. Mouse model of angiogenesis. Am. J. Pathol. 152, 1667-1679 (1998).
- Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. J Vis Exp. , (2009).
- McClung, J. M., et al. Skeletal muscle-specific genetic determinants contribute to the differential strain-dependent effects of hindlimb ischemia in mice. Am. J. Pathol. 180, 2156-2169 (2012).
- Dokun, A. O., et al. A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia. Circulation. 117, 1207-1215 (2008).
- Rivard, A., et al. Age-dependent impairment of angiogenesis. Circulation. 99, 111-120 (1999).
- Hazarika, S., et al. Impaired angiogenesis after hindlimb ischemia in type 2 diabetes mellitus: differential regulation of vascular endothelial growth factor receptor 1 and soluble vascular endothelial growth factor receptor 1. Circ. Res. 101, 948-956 (2007).
- Couffinhal, T., et al. Impaired collateral vessel development associated with reduced expression of vascular endothelial growth factor in ApoE-/- mice. Circulation. 99, 3188-3198 (1999).
- Tang, G. L., Chang, D. S., Sarkar, R., Wang, R., Messina, L. M. The effect of gradual or acute arterial occlusion on skeletal muscle blood flow, arteriogenesis, and inflammation in rat hindlimb ischemia. J. Vasc. Surg. 41, 312-320 (2005).
- Yang, Y., et al. Cellular and molecular mechanism regulating blood flow recovery in acute versus gradual femoral artery occlusion are distinct in the mouse. J. Vasc. Surg. 48, 1546-1558 (2008).
- Litvak, J., Siderides, L. E., Vineberg, A. M. The experimental production of coronary artery insufficiency and occlusion. Am. Heart J. 53, 505-518 (1957).
- Bredee, J. J. An improved ameroid constrictor. Preliminary communication. J. Surg. Res. 9, 107-112 (1969).
- McClung, J. M., et al. Subacute limb ischemia induces skeletal muscle injury in genetically susceptible mice independent of vascular density. J. Vasc. Surg. , (2015).
- Hellingman, A. A., et al. Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation. Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 40, 796-803 (2010).
- Kochi, T., et al. Characterization of the arterial anatomy of the murine hindlimb: functional role in the design and understanding of ischemia models. PloS one. 8, e84047 (2013).
