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Methodenartikel

Das Terroir-Konzept Interpretiert durch Grape Berry Metabolomics und Transcriptomics

10K Aufrufe

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DOI:

10.3791/54410

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5. Oktober 2016

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* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieser Artikel beschreibt die Anwendung von ungezielte Metabolomik, Transcriptomics und multivariate statistische Analysen Traubenbeere Transkripte und Metaboliten , um einen Einblick in das Terroir - Konzept zu gewinnen, das heißt, die Auswirkungen der Umwelt auf die Beere Qualitätsmerkmale.

Zusammenfassung

Terroir bezieht sich auf die Kombination von Umweltfaktoren , die die Eigenschaften von Kulturen wie Weinreben (Vitis vinifera) nach bestimmten Habitaten und Managementpraktiken beeinflussen. Dieser Artikel zeigt, wie bestimmte Terroir Signaturen können in der Beere Metabolom und Transkriptom der Weinrebe Sorte Corvina mit multivariaten statistischen Analyse nachgewiesen werden. Das Verfahren erfordert zunächst eine geeignete Stichprobenplan. In dieser Fallstudie wurde ein spezifischer Klon der Corvina Sorte ausgewählten genetischen Unterschiede zu minimieren und Proben von sieben Weinbergen gesammelt wurden, die drei verschiedene Makro Zonen während der drei verschiedenen Wachstumsphasen. Eine ungezielte LC-MS Metabolomics Ansatz wird durch eine effiziente Datenverarbeitung mit MZmine Software und eine Identifizierung von Metaboliten Strategie auf Fragmentierung Baumanalyse basiert aufgrund seiner hohen Empfindlichkeit, begleitet empfohlen. Umfassende Transkriptom-Analyse kann unter Verwendung von Microarrays erreicht werdenenthaltenden Sonden abdeckt ~ 99% aller Weinrebe Gene vorhergesagt wird, die gleichzeitige Analyse aller differentiell exprimierte Gene im Zusammenhang mit verschiedenen terroirs ermöglicht. Schließlich kann der multivariaten Datenanalyse auf Projektionsverfahren auf Basis verwendet werden, um den starken Jahrgang spezifischen Effekt zu überwinden, so dass die Metabolomik und Transkriptom-Daten zu integrieren und im Detail analysiert werden, um informative Korrelationen zu identifizieren.

Einleitung

Groß angelegte Datenanalyse auf der Basis der Genome, Transkriptom, Proteom und Metabolomen von Pflanzen bietet noch nie da gewesenen Einblick in das Verhalten von komplexen Systemen, wie zum Beispiel die Terroir Eigenschaften von Wein, die die Wechselwirkungen zwischen Weinrebe Pflanzen und ihrer Umwelt zu reflektieren. Da das Terroir eines Weines verschieden sein kann, selbst wenn identische Weinrebe Klone in verschiedenen Weinbergen angebaut werden, ist Genomik Analyse von geringem Nutzen, da die klonalen Genome identisch sind. Stattdessen ist es notwendig, auf Korrelationen zwischen Genexpression und den metabolischen Eigenschaften der Beeren zu suchen, die die Q....

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Protokoll

1. Wählen Sie geeignete Materialien und Konstruieren Sie einen Stichprobenplan

  1. Beginnen Sie mit dem Experiment durch eine geeignete Stichprobenplan zu entwickeln. Es gibt keine allgemeinen und universellen Ansatz so jeden Plan auf einer Basis von Fall zu Fall zu bewerten. Stellen Sie sicher, dass die Stichprobenplan nennt die Probenahme Orte, Zeiten und die genaue Stichprobenverfahren. Siehe Abbildung 1 für den Stichprobenplan in dieser Fallstudie verwendet.
    HINWEIS: In dieser Fallstudie, Traubenbeeren von einem einzigen Klon (. Vitis vinifera cv Corvina, Klon 48) wurden in drei verschiedenen Makrozonen in der Provinz Veron....

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Ergebnisse

Die Fallstudie in diesem Artikel beschrieben ergab eine endgültige Datenmatrix, die 552 Signale (m / z Merkmale) einschließlich Molekülionen sowie deren Isotope, Addukte und einige Fragmente, relativ unter 189 Proben quantifiziert (7 Weinberge x 3 Reifestufen x 3 Vegetationsperioden x 3 biologischen Replikaten). Die Gesamtzahl für Datenpunkte war daher 104.328. Fragmentation Baumanalyse führte zur Annotation von 282 m / z Merkmale, entsprechend Metaboliten sowie Addukte.......

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Diskussion

Dieser Artikel beschreibt die Metabolomik, verwendet Transcriptomics und statistische Analyseprotokolle die Traubenbeere Terroir-Konzept zu interpretieren. Metabolomics Analyse durch HPLC-ESI-MS ist empfindlich genug, um eine große Anzahl von Metaboliten gleichzeitig zu erfassen, aber relativ Quantifizierung wird durch den Matrixeffekt und Ionenunterdrückungs / Erweiterung betroffen. Allerdings hat sich ein ähnlicher Ansatz bereits verwendet worden , um die Reifung und nach der Ernte Welken von Corvina Beeren, und die K.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Diese Arbeit profitierte von den Netzwerkaktivitäten, die im Rahmen der EU-finanzierten COST-AKTION FA1106 "Ein integrierter Systemansatz zur Bestimmung der Entwicklungsmechanismen, die die Qualität fleischiger Früchte bei Tomaten und Weinreben steuern" koordiniert wurden. Diese Arbeit wurde unterstützt durch das Projekt "Completamento del Centro di Genomica Funzionale Vegetale", das von der Stiftung CARIVERONA Bank finanziert wurde, und durch das Projekt "Valorizzazione dei Principali Vitigni Autoctoni Italiani e dei loro Terroir (Vigneto)", das vom italienischen Ministerium für Land- und Forstwirtschaft finanziert wurde. SDS wurde vom italienischen Ministerium für U....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
MühlenschleiferIKAIKA A11 basic
HPLC AutosamplerBeckman Coulter -System Gold 508 Autosampler
HPLC SystemBeckman Coschar -System Gold 127 Solvent Module HPLC
C18 VorsäuleGrace -Alltima HP C18 (7,5 mm x 2,1 mm; 5 &m; m) Vorsäule
C18 SäuleGrace -Alltima HP C18 (150 mm x 2,1 mm; 3 &m; m)
SäulenmassenspektrometerBruker Daltonics -Bruker Esquire 6000; Das Massenspektrometer war mit einer ESI-Quelle ausgestattet und der Analysator war eine Ionenfalle.
Extraktionslösungsmittel und HPLC-PufferSigma34966Methanol LC-MS
Typ Sigma94318Ameisensäure LC-MS Typ
Sigma34967Acetonitril LC-MS Typ
Sigma39253Wasser  Minisart RC 4 Spritzenvorsatzfilter in LC-MS-Qualität
(0,2 μ m)Sartorius17764
Software für die Datenerfassung (a) und -verarbeitung (b)Bruker Daltonics-BrukerDaltonics Esquire 5.2 Kontrolle (a); Esquire 3.2 Datenanalyse und MzMine 2.2 Softwares (b)
Spectrum Plant Total RNA KitSigma-AldrichSTRN250-1KTFür Gesamt-RNA-Extraktion aus Traubenperikarp
Nanodrop 1000Thermo Scientific1000
BioAnalyzer 2100Agilent TechnologiesG2939A
RNA 6000 Nano-ReagenzienAgilent Technologies5067-1511
RNA-ChipsAgilent Technologies5067-1511
Agilent Genexpressions-Waschpuffer 1Agilent Technologies5188-5325
Agilent Genexpressions-Waschpuffer 2Agilent Technologies5188-5326
LowInput QuickAmp Beschriftungskit EinfarbigAgilent Technologies5190-2305
Kit RNA Spike In - EinfarbigAgilent Technologies5188-5282
Genexpressions-HybridisierungskitAgilent Technologies5188-5242
RNeasy Mini Kit (50)Qiagen74104Für die cRNA-Aufreinigung
Agilent SurePrint HD 4X44K 60-mer MicroarrayAgilent TechnologiesG2514F-048771 
eArrayAgilent Technologies-https://earray.chem.agilent.com/earray/
DichtungsschieberAgilent TechnologiesG2534-60012Enable Agilent SurePrint Microarray 4-Array Hybridisierung
Thermostatisches BadJulabo-Hybridisierung
KammerAgilent TechnologiesG2534-60001
Microarray HybridisierungsofenAgilent TechnologiesG2545A
Hybridisierungsofen RotatorRack Agilent TechnologiesG2530-60029
Rotator Rack Conversion RodAgilent TechnologiesG2530-60030
FärbekitBio-Optica10-2000Objektträger-Färbeschale und Objektträgerrost
MagnetrührgerätAREX Heizung MagnetrührerF20540163 
ScientificHeraeus - 6030
Agilent Microarray ScannerAgilent TechnologiesG2565CA
Scanner Karussell, 48 PositionenAgilent TechnologiesG2505-60502
ObjektträgerhalterAgilent TechnologiesG2505-60525
Feature Extraktionssoftware v11.5Agilent Technologienim Agilent Microarray Scanner G2565CA
SIMCA + V13 SoftwareUmetrics
Thermo

Referenzen

  1. Jessome, L. L., Volmer, D. A. Ion suppression: A major concern in mass spectrometry. Lc Gc N Am. 24 (5), 498-510 (2006).
  2. Kim, H. K., Choi, Y. H., Verpoorte, R. NMR-based plant metabolomics: where do we stand, where do we go? Trends Biotech. 29 (6), 267-275 (2011....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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