Summary
Kirurgisk okklusion af en distal midtcerebralarterie gren (MCAo) er et hyppigt anvendt model i eksperimentel slagtilfælde forskning. Dette håndskrift beskriver den grundlæggende teknik for permanent MCAO kombineret med indsættelse af en lateral kraniel vindue, der giver mulighed for langsgående intravital mikroskopi i mus.
Abstract
Fokal cerebral iskæmi (dvs. iskæmisk slagtilfælde) kan medføre stor hjerneskade, hvilket fører til et tab af neuronal funktion og følgelig med en masse motoriske og kognitive handicap. Dens høje forekomst udgør en alvorlig sundheds- byrde, som slagtilfælde er blandt de vigtigste årsager til langvarig invaliditet og død på verdensplan en. Inddrivelse af neuronal funktion er, i de fleste tilfælde, kun delvis. Indtil videre er behandlingsmuligheder meget begrænsede, især på grund af den snævre tidsvindue for trombolyse 2,3. Bestemmelse metoder til at fremskynde helbredelse fra slagtilfælde fortsat en førsteklasses medicinsk mål; Dette har dog været hæmmet af utilstrækkelige mekanistiske indsigt i helbredelsesprocessen. Eksperimentelle slagtilfælde forskere ofte anvender gnaver modeller af fokal cerebral iskæmi. Ud over den akutte fase, er slagtilfælde forskning i stigende grad fokuseret på sub-akut og kronisk fase efter cerebral iskæmi. De fleste takts forskere anvender permanent eller tranSIENT okklusion af MCA hos mus eller rotter. Hos patienter, tilstopninger af MCA er blandt de hyppigste årsager til iskæmisk slagtilfælde 4. Udover proximal okklusion af MCA hjælp glødetråden model, kirurgisk okklusion af den distale MCA er sandsynligvis den mest brugte model i eksperimentel slagtilfælde forskning 5. Okklusion af en distal (til forgreningen af lenticulo-striate arterier) MCA gren reservedele typisk striatum og primært påvirker neocortex. Vessel okklusion kan være permanent eller forbigående. Høj reproducerbarhed læsionsvolumen og meget lavere dødelighed i forhold til den langsigtede resultat er de vigtigste fordele ved denne model. Her viser vi, hvordan man udfører en kronisk kraniel vindue (CW) forberedelse lateralt til sinus sagittalis, og bagefter hvordan man kirurgisk inducere en distal slagtilfælde under vinduet ved anvendelse af en kraniotomi tilgang. Denne fremgangsmåde kan anvendes til sekventiel billeddannelse af akutte og kroniske forandringer efter iskæmi viaepi-belysning, konfokal laserscanning, og to-foton intravital mikroskopi.
Protocol
ETIK ERKLÆRING: Eksperimenter med forsøgsdyr blev udført i overensstemmelse med de retningslinjer og bestemmelser fastsat af Landesamt fuer Gesundheit und Soziales, Berlin, Tyskland (G0298 / 13) og de ANKOMMER kriterier, som er relevant. Til denne undersøgelse 10- til 12-uger gamle C57BL / 6J mus blev anvendt.
1. Lateral Kronisk Kranie Window Forberedelse
- Udfør anæstesi med en subkutan injektion af ketamin (90 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg). Test for passende sedation med en smertestimulus.
- Sterilisere kirurgiske instrumenter og kirurgiske område med 70% ethanol.
- Fjern hovedbunden hår fra nakken til øjnene ved hjælp af en gnaver shaver.
- Fastgør hovedet i en stereotaktisk ramme.
- Brug dexpanthenol øjensalve på begge øjne for at undgå dehydrering.
- Rens kirurgiske område at fjerne alle hår og sterilisere den med 3 lag 74,1% ethanol og 10% 2-propanolol.
- Udfør en midterlinjenindsnit fra halsen til øjnene ved hjælp af en skalpel.
- Omspænder hudlap med 4 tenting suturer.
- Fjern periosteum forsigtigt på den venstre hemisfære ved skrabning det af med en skalpel til det punkt, hvor Tindingmusklen begynder.
BEMÆRK: Dette præparat tjener også til at skabe en god vedhæftning område for dental lim, som fastsætter dækglasset. - Udfør en fronto-parietal kraniotomi med en diameter på 4 mm ved udtynding kraniet på randen af knoglelappen anvendelse af en mikroborehuller. Påfør saltvandsopløsning under boring for at undgå varme skade.
- Løft knoglen klap med kanyler og fjern den ved hjælp microforceps.
- Skyl grundigt og udførligt med saltvandsopløsning.
- Bland dental lim, indtil det har den rette konsistens og er ikke fluid (dvs. limen bør ikke frembringe tråde længere). Placer den på knoglen omkring kraniotomi.
- Placer en dækglas med en diameter 6 mm på den forberedte lim og ordne det med the resten af dental lim. Vær sikker på, at det er vandtæt. Vent, indtil limen er tørret og hårdt ved at teste den med en pincet.
BEMÆRK: En ekstra vanding accelererer hærdeprocessen. - Fjern tenting suturer og lukke såret med hud suturer.
- Træk huden på flanken af musen. Sæt en nål subkutant og forsigtigt erstatte 0,5 ml sterilt saltvand subkutant for væskebalancen.
- Efter operationen holde dyrene i den opvarmede opsving bur i 90 min. Vent, indtil dyrene er helt vågen, inden de forlader dem uden opsyn. Vent indtil dyrene helt inddrives før returnere dem til et bur med andre dyr.
- Gentag den subkutane saltvand volumen udskiftning i ca. 12 timer, som beskrevet i trin 1.16.
- Altid anvende analgesi via sondeernæring eller direkte i mundhulen efter kirurgi (fx paracetamol (10 mg / ml) eller andre ikke-steroide antiinflammatoriske lægemidler).
- Tjek tilstand af dyrene hver dag efter operationen, og altid giver mosede dyrefoder på gulvet i en petriskål til at gøre spise enkel og for at undgå kritiske vægttab efter operationen.
BEMÆRK: Intravital mikroskopi kan udføres på den første dag efter kraniel vindue forberedelse. - Påfør isofluran anæstesi og ordne dyret i en holder hoved. Åbn huden sutur og rengør vindue med vatpinde og sterilt saltvand. Efter 24 timer bør kraniel vindue blive fyldt med cerebrospinalvæske til den tid punkt, som muliggør billeddannelse. Udfør billeddannelse ved hjælp af etablerede mikroskopi protokoller 18.
2. Distal MCAo
BEMÆRK: MCAo procedure bør udføres omkring 5 d efter CW forberedelse. Dette minimerer interferens fra den immunreaktion forårsaget af CW præparat med slagtilfælde-induceret immunreaktion.
"Src =" / files / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg "/>
Figur 1. Oversigt over Distal MCAo. A. Dette er et godt overblik over de fartøjer før op. B. fartøjer efter første bipolær kontakt. C. fartøjer efter anden bipolær kontakt. D. overblik over fartøjer, som er fuldstændig lukket nu. E. Afsluttende oversigt med lavere forstørrelse. Klik her for at se en større version af dette tal.
- Bedøve musene ved hjælp af en anæstesi maske og en passende bedøvelse regime, i samråd med dyrlæger (fx induktion med 1,5 - med 2% isofluran og vedligeholdelse med 1,0-1,5% isofluran i 2/3 N 2 O og 1/3 O 2 via en fordamper).
- Barber og fjerne hår og desinficere huden og omgivende pels med et passende middel (fx 70% ethylalkohol), og tør det bagefter.
- Opretholde kroppens temperatur af musene ved 36,5 ° C ± 0,5 ° C under kirurgi. En feedback-kontrolleret varmepude, opvarmet ifølge den rektale temperatur af musen, anbefales.
- Sende dyret i den laterale position. Fastgør næsen i anæstesi masken og justere isofluran koncentration til 1,0 - 1,5%.
- Påfør våde salve (dexpanthenol) til begge øjne.
- Brug huden indsnit for CW præparatet.
- Forsigtigt adskille huden og identificere Tindingmusklen nedenunder.
- Juster energien af den højfrekvente generator (5 - 7 W) og bruge bipolar tilstand.
- Brug elektrokoagulation pincet og fjern forsigtigt Tindingmusklen fra kraniet, hvilket skaber en muskel klap, uden helt at fjerne musklen.
- Identificer MCA under den gennemsigtige kraniet i rostralt del af den tidsmæssige område, dorsal til retro-Orbital sinus. Hvis der ikke kan identificeres MCA tvedeling, forsøge at identificere skibet mest rostral.
- Tynd kraniet over MCA gren med en mikroborehuller mens kontinuerligt vanding at undgå varmeskader.
- Løft knoglen med kanyler og fjern den med microforceps.
- Formindsk energien af den højfrekvente generator til 3 - 5 W
- Approach arterien ovenfra og forsigtigt røre den med de bipolære pincet på begge sider uden at løfte beholderen.
- Koagulere arterien proksimalt og distalt til beholderen bifurkation.
- Vent i 30 sek, og tryk derefter på arterien forsigtigt for at sikre, at blodgennemstrømningen permanent afbrydes. Gentag elektrokoagulation hvis der observeres en rekanalisering.
- Fastgør Tindingmusklen med 1 eller 2 masker på muskel indsættelse at dække knogledefekten, hvis muligt.
- Sutur såret og sende dyret ind i den opvarmede recovery boksen. Generelt dyr opsving hurtigt efter flygtige Anesthesia.
- For volumen substitution, anvende 0,5 ml sterilt saltvand subkutant, som beskrevet i trin 1.16.
- Efter operationen, at dyrene kan forblive i den opvarmede opsving bur i 90 min. Vent, indtil dyrene er bevidste, inden de forlader dem uden opsyn. Kun returnere dem til et bur med andre dyr, når de er fuldt tilbagebetalt.
- Gentag volumen substitution, som forklaret i trin 1.16, efter 12 timer.
- Påfør postoperativ analgesi via drikkevandet (fx paracetamol (10 mg / ml) eller andre ikke-steroide antiinflammatoriske lægemidler).
- Kontroller medicinske tilstand af dyrene hver dag efter operationen. Tilvejebringe mosede dyrefoder i en Petri-skål på gulvet for at forenkle spise og at minimere postoperative vægttab.
3. Sham Behandling
- Udfør alle procedurer identisk med trin 1 og 2, der er beskrevet ovenfor, herunder CW præparat-undtagen ikke koagulerer den udsatte midterste cerebrale arteriet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Tidslinjen og repræsentative resultater er vist i figur 2 og 3. Den kraniel vindue forberedelse, med en lille kranie vindue lateral til den overlegne sagittal sinus (Figur 2 B, C, D) resulterer i en meget lav dødelighed og sygelighed sats, når udføres af en erfaren kirurg. Alle de 10 dyr overlevede, og alle kroniske CW kunne anvendes til høj kvalitet billeddannelse, selv 28 dage efter operationen. Der var ikke noget problem med sårinfektioner eller andre komplikationer.
På grund af den korte eksponering for flygtige anæstesi og kun mindre hjerneskade, ca 10 - 15 min efter distal MCAo og overførsel til den opvarmede opsving bur, alle dyr var vågen, frit at bevæge sig i aflåst buret, og interagere med søskende. Generelt dødelighed af den distale MCAo model er mindre end 5% og hovedsagelig forekommer som et resultat af vaskulær injury og efterfølgende blødning under MCAo kirurgi. Dødeligheden i løbet af 28-dages observationsperiode efter distal MCAo sker kun meget sjældent. Morfologisk kan læsionen vurderes ved anvendelse histologi eller MR (Figur 3 A, B). Desuden MRI målinger giver mulighed for at vurdere læsionsvolumen og progression i en langsgående måde. En MRI udført 24 timer efter iskæmi klart afbilder den iskæmiske læsion placeret under den kroniske CW, mens efter simuleret kirurgi, blev der ikke læderede cortexvæv fundet (figur 3A). MRI resultater viser klart den strenge begrænsning af læsionen til cortex, derved bevare striatum, i modsætning til den filamentøse MCAo model (figur 3B). Den laterale kronisk CW præparat muliggør langsigtet visualisering af cortical vaskulatur og mikrocirkulation ved epi-fluorescensmikroskopi (Figur 3C, øvre del) og af subkortikale områder ved to-foton mikroskopi (Figure 3C, nedre del). Endvidere er det muligt at afbilde molekylære veje og celle-til-celle-interaktioner med fluorescensmærkede celler eller autofluorescens målinger, såsom fluorescenslevetid billeddannelse. Som vist i figur 3D, den distale MCAo model forårsager stærkt reproducerbare iskæmiske læsioner. Med hensyn til infarkt volumen, forventer vi en standardafvigelse under 15% i et enkelt sæt operationer. Som nævnt ovenfor, i modsætning til modeller af proksimale MCAo, dødelighed er temmelig lav for den distale model 5. Ved hjælp af sekventiel MRI, læsion, volumen, og ødem progression efter fokal cerebral iskæmi kan vurderes. MRI ved 24 timer og 96 timer efter permanent distal MCAo viste ingen signifikant progression af T2 hyperintensities.
Figur 2: Kronisk Kranie Window Forberedelse. (A) Repræsentant tidslinje. <strong> (B) Mærkning området, hvor kraniotomi finder sted lateralt i forhold til Tindingmusklen, medialt til den overlegne sinus sagittalis, og dorsale til bregma. (C) Brain overflade efter en kraniotomi, med et intakt dura lag og dækglasset på plads; cirklen viser placeringen af det iskæmiske område efter distal MCAo. (D) Færdig kronisk kraniel vindue med fast låg glas, klar til gentagne billeddannelse i flere uger (b = bregma, tm = tidsmæssige muskel, SSS = overlegen sagittal sinus, ai = område med iskæmi). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Kombination af den laterale Kronisk CW og Distal MCAo eller Sham Surgery. (A) The MRI udført 24 timer efter sham kirurgi viser ikke nogen læderede kortikale væv. (B) The MR udført 24 timer efter iskæmi klart afbilder den iskæmiske læsion (*) placeret under den kroniske CW. (C) Intravital epi-fluorescens imaging (øvre del) og to-foton-billeddannelse (nederste del) af kortikal vaskulatur. (D) infarktvolumen vurderet via MRI ved 24 timer og 96 timer efter iskæmi, viste en gennemsnitlig læsion volumen på 13,16 2,3 mm 3 ved 24 timer og 12,2 1,9 mm 3 ved 96 timer. Hver prik repræsenterer et individuelt dyr (n = 10 dyr pr gruppe, gennemsnit ± SEM). Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Slagtilfælde er blandt de vigtigste årsager til langvarig invaliditet og død på verdensplan en. Beyond akut behandling, undersøger nye metoder og mekanismer til at fremskynde og forbedre inddrivelsen efter slagtilfælde er stadig en førsteklasses medicinsk mål 7. Eksperimentelle slagtilfælde forskere ofte anvender gnaver modeller af fokal cerebral iskæmi. Faktisk modeller inducerer forbigående eller permanent MCAo efterligner en af de mest almindelige typer af fokal cerebral iskæmi hos patienter 4. Udover proximal okklusion af MCA, glødetråden model for kirurgisk okklusion af den distale MCAo er sandsynligvis den mest brugte model i eksperimentel slagtilfælde forskning 5,19. Her beskriver vi den grundlæggende teknik for permanent distal MCAo kombineret med en lateral CW, hvilket giver mulighed for langsgående intravital mikroskopi i mus. Høj reproducerbarhed læsionsvolumen, samt meget lave dødelighed, navnlig med hensyn til at studere langsigtede resultater, are de vigtigste fordele ved denne murine model. I denne kortikal slagtilfælde model, kan blodkar i slagtilfælde området og peri-infarkt region visualiseres via den kroniske CW. Ved hjælp af en multi-fluorescens epifluorescens videomicroscopic systemet, blodgennemstrømning dynamik og den dynamiske rekruttering af cirkulerende celler kan visualiseres. Blodkar visualiseres ved anvendelse af fluorescensmærkede makromolekyler, som dextraner eller albumin. Celler kan mærkes enten ved fluorescerende farvestoffer eller ved genetiske modeller, såsom knoglemarvsceller kimærer med GFP-positive dyr. Yderligere, for at studere celle-til-celle interaktioner og dynamikken i ekstravaskulære celler, kan en to-foton laser scanning konfokal mikroskop anvendes. kan udføres billeddannelse op til 250 um under kortikale overflade. Igen er blodkar farvet ved anvendelse af fluorescensmærkede makromolekyler, og cellerne mærkes genetisk (fx ved hjælp af transgene GFP-Nestin mus).
Den kraniel vinduekirurgi udføres via en kraniotomi uden at åbne dura. En væsentlig faldgrube er at uheld skade dural lag og cortex nedenunder når du åbner kraniet med mikroborehuller. Derfor er denne teknik kræver visse tekniske færdigheder for at undgå skader på dura og cortex, som inducerer en immunreaktion og påvirkninger mikroskopi resultater. Alternativt er en potentiel tyndet-skull model begrænset af mindre pålidelige mikroskopi kvalitet på grund af de resterende kranium, især på langt sigt. Ofte gentagne kranium udtynding er nødvendig, mens det i CW-modellen, vinduet kvaliteten holder i flere måneder, indtil kraniet genvækst eller duremæssige fortykkelse påvirkninger billedkvalitet 14,20. En graduering af denne model med en fortyndet-kranium præparat ville være muligt. Det dural lag bør overlades på hjernen for at undgå enhver skade eller excitation af cortex. Kun hvis der ønskes en direkte påføring på det iskæmiske område i en eksperimentel model kan genbruges duraflyttet, omhyggeligt og uden at skade nogen bro vener.
I modsætning til modeller, der kombinerer en CW og inducerende målrettet fartøj okklusion via bestråling af cirkulerende fotosensibilisatorer, hvilket fører til kun meget små iskæmiske læsioner, de distale MCAO model efterligner fleste af menneskelige streger der er placeret i den kortikale MCA område 13. For at undgå interferens med en forbigående inflammatorisk reaktion på grund af CW forberedelse, bør vinduet forberedes flere dage før distal MCAo kirurgi.
En række tests for at vurdere funktionelle samt adfærdsmæssige aspekter i gnavere er tilgængelige (fx ganganalyse, rotarodtesten, pole test, klæbende fjernelse test, trappe test, åben mark test, og Morris water maze) 21. I alle disse tests, mus udsat for MCAo udføre mindre held end kontroldyr med hensyn til kortsigtede og mellemliggende sigt resultater. Men hensyn til vurderingen aflangsigtede resultater, må det erkendes, at følsomheden af funktionelle test er meget begrænset i forhold til distal MCAo, samt mild proksimale MCAo 19,21-23.
Distal MCAo, udført af veluddannede kirurger, kan induceres inden for mindre end 20 minutter og kan producere yderst reproducerbare iskæmiske læsioner. reproducerbarhed kræver dog en grundig kontrol af konfoundere. Forskelle i kirurgisk teknik kan føre til forskelle i infarkt størrelse 24. Forskellige musestammer kan vise en anden streg udfald på grund af forskelle i cerebral vaskulær anatomi mellem stammer. Som kropstemperatur påvirke neuronal beskadigelse og tilbøjelighed til iskæmi, med hypotermi fører til mindre læsioner og hypertermi til mere alvorlige underskud 25,26, temperaturkontrol og vedligeholdelse er yderst relevante i denne model, samt i andre iskæmimodeller 27. Generelt fysiologiske parametre, såsom blod tryk lore og blod gasser, er vigtige konfoundere af resultat og skal kontrolleres for 28. Desuden er valget af anæstetikum er meget vigtigt, da nogle midler kan udøve direkte neurobeskyttende virkninger eller virker indirekte via vasoaktive egenskaber 29. Derfor bør udsættelse for anæstesi standardiseres og holdes så kort som muligt. Endelig boligforhold, ligesom brugen af berigelse, kan påvirke udfald af slagtilfælde så godt, og derfor bør standardiseres og beskrevet i forskning rapporter 30. At producere relevante prækliniske resultater for udviklingen af nye terapeutiske metoder, standardisering, kvalitetskontrol og rapportering er af allerstørste betydning 31.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Binocular surgical microscope | Zeiss | Stemi 2000 C | |
| Light source for microscope | Zeiss | CL 6000 LED | |
| Heating pad with rectal probe | FST | 21061-10 | |
| Stereotactic frame | Kopf | Model 930 | |
| Anaethesia system for isoflurane | Draeger | ||
| Isoflurane | Abott | ||
| Dumont forceps #5 | FST | 11251-10 | |
| Dumont forceps #7 | FST | 11271-30 | |
| Bipolar Forceps | Erbe | 20195-501 | |
| Bipolar Forceps | Erbe 20195-022 | ||
| Microdrill | FST 18000-17 | ||
| Needle holder | FST | 12010-14 | |
| 5-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | ||
| 7-0 silk suture | Feuerstein,Suprama | ||
| 8-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | ||
| Veterinary Recovery Chamber | Peco Services | V1200 |
References
- Mukherjee, D., Patil, C. G. Epidemiology and the global burden of stroke. World Neurosurg. 76 (6), Suppl 85-90 (2011).
- Ebinger, M., Prüss, H., et al. Effect of the use of ambulance-based thrombolysis on time to thrombolysis in acute ischemic stroke: a randomized clinical trial. JAMA. 311 (16), 1622-1631 (2014).
- Ebinger, M., Lindenlaub, S., et al. Prehospital thrombolysis: a manual from Berlin. J vis Exp. (81), e50534 (2013).
- Bogousslavsky, J., Van Melle, G., Regli, F. The Lausanne Stroke Registry: analysis of 1,000 consecutive patients with first stroke. Stroke. 19 (9), 1083-1092 (1988).
- Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J Vis Exp. (47), (2011).
- Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
- Meairs, S., Wahlgren, N., et al. Stroke research priorities for the next decade--A representative view of the European scientific community. Cerebrovasc Dis. 22 (2-3), 75-82 (2006).
- Rosamond, W., Flegal, K., et al. Heart disease and stroke statistics--2007 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 115 (5), 69-171 (2007).
- Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. The science of stroke: mechanisms in search of treatments. Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).
- Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view. Trends Neurosci. 22 (9), 391-397 (1999).
- Dirnagl, U., Endres, M. Found in Translation: Preclinical Stroke Research Predicts Human Pathophysiology, Clinical Phenotypes, and Therapeutic Outcomes. Stroke. , (2014).
- Prinz, V., Hetzer, A. -M., et al. MRI heralds secondary nigral lesion after brain ischemia in mice: a secondary time window for neuroprotection. J Cereb Blood Flow Metab. , (2015).
- Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain. J Vis Exp. (61), (2012).
- Holtmaat, A., Bonhoeffer, T., et al. Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
- Iadecola, C., Dirnagl, U. The microcircualtion--fantastic voyage: introduction. Stroke. 44 (6), Suppl 1 83 (2013).
- Blinder, P., Tsai, P. S., Kaufhold, J. P., Knutsen, P. M., Suhl, H., Kleinfeld, D. The cortical angiome: an interconnected vascular network with noncolumnar patterns of blood flow. Nat Neurosc. 16 (7), 889-897 (2013).
- Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Drew, P. J., Nishimura, N., Schaffer, C. B., Kleinfeld, D. Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain. J Cereb Blood Flow Metab. 32 (7), 1277-1309 (2012).
- Cabrales, P., Carvalho, L. J. M. Intravital microscopy of the mouse brain microcirculation using a closed cranial window. J Vis Exp. (45), (2010).
- Rosell, A., Agin, V., et al. Distal occlusion of the middle cerebral artery in mice: are we ready to assess long-term functional outcome. Transl Stroke Res. 4 (3), 297-307 (2013).
- Dorand, R. D., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex. Intravital. 3 (2), (2014).
- Balkaya, M., et al. Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).
- Balkaya, M., Kröber, J., Gertz, K., Peruzzaro, S., Endres, M. Characterization of long-term functional outcome in a murine model of mild brain ischemia. J Neurosci Methods. 213 (2), 179-187 (2013).
- Freret, T., Bouet, V., et al. Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: Usefulness of adhesive removal test. Beh Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).
- Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. RODENT STROKE MODEL GUIDELINES FOR PRECLINICAL STROKE TRIALS (1ST EDITION). J Exp Stroke Trans Med. 2 (2), 2-27 (2009).
- Florian, B., Vintilescu, R., et al. Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia. Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).
- Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats. Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).
- Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes. Stroke. 35 (7), 1720-1725 (2004).
- Shin, H. K., Nishimura, M., et al. Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia. Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).
- Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism. Neuroreport. 13 (11), 1431-1435 (2002).
- Gertz, K., Priller, J., et al. Physical activity improves long-term stroke outcome via endothelial nitric oxide synthase-dependent augmentation of neovascularization and cerebral blood flow. Circ Res. 99 (10), 1132-1140 (2006).
- Dirnagl, U. Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research. J Cereb Blood Flow Metab. 26 (12), 1465-1478 (2006).
