Aqui descrevemos um procedimento para capturar imagens ao vivo da gastrulação de Drosophila. Isso nos permitiu entender melhor a constrição apical envolvida no desenvolvimento inicial e analisar melhor os mecanismos que governam os movimentos celulares durante a modificação da estrutura do tecido.
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Artigo de método
Imagiologia de Alteração Forma celular e Movimento celular em Drosophila gastrulação Usando Reporter DE-caderina moscas transgénicas
Neste artigo
Resumo
Resumo
Gastrulação é o primeiro conjunto de eventos morfologicamente dinâmicas que ocorrem durante o desenvolvimento embrionário de animais multicelulares, tais como Drosophila. Esta alteração morfológica é também reconhecido como epitelial para mesenquimal (EMT). A desregulação de EMT está associada com fibrose e metástases do cancro. Há uma evidência emergente de que EMT é controlado por um número de mecanismos moleculares. Como tal, muitos genes-chave que controlam a constrição apical também são conhecidos por serem fatores importantes na EMT observado na metástase do câncer. Como EMT durante Drosophila gastrulação, as células epiteliais podem ser induzidas a alterar a sua forma e ser reprogramadas de modo a redireccionar o destino celular no sentido de vários outros tipos de células. Aqui nós fornecemos um método de imagem robusta de Drosophila gastrulação para ensaiar o início de movimentos celulares morfogenéticos e identificação destino celular durante esta fase do desenvolvimento embrionário. Usando este método, identificamos cEll rearranjo no momento da gastrulação e demonstrar a importância de constrição apical durante a gastrulação utilizando GFP marcado DE-caderina.
Introdução
Gastrulação é o primeiro conjunto de eventos morfologicamente dinâmicas que ocorrem durante o desenvolvimento embrionário de animais multicelulares, tais como Drosophila 1,2. Curiosamente, a evidência emergente sugere que este processo é regulado através da interação entre os mecanismos mecânicos e moleculares 3. Além disso, o epitelial para mesenquimal (EMT), que é um processo crucial para a gastrulação, também está implicado em processos de doenças humanas, tais como metástases de cancro 4-8. Como tal, muitos genes que controlam a constrição apical também são conhecidos por serem factores fundamentais para o EMT observado n....
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Protocolo
NOTA: As moscas transgénicas usadas neste estudo incluem as seguintes: DE-CAD :: GFP 10.
1. Preparação da Apple Placa
- Prepara-se uma mistura de 12,5 g de agar, 125 mL de 100% disponível comercialmente sumo de maçã, 12,5 g de glucose, e 375 mL de H 2 O. Aquecer a mistura em um forno de microondas e coloque em uma placa de cultura de células a 3 cm. Armazenar a mistura a 4 ° C para uso futuro.
- Depois de preparar o prato de maçã, adicione uma camada fina de pasta de levedura amassado em cima dela para permitir que as moscas colocar ovos.
2. Embrião Elaboração e protocolo Imagens....
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Resultados
Aqui, vamos mostrar os eventos gastrulação do embrião Drosophila e uma visão geral do processo de preparação do embrião (Figura 1). As membranas celulares são marcados utilizando DE-caderina :: GFP e imagem ao vivo dos movimentos de células é realizada no momento da gastrulação em Drosophila (Figura 2). Desde moscas DE-caderina GFP permitem visualizar junções de aderência celular, somos capazes de traçar a forma da célula apical e movimentos usa.......
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Discussão
Embora tenhamos relatado anteriormente um procedimento semelhante para capturar imagens ao vivo do processo de gastrulação em Drosophilla1, o método que descrevemos aqui é detalhado e fácil de rastrear a expressão endógena de caderina e, portanto, é bastante útil para a triagem genética dos principais fatores envolvidos na gastrulação. Para maximizar o sucesso com este procedimento de imagem, é essencial usar uma lâmina recuada. A pressão mecânica às vezes causa morte embrionária. Portanto, também é i.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este estudo foi apoiado pela Astellas Foundation for Research on Metabolic Disorders (HT), Takeda Science Foundation (HT) e MEXT-Supported Program for the Strategic Research Foundation at Private Universities (HT).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Óleo de halocarbono 700 | Sigma | MKBH 5726 | |
| Graxa a vácuo Silicone | Beckman | 335148 | |
| Cobertura de vidro | Matsunami vidro | Espessura No1 | 24 - 36 mm |
| Embrião stariner | Corning | Corning3477 | |
| Plástico Drosophilla Stock Garrafas | Hitec | MKC-100 | |
| DE-Caderina knock-in moscas | REF (10) |
Referências
- Haruta, T., Warrior, R., Yonemura, S., Oda, H. The proximal half of the Drosophila E-cadherin extracellular region is dispensable for many cadherin-dependent events but required for ventral furrow formation. Genes Cells. 15 (3), 193-208 (2010).
- Oda, H., Takeichi, M.
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Reimpressões e permissões
