ADSC folhas transplante para prevenir a estenose após estendido esofágico endoscópica submucosa Dissection

Resumo

Este estudo relata um método bem-sucedido de células adiposo endoscópica derivadas de tecido do estroma (ADSC) em folha transplante para a prevenção de estenose esofágica após uma dissecção endoscópica da submucosa estendida (ESD) em suínos.

Resumo

Nos últimos anos, a construção de folhas de células estimulou grande interesse na medicina regenerativa, especialmente para procedimentos de cirurgia reconstrutiva. O desenvolvimento de tecnologias diversificadas que combinam células estromais derivadas de tecido adiposo (ADSCs) com vários biomateriais levou à construção de vários tipos de substitutos de engenharia de tecidos, tais como osso, cartilagem e tecidos adiposos de roedor, de porcino, ou ADSCs humanos. esofágico dissecção submucosa endoscópica estendida (ESD) é responsável pela formação de estenose de esôfago. prevenção de estenose continua sendo um desafio, sem tratamentos eficazes disponíveis. Estudos anteriores relataram a eficácia do transplante de folhas de células da mucosa no modelo canino e em seres humanos. ADSCs são atribuídas propriedades anti-inflamatórias, efeitos de modulação imunes locais, indução neovascularização e habilidades diferenciação em mesenquimais e linhagens não-mesenquimais. Este estudo original descreve o tra endoscópicansplantation de uma construção da engenharia de tecidos ADSC para evitar estenose esofágica em um modelo suína. A construção ADSC foi composta de duas folhas adsc alogénicos em camadas umas sobre as outras em uma membrana de suporte de papel. As ADSCs foram marcadas com o fluororo PKH67 para permitir à base de sonda endomicroscopy de laser confocal de monitorização (pCLE). No dia do transplante, efectuou-se uma 5-cm e ESD hemi-circunferencial que se sabe induzir estenose esofágica. Os animais foram imediatamente endoscopicamente transplantado com 4 construções adsc. A completa adesão das construções adsc foi obtido após 10 min de aplicação suave. Os animais foram sacrificados no dia 28. Todos os animais foram transplantados com sucesso. O transplante foi confirmada no dia 3 com uma avaliação pCLE positivo. Em comparação com animais transplantados, animais de controle desenvolvido restrições graves, com maior desenvolvimento do tecido fibrótico, o problema alimentar mais frequente, e ganho de peso reduzido. No nosso modelo, o transplante de allogenic ADSCs, organizadas em folhas de células duplas, depois de ESD estendida foi bem sucedida e fortemente associada com uma taxa de estreitamento esofágico inferior.

Introdução

A gestão de tumores esofágicos superficial mudou com o desenvolvimento de novas técnicas endoscópicas. Hoje em dia, a ressecção endoscópica é o tratamento de primeira linha. Na verdade, ele é associado com menores taxas de morbidade e mortalidade do que uma cirurgia com a igualdade de resultados oncológicos ^{1, 2, 3.} ressecção endoscópica da mucosa (EMR) e ressecção endoscópica da submucosa (ESD) são as técnicas mais amplamente utilizados. No caso de um tumor superficial prolongado, ESD é preferido. Comparado ao EMR, ESD permite en ressecção bloco, independe....

Protocolo

Todos os animais foram tratados de acordo com a Comissão de Ética em Pesquisa Animal (orientações do Ministério da Agricultura francês). O protocolo recebeu a aprovação do comitê de ética local autorizado para experimentações com animais na Descartes Universidade Paris (número registrado MESR 2.035,02; Faculdade de Medicina de Paris Descartes, Paris, França).

1. ADSC Cultura e Etiquetagem

1. Obter ADSCs confirmados de uma instituição privada. Culturas ADSCs alogénicas a 37 ° C e 5% de CO ₂ com meio essencial mínimo alfa incluindo soro bovino fetal a 10% e 1% de antibióticos (penicilina e estreptomicina).
2. Obter cerca de 24 x 10

Resultados

A cultura de ADSCs e o procedimento para obter a folha de ADSC é mostrado na Figura 1. A Figura 2 mostra a construção do enxerto, composto por duas folhas adsc em camadas umas sobre as outras na sua membrana de suporte de papel. ADSCs foram previamente marcado com o fluoróforo PKH67 para permitir a entrada de monitorização do enxerto vivo com pCLE. A Figura 3 mostra as diferentes etapas de dissecção esofágica submucosa .......

Discussão

Neste modelo suíno, o transplante ADSC folhas foi tecnicamente bem sucedida, ea avaliação in vivo pCLE permitido para monitoramento enxerto de células. As avaliações clínicas, endoscópicos, radiológicos e histológicos demonstraram a eficácia da folha ADSC endoscópica na prevenção de estenose esofágica após ESD estendida.

O transplante endoscópica de uma solução ADSC glicerol contendo uma folha de carmim indigo é uma abordagem inovadora em medicina regenerativa. Ohki et ai. .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tampa endoscópica transparente compatível com Q180	Olympus Optical Co
GIF-Q180 gastroscópio	Olympus Optical Co
Exera II	Olympus Optical Co
18 G	Olympus Optical Co
ERBE ICC 350	Tecnologia
Indigo carmin 1%	Life
Faca híbrida endoscópica	Life
Minisonde Z pCLE sonda verde	Tecnologia Mauna Kea Você		deve aprender a usar a sonda. A manipulação pode ser difícil.
Soro fetal bovino	Sigma Aldrich	12105C
Tripsina	Sigma Aldrich	T146
Alfa mínimo essencial meio Thermo	Fisher	22561-021
Soluções salinas tampoadas com fosfato	Thermo Fisher	10010-023
PKH67 kit de corante	Sigma Aldrich	Mini67-KT
Célula responsiva à temperatura de 12 poços placa de cultura	Upcell Thermo Scientific	174900	Sinta o weel com 4 mL de cultura média padrão 30 min antes de semear células
Esomeprazol 40 mg	Biogaran
Moprhine Sulfato 50 mg/mL	Lavoisier
Amoxicilina 1 g	Biogaran
Cetamina 250 mg/5 mL	Panpharma
Propofol 10 mg/mL	Fresenius
Papel hidrofóbico	Carrefour

Sistema de Videoscópio Agulha de injeção Unidade de eletrocirurgia ERBE