Escaneado de Protocolos de Microscopía Electrónica (SEM) para la Problemática de la planta, Oomycete, y muestras de hongos

M. Angélica Bello; Yolanda Ruiz-León; J. Vladimir Sandoval-Sierra; Svetlana Rezinciuc; Javier Diéguez-Uribeondo

doi:10.3791/55031

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Escaneado de Protocolos de Microscopía Electrónica (SEM) para la Problemática de la planta, Oomycete, y muestras de hongos

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DOI:

10.3791/55031

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3 de febrero de 2017

M. Angélica Bello¹ , Yolanda Ruiz-León² , J. Vladimir Sandoval-Sierra³ , Svetlana Rezinciuc⁴ , Javier Diéguez-Uribeondo³

¹Biodiversity and Conservation Department, Real Jardín Botánico, CSIC, ²Research Support Unit, Real Jardín Botánico, CSIC, ³Mycology Department, Real Jardín Botánico, CSIC, ⁴Division of Glycoscience, AlbaNova University Center, Royal Institute of Technology (KTH)

En este artículo

Resumen

Los problemas en el procesamiento de muestras biológicas para la observación de microscopía electrónica de barrido incluyen el colapso celular, el tratamiento de muestras de microambientes húmedos y la destrucción celular. Aquí se compilan y detallan protocolos de bajo costo y relativamente rápidos adecuados para preparar muestras desafiantes como meristemos florales, quistes de oomicetos y hongos (Agaricales).

Resumen

Los problemas más comunes en el procesamiento de muestras biológicas para observaciones con el microscopio electrónico de barrido (SEM) incluyen colapso celular, el tratamiento de muestras de microambientes húmedos y destrucción de las células. El uso de tejidos florales jóvenes, quistes oomycete y esporas de hongos (Agaricales) como ejemplos, los protocolos específicos para procesar las muestras delicadas están descritos aquí que superan algunos de los principales desafíos en el tratamiento de la muestra para la captura de imágenes bajo el SEM.

meristemos florales fijos con la FAA (formalina-acético-alcohol) y se procesa con el Punto Crítico Secadora (CPD) no mostraron colapsaron paredes celulares u órganos distorsionadas. Estos resultados son cruciales para la reconstrucción del desarrollo floral. Un tratamiento basado en la CPD similar de muestras de microambientes húmedos, como los quistes oomycete fijados con glutaraldehído, es óptimo para poner a prueba el crecimiento diferencial de las características de diagnóstico (por ejemplo, las espinas del quiste) en diferentes tipos de Dobstrates. La destrucción de células de la enfermera adjunta a esporas de hongos se evitó después de la rehidratación, la deshidratación y el tratamiento de CPD, un paso importante para los estudios más funcionales de estas células.

Los protocolos detallados aquí representan bajo costo y alternativas rápidas para la adquisición de imágenes de buena calidad para reconstruir los procesos de crecimiento y estudiar sus características de diagnóstico.

Introducción

En biología, el uso de la microscopía electrónica de barrido (SEM) se ha extendido a los estudios de la evolución estructural, la morfología comparativa, el desarrollo de órganos, y la caracterización de las poblaciones o especies ^1. Con su vista bidimensional de estructuras microscópicas, áreas como la micromorfología y sistemática se beneficiaron de los avances de la técnica SEM desde la segunda mitad del siglo ^20. Por ejemplo, la introducción de la metodología de revestimiento por bombardeo iónico en la década de 1970 hizo posibles observaciones de materiales delicados, como los brotes apicales y flores que potencien la capacidad....