Yüzeyler İnsan Norovirus Tespiti sürüntü Örnekleme Yöntemi

Özet

Çevresel sert yüzeylerde norovirüsün tespiti ve miktarının belirlenmesi için makro köpük tabanlı bir örnekleme metodolojisi geliştirilmiş ve değerlendirilmiştir.

Özet

İnsan Noroviruses salgın ve dünya çapında dağınık gastroenteritin önde gelen nedenidir. En enfeksiyonlar ya çevresel yüzeylerde ya da gıda yoluyla dolaylı olarak kişiden kişiye yolla doğrudan yayılır ya, çünkü kirlenen fomitler ve cansız yüzeyler norovirus salgınları sırasında virüsün yayılması için önemli araçlardır.

Biz geliştirdik ve algılama ve sert yüzeylerde insan Noroviruses bir tiplemesi için macrofoam bezlerden kullanarak bir protokol değerlendirildi. Fiber uçlu bezlerden veya antistatik mendil ile karşılaştırıldığında, macrofoam bezlerden 700 ^cm2 klozet yüzeylerinden virüs kurtarma (aralık 1,2-33,6%) izin verir. Protokol spin sütunları kullanılarak viral RNA'nın bezlerden virüsün çıkarma ve bir daha konsantrasyon yapılması adımlarını içerir. norovirus gastroenterit olmuştu yolcu gemileri ve uzun süreli bakım tesislerinde yüzeylerinden toplanan olmuştu 217 sürüntü örneklerinin toplam olarak, 127 (% 58.5)RT-qPCR GII norovirusa için pozitif test bildirildi. Bu 29 (% 22.8) başarıyla genotip olabilir. Sonuç olarak, klinik örnekler mevcut olmadığında virüsün saptanması yanı sıra salgınlar sırasında çevresel kirlilik düzeyinin belirlenmesinde yardımcı olabilir geliştirilen protokolü kullanılarak çevresel yüzeylerde norovirusa tespiti; aynı zamanda iyileştirme stratejilerinin etkinliğinin izlenmesi kolaylaştırabilir.

Giriş

İnsan Noroviruses salgın ve sporadik akut gastroenterit, dünya çapında ^{1, 2, 3} lider nedenidir. Virüs son derece bulaşıcıdır ve iletim kişi etkileşim ya da dolaylı kirlenmiş yiyecek, su ya da çevresel yüzeylerle temas yoluyla doğrudan kişi aracılığıyla gerçekleşir. Noroviruses uzun süre tutacak ve uzun süreli çevresel yüzeyler üzerinde virüs yaşam ^{1, 2, 3,} belgelenmiştir edilebilir. Pik ağızlık açma işlemi esnasında, virüs partiküllerinin milyarlarca dışkıların gramı başına se....

Protokol

Alanında 1. Swab Örnekleme

1. eldiven temiz bir çifti giymek.
2. bir ölçüm bandı veya cetvel kullanarak yüzeyine dokunmadan örnekleme alanının boyutunu ölçün. Mümkün olduğu kadar doğru bölgeyi tahmin ve bir rapor formu (Ek Tablo 1) doldurmak için deneyin.
3. olası sızıntı ve etiket örneği taşıma çantaları ve çubukla kitleri için sürüntü kiti edin.
4. şu şekilde numune alanı boyunca çubukla hareket Yatay yönde bir felç, dikey yönde bir vuruş ve bir köşegen yönünde bir vuruş. 700 cm ² den bir yüzey alanı büyük çubukla etmeyin.
5. bir tüp içine her bezi yerleştirin ve güvenli kapağı sıkın.

Sonuçlar

Şekil 1 sürüntü örnekleme protokolünün bir akış şemasını göstermektedir. Bu protokol dört ana aşamadan oluşmaktadır; 1) numune toplama, 2) örnek depolama ve nakliye, 3) viral RNA arıtma ve konsantrasyon ve 4) RT-qPCR tahlil ve genotiplendirme.

Şekil 1: norovirusa çevresel yüzey örnekleme için nihai protokolün akış şeması

Tartışma

Noroviruses 18 ve 10 ³ virüs parçacıkları ²⁰ arasında% 50 insan bulaşıcı dozu var. Bu nedenle, yüzeylerin bile düşük seviyeli kirlenme bir halk sağlığı riski doğurabilir. iç çıkarma kontrolü olarak taşıma sırasında 1) farklı sürüntü malzemeleri, 2) depolama koşulu bezlerden, 3) viral RNA konsantrasyonu ve 4) kolifaj MS2: çubukla örnekleme protokolünün çeşitli yönleri de dahil olmak üzere değerlendirildi.

Yakın zamana kadar, pamuk, polyester, naylon ve benze.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Kitler için genel isim
Makro köpük çubuk<>	Önceden nemlendirilmiş EnviroMax Swab kiti	Püriten	2588060PFUW
RNA Lizis tamponu	CDC UNEX tamponu	Microbiologics	Cat No MR0501
< güçlü >RNA ekstraksiyon spin kolonu< / güçlü >	Midi kolon	Omega Biotek	Cat No R6664-02
< güçlü >RNA saflaştırma spin kolonu< / güçlü >	Zymol RNA Temiz ve Yoğunlaştırıcı kiti & nbsp;	Zymo Araştırma	Kedisi Hayır R1016
Gerçek zamanlı RT-PCR kiti	AgPath kiti Tek Adımlı RT-PCR Kiti	Yaşam Teknolojileri	Kedi No
4387391Konvansiyonel RT-PCR kiti	Qiagen tek adımlı RT-PCR kiti	Qiagen kiti	Cat No 210212
Jel ekstraksiyon kiti	Qiagen QIAquick jel ekstraksiyon kiti	Qiagen kiti	Kedi No 28704 veya 28706
	Kolifaj MS2	ATCC	Cat No 15597-B1
	RNA akış transkriptleri
	Gerçek zamanlı PCR platformu	Uygulamalı Biyosistemler	Model ABI 7500
	Optik 96 kuyulu reaksiyon plakası	Thermo Scientific	Cat No 4316813
	MicroAmp Şeffaf Yapışkan Film	Thermo Scientific Cat	No 4306311