Summary
פרוטוקול זה מתאר לראשונה את הליך כירורגי של השתלה קבועה של צנתור שלפוחית השתן בשילוב עם אלקטרודות חיצוניות סוגר השופכה, ואת השני, את המדידה של הפונקציה של שלפוחית השתן או השופכה חיצוני טבעתי בבעלי ער מושתל.
Abstract
פונקציה במערכת השתן התחתונה שקובעת בעיקר על-ידי הפונקציה cystometric שלפוחית השתן לניתוח מכרסמים. Cystometries המקובלת מבוצעות בדרך כלל כמו מסוף ניתוח בהרדמה אראטאן. זה ידוע כי הרדמה יכולים להשפיע על תפקוד שלפוחית השתן. ומכאן, המטרה של טכניקה זו היא לבצע מדידות cystometric של שלפוחית השתן, סוגר השופכה חיצוני בחולדות ער בקלילות מאופקת. למטרה זו, צנתר לשלפוחית השתן הוא מושתל לתוך הכיפה שלפוחית השתן. לאחר מכן, שתי אלקטרודות מושתלים הדו-צדדיים שריר הסוגר החיצוני של השופכה, אלקטרודה הקרקע מאוחה כדי שריר השלד לא מגיב. הקטטר בשלפוחית השתן ואלקטרודות שלושה סוף סוף חפר subcutaneously באזור הצוואר, מודבקת רתמה. בטכניקה זו, ניתן למדוד בדרכי השתן התחתונה בנקודות זמן מרובים של אותה חיה כדי להעריך פונקציה במערכת השתן התחתונה. היישום העיקרי של טכניקה זו היא ההמשך של שלפוחית השתן סימולטני ותפקוד חיצוני סוגר השופכה אצל חולדות בריא ער ואחרי אינדוקציה של מחלה או פציעה. יתר על כן, לאחר מכן ניטור בדרכי השתן התחתונה ניתן לבצע במהלך הערכת הפגיעה/המחלה וכדי לפקח על יעילות הטיפול.
Introduction
כדי לנתח השתן ואחסון הרקה ותפקוד לקוי, רוב המחקרים השתמשו מודלים מכרסמים. באמצעות הפעלת רציפים של רפלקסים, micturition מופק. התיאום של רפלקסים אלה חיוני עבור הרקה יעיל1. טכניקות הצריבה Cystometric לספק כלים בעלי ערך לניתוח הפונקציה שלפוחית השתן תחת בקרה עצבית שלו1.
Cystometries המקובלת ביותר אצל חולדות נעשים כמו ניתוח יחיד, גמר בהרדמה, בעיקר urethane2, ולא להתמקד אך ורק שלפוחית השתן. עם זאת, פתולוגיות מסוימות כמו neurogenic בתפקוד במערכת השתן התחתונה (NLUTD), לא רק על שלפוחית השתן, אלא גם שקע שלפוחית השתן, הטבעת השופכה חיצוני, הוא לקוי3,4. זה הופך NLUTD קשה לעקוב, אם רק שלפוחית השתן נבדק מדידה cystometric יחיד. כדי לקבל תוצאות אמינות כי הם דומים לבני אדם, זה חיוני כדי למדוד במדויק את שלפוחית השתן ואת הפונקציה סוגר השופכה חיצוניים והן שלה אינטראקציות2. יתר על כן, חשוב לבצע ניתוחים פונקציונליים בחולדות ער כמו הרדמה סביר מאוד לשנות שלפוחית השתן פונקציה2,5,6. Cystometric טוב הקלטה בבעלי חיים ערה היא הבסיס לצורך זיהוי תקלה ותפקוד שלפוחית השתן7.
Cystometry בעלי חיים קטנים תחנת בשימוש (למשל, תחנת cystometry Catamount (מיליגרם)) הוא יחידה כדי לבצע ניתוח cystometric חיות ערים קטנות8. באמצעות צנתר לשלפוחית השתן קבוע ואלקטרודות מושתל סוגר השופכה חיצוני, ניתן לבצע מדידות חוזרות ונשנות במשך פרקי זמן ארוכים יותר2. לפיכך, CCS מספק כלי אבחוני-neurogenic והערכות NLUTD במודל מכרסמים, שבו pathomechanisms יכולות להשתנות במהלך מעקב לטווח קצר או בינוני. בנוסף, שיטה זו כולל ניתוח cystometric החפץ-מופחתת על ידי שימוש restrainer לערוך מדידות שלפוחית השתן אצל חולדות ער.
בנייר זה, אנו מתארים את הגישה כירורגי לצמיתות שתל. קטטר לשלפוחית השתן ואלקטרודות סוגר השופכה חיצוני, יחד עם המדידות cystometric ער בחולדות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל ההליכים המתוארים כאן אושרו על ידי ועדת האתיקה הממשלתית האוסטרית לחקר בעלי חיים (Bundesministerium לדנציג Wissenschaft, Forschung und בלבד מהתחנה המרכזית, WF / V /3b) היו בדרישות האגודה הערכה של מעבדה הנחיות טיפול בבעלי חיים לשימוש בבעלי חיים. חולדות המשמש עבור גישה זו היו חולדות לואיס, נקבה בת שבוע 12. להשתמש בכלים סטריליים לאורך כל הפרוטוקול.
1. הכנה גשמי
-
ייצור של הקטטר
- חותכים את הקטטר (פוליאתילן צינורות PE-50) אורך המתאים (20 עד 25 ס מ) כדי להתאים לגודל של החיה.
הערה: השאר כמה אורך נוסף עבור tunneling וטיפול קל. - להתלקח קצה אחד עם מצית כדי לקבל קצהו מעוגל. בדוק הסופי הפתיחה המתאימה ואת הקהה של הקטטר.
- הצב צינור סיליקון ארוך 2 מ מ מעל הקטטר עד שזה נמצא ממש מתחת לסוף מתרחבות.
- חותכים את הקטטר (פוליאתילן צינורות PE-50) אורך המתאים (20 עד 25 ס מ) כדי להתאים לגודל של החיה.
-
לייצור האלקטרודות
- הכינו חוט פלדה מצופה טפלון של 20-25 ס מ (אורך המתאים בהתאם לגודל של החיה).
- הכינו חוט כסף 2 ס מ אורך ולסובב את הקצוות עד לולאה קטנה נשארת. להתפשט 2 מ מ של הבידוד טפלון בקצה אחד. הלחמה של תיל כסף. סיום תיל פלדה המטבחיים.
- החל לק רגיל באיזור ציפוי. להכין צינורות פוליאתילן ארוך 4-מ מ מעל האזור מצופה, לאטום את הקצה על-ידי החלת חום דחיסת המלקחיים.
2. בעלי חיים הכנה
-
הרדמה
- שימוש ההרדמה המתאימה קוקטייל אושרה על ידי המוסד לגנרל הרדמה.
- להכין קוקטייל הרדמה עם medetomidine (0.15 מ"ג/ק"ג) midazolam (0.08 מ"ג/ק"ג), פנטניל (0.01 מ"ג/ק"ג), להזריק intramuscularly על ידי מזרק 1 מ"ל עם מחט מד 27.
-
הכנה כירורגי
- לגלח את הבטן עם גילוח חשמלי, כולל את אזור איברי המין ואת אחורי הקלעים ברמה של השכם.
- לחטא בבטן, צוואר אזורים עם 70% אתנול הראשון, אז 3 לסירוגין קרצוף עם povidone יוד פתרון.
3. שלפוחית שתן קטטר השרשה
- לבצע פתיחה נמוכה של קו אמצע הבטן ברמה של טיט השלישית והרביעית (כ 2-2.5 ס מ אורך) באמצעות אזמל לעור, מספריים כירורגיים עבור שריר בטן.
- לחשוף את שלפוחית השתן על ידי המנחה לקיר הבטן בכיוון קרניו-סימטרית ולתקן אותה בתנוחה זו על ידי הצבת בגב מלקחיים מאחורי שלפוחית השתן כדי להימנע מיצוב מחדש.
- מקום suture הארנק-מחרוזת סביב הכיפה שלפוחית השתן באמצעות תפרים נספגים monofilament של 6-0 עם מחט טפר-טיפ.
- פצעים וחתכים הכיפה שלפוחית השתן בתוך הארנק-המחרוזת, אזמל עצה או מחט 18 גרם להכנסת הקטטר בשלפוחית השתן (ראה פרוטוקול שלב 1).
- הוסף את הצנתר שמולאו מראש עם הפתרון סודיום כלוריד 0.9% פיזיולוגית סטרילית ומשכו בקפידה צנתר לשלפוחית השתן עד הפתיחה מתרחבות של הקטטר ממוקם ממש מתחת לשלפוחית השתן כיפת.
- לאבטח את התפר הארנק-מחרוזת סביב הקטטר ולעשות עצירה-התפר סביב הגוף צנתר עבור קיבוע נוסף.
- בדוק זליגת באמצעות הכיפה שלפוחית השתן על ידי לאט מילוי שלפוחית השתן דרך הקטטר עם פתרון 0.9% נתרן כלורי פיזיולוגיים סטרילי.
4. השופכה הטבעת אלקטרודה השרשה
- להכין שלוש אלקטרודות השרשה (ראה פרוטוקול שלב 1).
- סמן אלקטרודה אחת עם עט הרגיש קבוע הצבעוניים לזיהוי נוסף של האלקטרודה null בעתיד. לחטא אלקטרודות עם 70% אתנול.
הערה: קטטרים אינם מתאימים חום ונהלים עיקור כימי. במקום קר לעקר את האלקטרודות במשך 24 שעות ביממה. - להרחיב את החתך בבטן על ידי מספריים כירורגיים עד עצם הערווה, אך לא לחתוך את symphysis הערווה.
- לזהות את השופכה, ליצור כיס בוטה באמצעות מלקחיים בסדר משני צידי השופכה, אך להימנע הטראומה של כלי או עצבים.
- לזהות כיסי שומן המתאים קרוב השופכה בתוך חלון זה.
- לתקן אלקטרודות דו צדדיים כדי לתיק השמן המתאים באמצעות תפרים נספגים monofilament של 6-0.
הערה: המיקום הסופי של האלקטרודות צריך להיות דו צדדיים באזור אמצע של השופכה. - לקשור את שתי אלקטרודות יחד עם תפרים נספגים monofilament 6-0.
- תפר האלקטרודה null מסומן כדי לשריר דופן הבטן במרחק של השופכה. לקשור את כל שלוש אלקטרודות יחד עם התפר יחיד.
5. מינהור
- עושים חתך קטן בעור בין השכם עבור tunneling.
- מנהרה אלקטרודה חוטים בצוואר לעשות בדיקה אחרונה למיקום הנכון ואני לאמת את מיקום אלקטרודות לאחר tunneling.
- המנהרה קטטר לשלפוחית השתן לשלב השכם - לשים לב שלפוחית השתן תוך מינהור הקטטר כדי למנוע פיתול שלפוחית השתן. למטרה זו, החזק שהצנתור לפני שנכנסים הכיפה שלפוחית השתן כדי למנוע פיתול של שלפוחית השתן.
- לסגור את שרירי הבטן על ידי תפרים רציפים או מופרע polyfilament 4-0 בתפר שנספג. לסגור את החתך בעור על ידי פעולת בתפרים.
- למתוח את החיה לכל ארכו יש distention מקסימלי של חוטים אלקטרודה, קטטר.
- תקן חוטים קטטר, אלקטרודה על-ידי טבעה בהתפר כדי לשריר הכתף.
- לסגור את העור על ידי תפר אחד עם 4-0 את התפר.
6. הרתמה התאמה
- מתאים על הרתמה החיה על ידי משיכת הרתמה מעל ראשה של החיה ומשוך את forelimbs למשרת סוף בין רצועות סיליקון שני. בדוק את גודל לרתום לפי המשקל של החיה לפני הניתוח עם המפיץ.
- המנהרה הקטטר בשלפוחית השתן לחור המרכזי של רתמה, אלקטרודות דרך החור בהזמנה אישית על ידי תרגיל מותאם לגודל של החוטים אלקטרודה.
- התאם את הרתמה על ידי משיכת את רצועות סיליקון. להתאים את הרתמה, אז זה לא רפוי מדי, אך להבטיח שמרחב יישאר לשמור על היכולת לנוע של החולדה.
- השתמש רצועה כבל כדי לתקן רצועות סיליקון.
- חתך האורך של הקטטר בשלפוחית השתן עד 3 ס מ מעל הרתמה, להתחבר פקק 23-G, סוף סוף לתקן אותו לרתום.
7. הייצור של המחבר אלקטרודה
- הכן חום קטן שלוש הפסיכיאטר צינורות (צבע אחר עבור האלקטרודה null). להכין שני צינורות לפסיכיאטר נוסף חום גודל גדול המתאים.
- לקצר את אורך החוטים אלקטרודה אורך אופטימלי כדי שניתן יהיה תחבר מאוחר יותר תקע נקבה מבלי להיות רפוי מדי או קצר מדי. מוריד בידוד ציפוי טפלון החוטים שלוש (כ 2 מ מ), ולסובב את חוטי פלדה למחרוזת.
- מיקום צינורות הפסיכיאטר חום גדול מעל כל החוטים, למקם את שפופרות קטנות בנפרד עבור כל החוטים שלוש, ולהשתמש ברכבת התחתית צבעוניים של האלקטרודה null.
- הלחמה החקירה 3-החיבור-תקע זכר. מקם את האלקטרודות null באמצע, לכווץ אזור שלוש בודדים שפופרות קטנות לעיל מולחמים.
- לכווץ הראשון של הצינורות גדול בקצה של קצות צינור בודדים ולתחנת רכבת התחתית בקווינסוואי גדול הסופי לגבול תקע זכר.
- חבר את תקע זכר למחבר נקבה קבוע לרתום ותיקון עם חתיכה של נייר דבק לבטיחות עוד יותר.
8. לאחר הניתוח טיפול
- לנקות אזורים כירורגי ולחטא עם povidone יוד.
- במקום החיה על כרית החימום עד ער ולתת פתרון נתרן כלוריד 0.9% עבור החלפת מים, בהתבסס על הנחיות טיפול בבעלי חיים מקומיים במהלך ואחרי הניתוח.
- לנהל משככי כאבים (meloxicam 1 מ"ג/ק"ג), אנטיביוטיקה (sulfadoxinum 200 מ ג, trimethoprimum 40 מ"ג, 15 מ"ג/ק"ג) כפתרון משולב הזרקת subcutaneously. פעמיים ביום, לתת משככי כאבים (בוקר וערב), פעם ביום ולתת אנטיביוטיקה, חמישה ימים לאחר מכן.
- ממשיכים עם אנטיביוטיקה במינון זהה במשך תקופה כל מעקב ב- 2-3 זריקות שבועיות.
- לבדוק מדי יום למדידות המתאים של הרתמה ולבצע בדיקה דימומים, במיוחד של אזור הצוואר. התאם את הרתמה, אם זה נהיה חזק מדי על ידי בקפידה המושך רצועות סיליקון.
- לרוקן את הצנתר באופן קבוע פעם בשבוע כדי למנוע מצור.
9. הכנה Cystometric מדידה
- לבצע את המדידות cystometric הראשון לאחר שישה ימים לאחר הניתוח.
הערה: מדידות מוקדמות יותר יכול להיות מושפע על ידי גירוי תרופות ו/או urothelial כאבים עקב ההשתלה קטטר. - להפעיל את המפסק הראשי של המחשב, המגבר EMG.
- למלא את משאבת מזרק בטמפרטורת החדר חימם 0.9% נתרן כלורי. פתח את המחברים-כיוונית אחד אחרי השני באופן יורד, החל מהמשאבה, ותורידי את הצינורות.
הערה: בדוק היטב הנותרים בועות אוויר, כמו בועות תשנה את המידות cystometric.
10. כיול
- תתחיל uroflowmeter בתוכנה וללכת כיול.
- סגור את המחבר-כיוונית המשאבה ואת חיה.
- לפתוח את השסתום manometer מחוברים ' ולחץ על ' אפס בתוכנית '.
- התאמת הלחץ-manometer כדי 100 מ מ כספית, ולחץ כפתור מ מ כספית 100 בתוכנית. העיתונות לאשר כדי לחסוך את ההתאמה כיול. החלון ייסגר אוטומטית.
- סגור את השסתום כדי manometer ופתח את המחברים-כיוונית מהמשאבה לבעל-החיים כדי להיות מוכן למדידה.
11. חיה מסד נתונים (חיה DB)
- כדי לרשום חיות, לתת החיה מזהה תמציתי
- הזן נתונים נוספים, כגון תאריך SCI, התחלה של טיפול, תאריך של קטטר השרשה, קבוצה ניסיונית של שכירה של החיה.
- כדי להיכנס סוף סוף את הנתונים, לחץ על 'שמור רשומה' ולשמור קובץ.
12. מדידה הגדרות לפני ההקלטה
- להפעיל את התוכנה על ידי לחיצה על לחצן התחל.
- בחר את החיה והקש טרה סולם ובלחץ אפס.
הערה: שימו לב תוך הצבת החיה לתוך restrainer, כך אין כבל תקוע, כפי שזה עלול לגרום הסרה של חוט של הכבל EMG.
13. בעלי חיים הכנה
- הסר את תקע קטטר, נתק את התקע EMG הרתמה.
- הכניסו את העכברוש restrainer. לסגור את restrainer ונעל את הרתמה של מלקחיים.
- קבל את הקטטר ואת EMG הכנס החוצה restrainer.
- מניחים את restrainer ביחידת ה-catamount. לשים את הזנב דרך הצינורית, לתקן את הצינור עם קלטת כדי למנוע תנועות.
- חבר את תקע זכר EMG למחבר EMG הנשי הקלטה.
- לחץ על אפס לחץ פעם נוספת ולאחר מכן להתחבר הקטטר הצינור מילוי/הקלטה. בדוק את הלחץ על התוכנה.
הערה: הלחץ צריך להיות חיובי, בסביבות 5-10 ס מ H2O בנקודת ההתחלה. אם הלחץ הוא שלילי, נתק קטטר הצינורית, הקש לחץ אפס ולאחר מכן להתחבר שוב את הקטטר.
14. הקלטה
- אם הקטטר וכבל EMG מחוברים, לחץ משאבת הפעלה והקלטה.
- להתאים את מהירות מילוי הצרכים ניסיוני ב μL/min.
- הערה בפעם מתחיל את ההקלטה, טמפרטורת החדר בספר יומן.
- כדי להפסיק את cystometric הקלטה, לעצור את המשאבה על-ידי לחיצה על הפעל משאבת ולחץ על ' הקלטת שוב '.
הערה: המשאבה תהיה את, אור ירוק במשאבה כבוי. - נתק את הצנתר ולהשתמש את התקע בסימפטומים ולא במחלה עצמה 23 גרם כדי לסגור את קצה הקטטר. נתק את כבל EMG.
- פתח חזית restrainer, מדריך העכברוש restrainer.
הערה: להתמודד עם עכברוש בקפידה, ונטר את החוטים כדי להימנע מכל מנעילה של הכבלים. - חבר את הקטטר בחזרה הרתמה. חבר מחדש את תקע EMG לרתום והניח חתיכה של נייר דבק מסביב התקע.
הערה: אם החיה יש בעיה בדרכי השתן התחתונה פתולוגי, מבטאים את שלפוחית השתן בסוף באופן ידני כדי להימנע overdistention של שלפוחית השתן. - תחזיר החיה לכלוב שלה הביתה.
- לסגור את התוכנית על ידי לחיצה על יציאה.
- לנקות את restrainer ואת הספל.
- סגור את המחברים משולשת על המשאבה ולשקע בעלי חיים.
- כבה את המחשב, היחידה EMG, המערכת באמצעות המפסק הראשי.
הערה: הנתונים נשמרים בתיקיה נפרדת "נתונים רשום" עם קובץ תיקיית משנה של מזהה נמדד עכברוש הקלטות יחיד מסודרים בתיקיות מזהה עכברוש בודד לפי תאריך.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
שרטוט המציג את תהליך המדידות cystometric ער מוצג באיור 1, האנטומיה הפנימית להשתלה צנתר לשלפוחית השתן מוצגת באיור2. הניתוח לוקח בערך 2 ח' נגד כאבים לאחר הניתוח ולכסות אנטיביוטיקה, כפי שמתואר הפרוטוקול, כאבים ודלקות במשך חמישה ימים לאחר הניתוח. אין סימנים של כאב היית שם לב לאחר מכן. פעמיים ביום מעמיקה של הבטן, בתפר הבטן את התפר לצוואר נחוצה לשמור על הבריאות של החיה. שליטה רתמה (מיקום, אטימות) צריך לנהל פעם ביום בחמשת הימים הראשונים ובהמשך באופן קבוע. ניתן להסיר תפרים בבטן 10בתאנון ביום שלאחר הניתוח.
אנו משתמשים במצעים רכים, התפשט עבור 10 הימים הראשונים לאחר הניתוח כדי למנוע דלקת. מצעים השתנה לפחות פעמיים בשבוע כדי לקדם נמוך יותר את הסיכון של דלקת. חיות נשמרים בדיור יחיד, כמו קבוצת הדיור מגביר את הסיכון של כבל הרתמה, קטטר או אלקטרודה נושכת על ידי החברים הכלוב.
צריך אפשרות לרוקן את הצנתר לפחות פעם בשבוע, או במהלך מדידה cystometric או על ידי שטיפה הקטטר באופן ידני עם 1-3 מ"ל של 0.9% סטרילי נתרן כלורי במהירות נמוכה אינפוזיה (איור 3). כיסוי אנטיביוטי רגיל של חיות נוספות מפחיתה את הסיכון של זיהומים בדרכי השתן היווצרות אבן. ניטור ספיגת נוזלים מהווה נקודת מרכזי נוסף כדי למנוע היווצרות אבן בדרכי השתן. חומצה ציטרית בריכוזים נמוכים (2-3%) מנוהל או intravesically דרך הקטטר או השתיה כדי למנוע היווצרות calculi.
שיעור ההצלחה של הליך כירורגי, כמו גם שמירה על שלמות, קטטר לשלפוחית השתן של אלקטרודות היא בסביבות 80%. ב- 20% הנותרים של המקרים, הבעיה העיקרית היתה התנתקות של חוטי החשמל היוצאים התקע אלקטרודה. לפיכך, קובץ מצורף זהיר החוטים אלקטרודה לרתום הוא חיוני כדי למנוע אובדן אלקטרודה.
מדידות Cystometric נעשית בדרך כלל עד שלושה מחזורים רצופים הרקה נרשמים לכל מדידה, אשר לוקח בין 20-40 דקות, תלוי מצב של העכברוש החרדה וטיפול. המדידה cystometric הראשונה נעשית בדרך כלל שבוע לאחר ניתוח ההשתלה קטטר.
פרמטרים עיקריים קרא את ההקלטה cystometric הן הלחץ בסיסית סף הלחץ, detrusor המרבי לחץ, נפח שתוקפן בוטל, זרימה ממוצעת, זמן הרקה, לחץ בינוני, התאימות של שלפוחית השתן, לקרוא בו זמנית מתוך סוגר השופכה חיצוני EMG-פעילות (איור 4).
ניתן לבצע מדידות רצופות cystometric את תקופת מעקב לפחות ארבעה שבועות לאחר הניתוח. אם הקו קטטר קבוע התרוקן, קטטר חסימה אין שום בעיה. טיפול רגיל אופטי שליטה של החולדות צריך להתבצע במהלך תקופת מעקב לגמרי.
אם הצנתר. לפגוע או חסומים, הלחץ intravesical יגדל באופן ליניארי עד בלחצים גבוהים מאוד (מעל 100 ס מ H2O). במקרה זה, מילוי להפסיקו, בקצה הקטטר גלוי צריך להיבדק על kinking. אם אין kinking נתפסת, הקטטר צריך להיבדק בשביל פורקן חסומים. למטרה זו, יכול להיות הקטטר ריקון ידני דרך הקטטר. אם הנוזלים לא זורם בקלות לתוך שלפוחית השתן, מושך אחורה וקדימה בקלילות ניתן לנסות. עבור ניסיון אחרון אחד, פתרון שטיפה חומצי (חומצת לימון 2-3%) יכול לשמש כדי לנסות לנקות את האזור חסמים בתוך הצנתר. פתרון זה שאולי יש לי סיכוי גבוה יותר כדי להמיס את המצור, אך, שלפוחית השתן מגורה לאחר שטיפה מוצלחת, מדידות רצופות רק לבצע יומיים לאחר שטיפה עם פתרון חומצי. אם אין נוזלים ניתן לרוקן לתוך שלפוחית השתן, הצנתר חסום לצמיתות אין מדידות נוספות אפשריות, ואת החיה אובד להמשך טיפול.
איור 1: הסכימטי של המדידות cystometric ער בחולדות. איור זה כבר ממאמרו של2. () איור של ההתקנה אורודינאמיות. (b) תחנת מעבדה לבדיקה אורודינאמיות. (ג) השרשת אלקטרומיוגרפיה סוגר השופכה חיצוני אלקטרודות לרוחב על השופכה, תצוגה פוסט ניתוחית. תצוגה (d) תצוגה של הכיפה שלפוחית השתן ברגע של ההשתלה קטטר לשלפוחית השתן, פוסט ניתוחית. (e) לאחר ההשתלה של אלקטרודות, קטטר, העכברוש להיות מצויד עם רתמה בבטחה לאחסן שקעים ומחברים. (f) סכרת אנושי. המספרים ב- b-e מתייחסים במקרא בתרשימים . אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2: אנטומיה פנימי של העכברוש להשתלה צנתר לשלפוחית השתן. איור זה השתנה מ-8.
איור 3: שטיפה של שורת קטטר עכברוש. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4: אורודינאמיות לשרטוטים בחיה 12 יום לאחר ההשתלה קטטר. () אורודינאמיות נציג עקיבה מעכברוש תמים. על העליונה מוצג העקיבה לחץ בשלפוחית השתן, באמצע העקיבה משקל המופרש בשתן, בתחתית העקיבה סוגר השופכה חיצוני EMG. s (b) של חיה תמימה של 60 בחלון זום, שנלקחו (). הערה חשובה הוא שיש פחות חיצוני סוגר השופכה EMG פעילות במהלך הרקה מאשר לפני ואחרי הרקה. על העליונה מוצג העקיבה לחץ בשלפוחית השתן, באמצע העקיבה משקל המופרש בשתן, בתחתית העקיבה סוגר השופכה חיצוני EMG. בחלק התחתון, מוצג מגרש חום עם הזמן התאימו תדר spectrogram (תואם לתדר בנקודת הזמן הנוכחית). האדום מייצג כוח גבוהה ומייצג כחול צריכת חשמל נמוכה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
פרוטוקול זה מתאר הליך כירורגי של קטטר קבוע ואת השתלת אלקטרודות סוגר השופכה cystometric את ההקלטה טכניקה בחולדות ער, מאופקת בקלילות כולל ניתוח שני בו זמנית שלפוחית השתן, סוגר השופכה חיצוניים.
שלבים קריטיים במהלך הניתוח הם ההשתלה זהיר של הקטטר בשלפוחית השתן, הימנעות זליגת ומניפולציה נרחב. יתר על כן, ההשתלה המדויקת של האלקטרודות הדו-צדדיים שריר הסוגר החיצוני השופכה חיונית יחידת מידה קול שריר הסוגר החיצוני של השופכה. בדיקה מקרוב של השדות כירורגי לאחר ההשתלה היא חיונית לשמירה על הבריאות של החיה. כיסוי אנטיביוטי במהלך מעקב מסייע במניעת דלקות לאורך הקו קטטר, כמו גם המופע של דלקות בדרכי השתן.
במהלך המדידה cystometric, חולדה הטיפול יהיה רגוע ונינוח יותר מאשר חולדה אשר לא טופלה בעבר. לפיכך, ההקלטה cystometric עלולות להיות שונות בתוצאות שלה. יתר על כן, restrainer העכברוש מרחב חונק עם אזור קבלה כהה כדי להרגיש יותר נוח, ומציע לכן, מפחיתה את רמות הלחץ. במדידות אחרים שפורסמו cystometric ער ', חולדות יכולים לנוע בחופשיות בכלוב מדידה. עם זאת, זה נושא סיכון החפץ גבוה יותר במהלך המדידה, עלולה להאריך את הזמן של הקלטה, וכן את רמת הלחץ של החיה. בחולדות בריא, ניתן לשכפל את המדידה cystometric אופטימלית בנקודות זמן מדידה מרובות במהלך מעקב. במהלך המדידה cystometric, בעיות המתרחשות בדרך כלל הן קטטרים. לפגוע או טעות הולכה צעד חכם של הפרוטוקול. אם מתרחשת שגיאת טכני או תוכנה, אתחול מחדש של מדידה cystometric, חוזר stepwise של הפרוטוקול מומלץ מאוד לפתרון.
מגבלות של טכניקה זו הן השתנות ההקלטות cystometric בין בעלי חיים, שינויים מבניים ברקמה שלפוחית השתן עקב הקטטר מושתל, אשר ייתכן ה"בלתי בדיקות ביולוגיות היסטולוגית או מולקולרית של רקמה זו, את דיור אחת החיות במהלך תקופת המעקב. יתר על כן, טכניקה זו נבדק רק בחולדות הנשי, ישימות ותוצאות על חולדות זכרים לא טרם נבדקו.
היתרון העיקרי של שיטה זו הוא מידת בו זמנית על שלפוחית השתן, את שריר הסוגר החיצוני של השופכה, כמו גם ההגדרה מדידה ער. לכן, בדיקה יותר translational בדרכי השתן התחתונה בבעלי חיים ער הינו זמין, לעומת הניתוח cystometric יחיד, מסוף הרדמה5,6,9,10. יתר על כן, עם גישה זו, ההתקדמות של תפקוד לקוי של מערכת השתן התחתונה או פתולוגיה יכול להיות מלווה אותה חיה לאורך זמן, כמו גם טיפול הצלחות. במיוחד, NLUTD שניתן יהיה לבחון מסלול הזמן, דבר שלא היה אפשרי במידה מלאה עם הטכניקה נפוצה cystometric2.
לסיכום, ניתוח הציג ומדידה cystometric משמשים עבור ניתוחים מרובים, החפץ-מופחתת של מערכת השתן התחתונה, כולל את האינטראקציה של שלפוחית השתן והשרירים החיצוניים השופכה אצל חולדות ער.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
המחברים אין כל תודות.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polyethylene tubing PE 50 | Becton Dickinson | 427411 | Catheter |
| Prolene 6-0 (BV-1, 9.3 mm, 3/8c) | Ethicon | EH7403H | Suture |
| Teflon coated steel wire | Cooner wire | AS631 | Electrode material |
| Silver wire 0.250 mm | World Precision Instruments | AGW1030 | Electrode material |
| Rotilabo - PVC tube | Carl Roth | 97241 | Harness |
| Vicryl rapide 4-0 (P-3, 13 mm, 3/8c) | Ethicon | V4940H | Suture |
| Quick Connect Single Harness | SAI Infusion Technologies | QCH-23CW | Harness |
| Shrinking tubes | ChiliTec | 17894 | Electrode soldering |
| Soldering wire Pb60 Sn40 | Stannol | LD0029 | Electrode soldering |
| Fluxing agent 157 | Castolin Eutectin | 157 0150 | Electrode soldering |
| Conn Unshrouded Header HDR 3 POS, 2.54mm Solder ST Thru-Hole Box | Preci-dip | 801-87-050-10-001101 | Electrode soldering |
| Conn Socket Strip SKT 50 POS 2.54mm, Solder ST Thru-Hole Box | Preci-dip | 890-18-003-10-001101 | Electrode soldering |
| Rat Cystometry Package (contains pump, scale, pressure transducer, hardware for cystometric analysis) | Catamount Research and Development Inc. | CAT-CYT-R | |
| Differential amplifier with active headstage | AD instruments | DP-311 | EMG amplifier |
| Restrainer Medium size for rats 200-300 g | emka Technologies | HLD-RM | |
| Uro Dyn Software | Zürich of University | MTA-based | |
| Female rats (Strain Lewis) 12 weeks of age | Charles River, Sulzfeld, Germany | animals |
References
- Andersson, K. E., Soler, R., Fullhase, C. Rodent models for urodynamic investigation. Neurourol Urodyn. 30, 636-646 (2011).
- Schneider, M. P., et al. A novel urodynamic model for lower urinary tract assessment in awake rats. BJU Int. 115, Suppl 6. 8-15 (2015).
- Cruz, C. D., Cruz, F. Spinal cord injury and bladder dysfunction: new ideas about an old problem. Scientific World Journal. 11, 214-234 (2011).
- de Groat, W. C., Yoshimura, N. Plasticity in reflex pathways to the lower urinary tract following spinal cord injury. Exp Neurol. 235, 123-132 (2012).
- Matsuura, S., Downie, J. W. Effect of anesthetics on reflex micturition in the chronic cannula-implanted rat. Neurourol Urodyn. 19, 87-99 (2000).
- Cannon, T. W., Damaser, M. S. Effects of anesthesia on cystometry and leak point pressure of the female rat. Life Sci. 69, 1193-1202 (2001).
- Patra, P. B., Thorneloe, K. S. Enhanced sensitivity to afferent stimulation and impact of overactive bladder therapies in the conscious, spontaneously hypertensive rat. J Pharmacol Exp Ther. 338, 392-399 (2011).
- Herrera, G. M., Meredith, A. L. Diurnal variation in urodynamics of rat. PloS One. 5, e12298 (2010).
- Chang, H. Y., Havton, L. A. Differential effects of urethane and isoflurane on external urethral sphincter electromyography and cystometry in rats. Am J Physiol Renal Physiol. 295, F1248-F1253 (2008).
- Yaksh, T. L., Durant, P. A., Brent, C. R. Micturition in rats: a chronic model for study of bladder function and effect of anesthetics. Am J Physiol. 251, R1177-R1185 (1986).
