Summary
Dieses Protokoll beschreibt einen umgekehrte vertikale Invasion-Assay, der verwendet werden könnten, um die Migration und Invasion Funktionen von Zellen in einer dreidimensionalen Umgebung unter Beibehaltung der Zelle Mikroumgebung zu quantifizieren. Dieser Test eignet sich für seltene und/oder empfindliche Zellen.
Abstract
Obwohl 3D Invasion Assays entwickelt worden sind, bleibt die Herausforderung, um Zellen zu untersuchen, ohne die Integrität ihrer Mikroumgebung. Traditionelle 3D Tests wie der Boyden Kammer erfordern, dass Zellen verdrängt vom ursprünglichen Speicherort, Kultur und zog in eine neue Umgebung. Nicht nur stört dies die zelluläre Prozesse, die untrennbar mit der Mikroumgebung sind, aber es führt oft zu einem Verlust von Zellen. Diese Probleme sind eine besondere Herausforderung im Umgang mit Zellen, die entweder selten oder extrem empfindlich auf ihrer Mikroumgebung. Hier beschreiben wir die Entwicklung eines 3D Invasion-Assays, die beide Probleme vermeidet. In diesem Assay Zellen sind in einem kleinen gut beschichtet und eine ECM-Matrix mit einer Lockstoffgradient auf die Zellen gelegt. Dies erfordert keine Verschiebung der Zelle und ermöglicht es die Zellen, nach oben in die Matrix zu erobern. In diesem Test kann innerhalb der Kollagen-Gel Zellinvasion sowie Zellmorphologie beurteilt werden. Mit Hilfe dieser Assay, kennzeichnen wir die invasive Kapazität der seltene und empfindliche Zellen; die Hybridzellen infolge Fusion von Brustkrebs-Zellen MCF7 und mesenchymalen/multipotenten Zellen Stammzellen/Stroma (MSCs).
Introduction
Zelle Motilität ist ein normaler Entwicklungs- und physiologischen Prozess der Zellen. Allerdings sind Änderungen in der Struktur und die Fähigkeit der Zellen zur Migration und Invasion mit pathologischen Zuständen, einschließlich der entzündlichen Erkrankungen und Krebs Metastasen1,2,3verbunden. Metastasierung ist wohl der am wenigsten verstandenen Aspekt in der Krebstherapie. Um zu metastasieren, müssen Krebszellen zersetzen die extra-zellulären Matrix (ECM), erobern die lokalen Gewebe und Intravasate. Einmal im Umlauf werden die Krebszellen in den entfernten Standort verbreiten, Leber und sekundäre Tumore bilden. Daher die Fähigkeit der Zellen, die ECM zu vermindern, zu migrieren und zu erobern bezieht sich auf ihr metastatische Potential. Verschiedene Ansätze wurden entwickelt, um zu analysieren und die Migration und Invasion Funktionen von Zellen zu quantifizieren. Die am häufigsten verwendeten Ansätze umfassen die Wundheilung Assay, Time-Lapse-Mikroskopie und Boyden Kammer Assay. Die Wunde heilende Assay4 und Zeit verfallen Mikroskopie sind einfache und bequeme Assays, die ersten Einblick in die Zellwanderung geben würde. Jedoch sind beide 2D Assays, die nicht die 3D-Umgebung widerspiegeln, die wie Zellen in Vivoexistieren. Studien haben gezeigt, dass Zellen in einer 3D Umgebung im Vergleich zu einem 2D eine5,6unterschiedlich reagieren. Darüber hinaus sind heilende Wunde Assays schwer zu reproduzieren und zu quantitativen Ergebnissen7,8,9ergeben. Die Zelle Sperrzone Assay, die eine 3D Modifikation der Wundheilung Assay ist, ist ein mehr physiologisch relevanten Assay aber es ist nicht geeignet für niedrige Zahl wie z. B. Hybridzellen aus Zelle Fusion Veranstaltungen10,11 Zellen .
Boyden Kammer Assay ist ein 3-dimensionales Assay, der zelluläre Studien relevanten Mikroumgebungen vorsieht. Es erfordert jedoch Zellen aus ihrer ursprünglichen Mikroumgebung entfernt werden und in der oberen Kammer des Boyden-Testsystem zu migrieren und dringen nach unten in Richtung der Lockstoffgradient enthaltenden Medium hinterlegt werden. Diese 3D Methode eignet sich nicht bei der Analyse der Migration und Invasion Fähigkeit der Zellen, die anfällig für ihre Mikroumgebung und/oder in begrenzter Anzahl10,11,12. Ein neuer Ansatz zur Zelle Migration und Invasion zu analysieren ist der mikrofluidischen gradient Kammer Assay13. Obwohl geeignet und zuverlässig in der Migration und Invasion Studien, dieser Test ist teurer und für ein typisches Labor technisch schwierig sein könnte. Wir beschreiben hier einen einfache umgekehrte vertikale Invasion-Assay, der kompatibel mit vielen Zelltypen, einschließlich der Zellen empfindlich auf ihrer Mikroumgebung und/oder beschränkter Zahl ist. Dieser Test wurde von dem Protokoll vorgeschlagen von Hooper Et al. 14. in diesem Test die Zellen bleiben in ihrer ursprünglichen Mikroumgebung und ihrer Migration und Invasion wird überwacht, da sie nach oben in das Kollagen-Gel mit einem Lockstoffgradient11bewegen. Dieser Assay ist reproduzierbar und optimiert und validiert in der Kulturschale von 35 mm. Es könnte verschiedene Assay-Bedingungen, einschließlich der verschiedenen Zellgrößen Kultur, verschiedenen Matrizen oder Stärke der Adhäsion und verschiedenen Chemoattractants angepasst werden. Dieser Test könnte als in-vitro- Plattform für die erste Sichtung in der Arzneimittelforschung dienen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hinweis: Dieses Protokoll ist im McArdle Et Al. beschrieben. 11. eine Zeitleiste finden Sie in Abbildung 1.
1. Vorbereitung der Kultur-Platte
- Waschen Sie die 35-mm-Kulturschale mit einem 10-mm-Glasboden mit 1 mL 1 M Salzsäure (HCl) für 15 min, Hydrophobie der Glasboden zu senken.
- Waschen Sie die Kultur-Platte zweimal mit 1 mL der Phosphat-Puffer Kochsalzlösung (PBS) get rid of der HCl.
- Waschen Sie die Platte Kultur zweimal mit 1 mL 70 % igem Ethanol.
- Spülen Sie die Kultur-Platte mit 1 mL der spezifischen Zellkulturmedium (hier Gebrauch α-MEM ergänzt mit 10 % Hitze inaktiviert FBS und 1 % nicht-essentiellen Aminosäuren).
Hinweis: Die behandelten Kultur-Platte mit dem Kulturmedium kann erst am nächsten Tag in der CO2 Inkubator mit einem Luftbefeuchter bei 37 ° C gespeichert werden. - Wachsen Sie die Zellen (MSCs und MCF-7 Co Kultur) zu 100 % Konfluenz in den behandelten Glasboden gut von der 35-mm-Kulturschale. Gemeinsam Kultur 35.000 MSC Zellen und 75.000 MCF7 Zellen für 24 h.
2. Vorbereitung der Kollagen-Gel
- Die Mikropipette Tipps für pipettieren die Kollagen-Gel in den Gefrierschrank verwendet, um zu verhindern, dass die Polymerisation des Kollagens bei Kontakt zu speichern.
Hinweis: Dies ist der wichtigste Schritt. - Bestimmen Sie ein Volumen von Ratte Schweif Kollagen ich verwendet werden basierend auf die Konzentration von Kollagen-Lager. Dieser Assay 100 µL Kollagen Gel vorbereiten.
Hinweis: Hoher Konzentration von Ratte Schweif Kollagen, die ich auf Lager funktioniert besser. Bestimmen Sie die Lautstärke von 10 x Dulbeccos geändert Eagle Medium verwendet werden, um das Kollagen entsprechend zu verdünnen. - Kombinieren Sie auf Eis Ratte Schweif Kollagen I (3,8 µg/mL Brühe), 10 X Dulbecco geändert Eagle Medium und 1 X Zellkulturmedium ergänzt um 2 % fötalen Rinderserum und die entsprechenden Lockstoffgradient auf eine Endkonzentration von Kollagen von 2,4 mg/mL.
- Hinzu kommt die Mischung 4,5 % Natriumbikarbonat-Lösung, die Kollagen-Gel zu neutralisieren.
Hinweis: Das Volumen der Natriumbicarbonat-Lösung hinzugefügt variieren basierend auf der genauen pH-Wert der anderen Reagenzien. Es empfiehlt sich, die Mischung mit pH-Streifen, neutrale Lösung zu gewährleisten, oder verwenden Sie einen pH-Indikator in das Kulturmedium zu testen. - Legen Sie über die Zellen innerhalb der Glasboden gut von der Kulturschale 80 µL der Kollagen-Mischung.
- Lassen Sie das Kollagen-Gel zu polymerisieren für 30 min in einem CO2 Inkubator mit einem Luftbefeuchter bei 37 ° C.
- Decken Sie das Kollagen-Gel mit 2 mL Zelle Medium mit reduzierten Serum (2 %) und inkubieren Sie die Zellen bei 37 ° C in einem CO2 Inkubator mit einem Luftbefeuchter für 24, 48 oder 72 h.
Vorsicht: Die Platte sollte mit Sorgfalt zu verhindern, dass das Kollagen-Gel aus der Glasboden behandelt werden.
3. Beispiel der Herstellung von Kollagen gel mit einer Ratte Kollagen Reitstock von 3,8 µg /mL
- Kombinieren Sie auf dem Eis 114,5 µL Ratte Schweif Kollagen, 16,6 µL 10 x DMEM und 33,1 µL Kulturmedium, enthält die Lockstoffgradient.
- Neutralisieren Sie die Kollagen-Mischung mit 14,0 µL Natriumbicarbonat.
- Weiter wie in Schritt 2.5.
4. Bildgebung der Zellen
- Entfernen Sie vorsichtig die Medien aus der Schale.
- Sanft spülen Sie das Gel mit 1 mL PBS.
- Befestigen Sie die Zellen mit 1 mL 4 % Paraformaldehyd für 15 Minuten.
- Waschen Sie die Zellen zweimal mit 1 mL PBS.
- Färben Sie die Zellen mit DAPI-Lösung (100 ng/mL) für 20 min bei Raumtemperatur.
- Bild der Zellen unter Verwendung eines konfokalen Mikroskops an verschiedenen Standorten und 400 µm Z-Stapel Bilder von jedem Standort in 16 µm Schritten. Das Mikroskop verwendet hat eine Festplatte, die Scan-Einheit, die konfokale Bildgebung mit einem weißen Licht, Bogen Anregungsquelle ermöglicht. Verwenden Sie ein 20 X Objektiv mit numerischer Apertur von 0,75 genutzt.
- Bilder zu rekonstruieren.
- Öffnen Sie Bilder für ein bestimmtes Gel (ca. 25 Bilder) und erstellen Sie einem Bildstapel zu, indem Sie auf Bild → Stapel → Bilder stapeln. Das erste Bild entsprach der Unterseite des Gels (Z = 0 µm), das zweite Bild entsprach der erste Schritt in Z-Richtung (Z = 16 µm), das dritte Bild entsprach der zweite Schritt in Z-Richtung (Z = 32 µm). Beurteilen Sie jeder Kern in jedem Bildtiefe zu und benennen Sie die Tiefe, an der die Keimzelle im schärfsten Fokus als die Invasion Tiefe für diese bestimmten Zelle war.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Wir haben eine 35-mm-Kulturschale mit einem Glas unten und Ratte Schweif Kollagen verwendet ich entwickeln und optimieren einer in-vitro- 3D Invasion assay Protokoll. Mit diesem Test, wir haben gezeigt, dass Brust Krebszellen MCF7 und MSC Zellen könnte dringen in das Kollagen-Gel in einer mittleren Entfernung von 0,04 ± 1,8 µm und 41,3 ± 76,0 µm bzw. nach 48 h bei IGF1 (18.6 ng/mL) diente als Lockstoffgradient (Abbildung 2). Noch wichtiger ist, haben wir gezeigt, dass Fusion Produkte von MSC und MCF7-Zellen, die seltene Zellen sind, in das Kollagen Gel sowie eindringen könnte. Ihre durchschnittliche Entfernung der Invasion in 48 h war 10,7 ± 12,4 µm bei IGF ich am 18.6 ng/mL als diente Lockstoffgradient (Abbildung 2). Der Unterschied in der Invasion-Fähigkeit MCF7 und MSCs war statistisch signifikant (P < 0,01)11. Der Unterschied zwischen die Invasion der Fusion-Produkte und eines MCF7 oder MCSs war statistisch nicht signifikant. Dieser Test ergab jedoch konsequent, dass Krebs Zelle Fusion Produkten eine größere Zugvögel und invasivere Fähigkeit als die elterliche Krebszellen MCF7 hatte.
Zellen blieb gesund durch die Experimente dargestellt durch ihre Morphologie und Quantität 48 h Post Gel Polymerisation (Abbildung 3ein). Mit dem invertierten vertikale Invasion Assay-Design, die Kinetik der Zelle Migration und Invasion kann analysiert (Abbildung 3b, 4) und Zellmorphologie kann beurteilt (Abbildung 4).
Abbildung 1 : Chronik des invertierten vertikale Invasion Assay Designs Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 : Invasion Fähigkeit, Krebs Zelle Fusion Produkten. Die Invasion-Kapazität der Krebs Zelle Fusion Produkte konnte mit Hilfe der umgekehrte vertikale Invasion Assay ermittelt werden. Die Zahlen repräsentieren die durchschnittliche Invasion Kapazität von vier unabhängigen Fusion Produkte aus drei separaten Ko-Kulturen und ihre elterliche Zelllinien, die aus acht verschiedenen Bereichen innerhalb jedes Assays analysiert. Dieses Experiment wurde in dreifacher Ausfertigung durchgeführt. ANOVA mit Tukey HSD post-hoc-Test. ** P < 0,01. Fehlerbalken darzustellen Standardabweichung (SD). Diese Zahl wurde von 11angepasst. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3 : Zelle Entwicklungsfähigkeit und Z-Serie des invertierten vertikale Invasion Assays.
(a) 20 X Hellfeld Bilder zeigen die Morphologie der Zellen unter das Kollagen-Gel nach zwei Tagen. Von links nach rechts MCF7 und MSC Kokultur MCF7 und MSC; (b) Darstellung der Z-Serie mit zwei Standorten (i und Ii) in eine Schüssel von unten nach oben. Die nachfolgenden Bilder sind 16 µm auseinander. 3,8 % FBS diente als ein Lockstoffgradient. Grüne Kreise auf beiden Platten zeigen eindringende Zellen; Hinweis aus dem Fokus an der Unterseite des Gels und in die oberste Gel, Eindringen in das Gel im Fokus. Rote Kreise auf beiden Platten zeigen Zellen bleiben auf der unteren Ebene der Z-Serie (nicht eindringenden Zellen). Maßstabsleiste (a): 15 µm; Bar (b) skalieren: 10 µm. Diese Zahl wurde von 11angepasst. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4 : Zelle Morphologie in die umgekehrte vertikale Invasion Assay. Morphologie der MSCs im Kollagen Gel an einem Standort von unten (Z = 0 µm), Z = 20 µm. 3,8 % FBS als ein Lockstoffgradient diente. Der lange Pfeil zeigt die Fettmasse über einen MSC Eindringen in das Gel. Die Pfeilspitze zeigt einen Master of Science, die entlang der Unterseite des Gels ausgerichtet und nicht eindringenden ist. Die blau zeigt den nuklearen DAPI Fleck, während die rote die Actinfilamente Phalloidin gebeizt zeigt. Diese Zahl wurde von 11angepasst. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hier beschreiben wir eine einfache umgekehrte vertikale Invasion-Probe, die eignet sich für eine Vielzahl von Zelltypen, einschließlich der Zellen, die seltene und/oder ihrer Mikroumgebung abhängig sind. In diesem 3D Invasion-Assay Zellen bleiben in ihrer ursprünglichen Mikroumgebung und fallen unter das Kollagen-Gel mit einem Lockstoffgradient. Die Zellen dann migrieren und dringen in das Kollagen. In diesem Test werden die Zellen gefärbt und leicht in das Gel überwacht. Die Einfachheit und Reproduzierbarkeit des Assays macht es ein praktisches Werkzeug für die Erforschung von Krebs Zelle Migration und Invasion in ein 3D System. Allerdings scheinen starke Chemoattractants erforderlich, um die Zelle Affinität am unteren Rand der Kulturschale zu brechen.
Wir optimieren die umgekehrte vertikale Invasion Assay in der Kulturschale von 35 mm. Diese Kulturschale hat ein 10-mm-Glasboden die gut für die Bildgebung ausgestattet ist. Eine Einschränkung dieser Kultur Speise ist die beträchtliche Menge an Kollagen Gel erforderlich, um einen Test durchzuführen. Suche nach kleineren Kultur Gerichte mit einem Design kompatibel mit Bildgebung wäre günstiger. Die Gelschicht für die 35-Millimeter-Teller Entwurf geeignet ist aufgrund seiner Festigkeit sehr empfindlich und kann leicht von der Unterseite der Platte lösen, wenn Sie nicht sorgfältig behandelt. Eine andere Zelle Kultur gestalten könnte die Stabilität der Kollagen-Gel-Schicht, aber die Kompatibilität zwischen den Kollagen Gel Stärke und Zelle Tragfähigkeit optimiert werden sollte.
Trotz dieser Einschränkungen stellt die umgekehrte vertikale Invasion Assay viele Vorteile im Vergleich zu anderen 3D Invasion-Assay-Formaten. Der Hauptvorteil ist, dass Zellen in ihrer ursprünglichen Kultur Umgebung bleiben, was nicht der Fall in der Boyden Kammer Assay ist. Dieses Protokoll bewahrt die Zelle Mikroumgebung, die vorteilhaft für Zellen von ihrer Mikroumgebung wie Stammzellen15streng kontrolliert wird. Dieser Assay verhindert auch Zellschäden oder Zellverlust speziell für Zellen, die empfindlich oder selten10,11. Darüber hinaus konnte mit dieser Assay der Zellmorphologie und die damit verbundenen Kinetik innerhalb des Gels bewertet werden nicht mit der Boyden Kammer-Test möglich ist. Darüber hinaus wird nicht physiologischen Polycarbonat oder Polypropylen Filter von Boyden Kammer-Assay-System nicht in die umgekehrte vertikale Invasion Assay verwendet. Die umgekehrte vertikale Invasion-Assay ist eine statische Auslegung, es nicht imitieren die in Vivo dynamisches Umfeld, das die mikrofluidischen Invasion Assay Design bietet, aber es bietet eine einfachere, weniger anspruchsvolle und kostengünstige 3D-Umgebung zu quantifizieren Migration und Invasion von einer Vielzahl von Zelltypen in einem erhaltenen und kontrollierte Mikroumgebung.
Die umgekehrte vertikale Invasion Assay hat viele Anwendungsmöglichkeiten in pathophysiologischen Studien. Dieser Ansatz könnte als eine in-vitro- Plattform Zelle Motilität zu studieren, während der Embryonalentwicklung, Wunde, Heilung und/oder Entzündungsreaktionen3dienen. Zelle Interaktion mit der ECM und andere Zelltypen während der Migration und Invasion konnten auch untersucht werden, unter Verwendung dieses Protokolls. Dieser Test könnte auch ein nützliches Werkzeug für erste Drogen-Screening von Anti-metastatischen Drogen darstellen. Ein Modellsystem der Organ-spezifischen Krebsmetastasen konnte mit sowie die umgekehrte vertikale Invasion Assay entwickelt werden.
Der umgekehrte vertikale Invasion-Test wurde entwickelt, um die Herausforderung zu umgehen, die die Verschiebung der einige Zellen aus ihrer ursprünglichen Mikroumgebung Boyden Kammer-Assay-System präsentiert. Dieser Test ist einfach, zuverlässig und reproduzierbar; Es ist flexibel und kann verwendet werden, um die invasiven Potenzial einer Vielzahl von Zelltypen, einschließlich sensibler und seltene Zelltypen zu quantifizieren. Dieser Assay kann angewendet werden, um die wandernden Aktivität im Zusammenhang mit Matrix Verschlechterung zu erkennen und lässt auch selektive erniedrigende Aktivitäten auf andere Matrix Substrate zu studieren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Die Autoren haben erklärt, dass keine konkurrierenden Interesse vorhanden ist.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde von der National Institutes of Health (NIMHD-G12MD007581) durch das RCMI-Zentrum für Gesundheit und Umwelt an Jackson State University und das US Department of Defense, Idea Award 11-1-0205 unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MatTek P35G-1.5-10C | MatTek Corporation, Ashland, MA | P35G-1.5-10-C | mattek glass bottom dishes |
| Rat tail collagen I | Corning, Corning, NY, USA | 354236 | Collagen gel |
| Hydrochloric acid | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA | H1758 | HCl |
| Phosphate buffered saline | Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA | 10010023 | PBS |
| 10X Dulbecco's Modified Eagle's Medium | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA | D2429 | 10X DMEM |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA | S5761 | NaHCO3 |
| Confocal Fluorescent microscope | Olympus America, Center Valley, PA, USA | Olympus IX81 | Confocal microscope |
| Defined Fetal Bovine Serum | GE Healthcare Life Sciences HyClone Laboratories, Utah, USA | SH30070.03 | FBS |
| Ti:Sapphire multi-photon laser scanning microscope | Prarie Technologies, Sioux Falls, SD, USA | 40x NA 0.8 objective | MPLSM |
| Imaris software | Bitplane Inc. Zurich, CH | Imaris 7.5.2 | Imaris software |
| DAPI | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA | D9542 | DAPI |
| Paraformaldehyde | Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA | 50980487 | PFA |
| α-minimum essential medium | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA | M0894 | |
| MDA-MB-231 | ATCC; Manassas, VA, USA | HBT-22 | |
| MSC | Trivedi and Hematti, 2007 | ||
| 20X lens UPLAPO | Olympus America, Center Valley, PA, USA | 36-064 | Olympus UPLSAPO 20X Objective |
References
- Friedl, P., Brocker, E. B. The biology of cell locomotion within three-dimensional extracellular matric. Cell Mol Life Sci. 57, 41-64 (2000).
- Bissell, M. J., Rizki, A., Mian, I. S. Tissue architecture: the ultimate regulator of breast epithelial function. Curr Opin Cell Biol. 15, 753-762 (2003).
- Friedl, P., Wolf, K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat Rev Cancer. 3, 362-374 (2003).
- Yarrow, J. C., Perlman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparison of image-based readout methods. BMC Biotechnol. 4, 21 (2004).
- Wolf, K., et al. Compensation mechanism in tumor cell migration: mesenchymal-amoeboid transition after blocking of pericellular proteolysis. J Cell Biol. 160, 267-277 (2003).
- Sahai, E., Marshall, C. J. Differing modes of tumour cell invasion have distinct requirements for Rho/ROCK signalling and extracellular proteolysis. Nat Cell Biol. 5, 711-719 (2003).
- Kam, Y., Guess, C., Estrada, L., Weidow, B., Quaranta, V. A novel circular invasion assay mimics in vivo invasive behavior of cancer cell lines and distinguishes single-cell motility in vitro. BMC Cancer. 8, 198 (2008).
- Staton, C. A., Reed, M. W., Brown, N. J. A critical analysis of current in vitro and in vivo angiogenesis assays. Int J Exp Pathol. 90, 195-221 (2009).
- Poujade, M., et al. Collective migration of an epithelial monolayer in response to a model wound. Proc Natl Acad Sci USA. 104, 15988-15993 (2007).
- Noubissi, F. K., Harkness, T., Alexander, C. M., Ogle, B. M. Apoptosis-induced cancer cell fusion: a mechanism of breast cancer metastasis. FASEB J. 29, 4036-4045 (2015).
- McArdle, T. J., Ogle, B. M., Noubissi, F. K. An In Vitro Inverted Vertical Invasion Assay to Avoid Manipulation of Rare or Sensitive Cell Types. J Cancer. 7, 2333-2340 (2016).
- Noubissi, F. K., Ogle, B. M. Cancer Cell Fusion: Mechanisms Slowly Unravel. Int J Mol Sci. 17, (2016).
- Meyvantsson, I., Beebe, D. J. Cell culture models in microfluidic systems. Annu Rev Anal Chem. 1, 423-449 (2008).
- Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. Tumor cell migration in three dimensions. Methods In Enzymol. 406, 625-643 (2006).
- Yang, C., Tibbitt, M. W., Basta, L., Anseth, K. S. Mechanical memory and dosing influence stem cell fate. Nat Materials. 13, 645-652 (2014).
