Summary
Este artículo presenta protocolos experimentales modificados para el ácido dimethylmonothioarsinic (DMMTAV) y dimethyldithioarsinic (DMDTAV) síntesis, induciendo dimethylarsinic ácido (DMAV) thiolation con la mezcla de DMAV , Na2S y H2por4. El protocolo modificado proporciona una guía experimental, de tal modo superar las limitaciones de las medidas de síntesis que podrían haber causado errores experimentales en análisis cuantitativo.
Abstract
Dimethylated thioarsenicals como el ácido dimethylmonothioarsinic (DMMTAV) y el ácido dimethyldithioarsinic (DMDTAV), que se producen por la vía metabólica de la thiolation de (DMAV) ácido dimethylarsinic, han sido recientemente encontrado en el medio ambiente así como los órganos humanos. DMMTAV y DMDTAV pueden cuantificarse para determinar los efectos ecológicos de dimethylated thioarsenicals y su estabilidad en medios ambientales. El método de síntesis para estos compuestos es concepto, haciendo estudios anteriores difíciles de replicar. Además, hay una falta de información sobre técnicas de almacenamiento, incluyendo el almacenamiento de los compuestos sin transformación de las especies. Por otra parte, porque existe sólo información limitada acerca de los métodos de síntesis, puede haber dificultades experimentales en síntesis de productos químicos estándar y la realización de análisis cuantitativo. El protocolo presentado adjunto proporciona un método de síntesis prácticamente modificado para el thioarsenicals dimethylated, DMMTAV y DMDTAVy ayudará en la cuantificación del análisis de la separación de especies utilizando líquido de alto rendimiento cromatografía en conjunto con plasma acoplado inductivamente espectrometría de masas (HPLC-ICP-MS). Los pasos experimentales de este procedimiento fueron modificados por centrarse en la preparación de reactivos químicos, métodos de filtración y almacenamiento de información.
Introduction
Puesto que el ácido dimethylarsinic (DMAV) se ha demostrado que exhiben toxicidad aguda y genotoxicidad por sufrir metilación y thiolation a la ingestión de1,2, la vía metabólica de arsénico thiolation tiene sido intensamente estudiado tanto in vitro e in vivo3,4 , así como en los medios ambientales (por ejemplo, lixiviados de vertederos)5,6. Estudios anteriores han encontrado tanto reducción y thiolated análogos de DMAV en la vida de las células, por ejemplo, dimethylarsinous ácido (DMAIII), ácido dimethylmonothioarsinic (DMMTAV) y dimethyldithioarsinic (ácido DMDTAV)7,8,9, con dimethylated thioarsenicals como DMMTAV exhibiendo toxicidad mayor que otros conocidos arsenicales orgánicos o inorgánicos10. La abundancia de thioarsenicals altamente tóxico tiene graves consecuencias ambientales, ya que pueden plantear un riesgo para los seres humanos y el medio ambiente bajo condiciones altamente sulfídicos11. Sin embargo, los mecanismos de DMMTAV y DMDTAV (trans) formación y su destino en los medios de comunicación ambiental todavía requieren más estudio. Así, el análisis cuantitativo de thioarsenicals es necesaria para mejorar la comprensión de los efectos ambientales de DMMTAV y DMDTAV.
Aunque los productos químicos estándar son el requisito fundamental para el análisis cuantitativo, los estándares de DMMTAV y DMDTAV son difíciles de obtener mediante la replicación de los estudios anteriores, debido al alto riesgo de transformación de especies en otras especies y procedimientos de síntesis de datos12. Por otra parte, los métodos referenciados tienen limitaciones que pueden llevar a dificultades prácticas para sintetizar los productos químicos estándar y la realización de análisis cuantitativo. DMMTAV y DMDTAV comúnmente se preparan mezclando DMAV, Na2S, H2para4 en un cierto cociente molar1 o burbujeo H2S gas a través de una solución de DMAV 13,14. La sustitución de funciones método burbujas de oxígeno por azufre mediante un suministro directo de gas de H2S, que es altamente tóxico y difícil de controlar para un usuario inexperto. Por el contrario, la anterior mezcla método1, ampliamente utilizado para el análisis cualitativo de DMMTAV y DMDTAV en estudios ambientales5,6,12, cuenta con la thiolation de DMAV con H2S generado por mezcla Na2S y H2para4 y produce DMMTAV y DMDTAV, permitiendo más fácil control estequiométrico producir productos químicos objetivo, como en comparación con el directo uso de H2S gas.
La referencia mezcla método procedimientos1,3,4,8,15 mencionado en este estudio exhiben limitaciones en algunos de sus críticos pasos experimentales, que puedan llevar a error experimental. Por ejemplo, los detalles de la preparación de disolventes específicos (es decir, desionizada agua) y la extracción y cristalización de los arsenicales sintetizados son demasiado abreviados o no descritos con suficiente detalle. Tan dispersa y limitada información sobre las etapas del procedimiento podría dar lugar a la formación incompatible de thioarsenicals y análisis de cuantificación fiable. Por lo tanto, el protocolo modificado desarrollado en el presente documento describe la síntesis de DMMTAV y DMDTAV soluciones con análisis de separación cuantitativa de especies.
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Protocol
1. síntesis de DMMTAV
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Preparación química y relación molar de mezcla de DMAV, Na2S y H2SO4
Nota: DMAV: Na2S:H2por4 = 1:1.6:1.6- Disolver 5,24 g de DMAV en 40 mL desionizada y N2-purgado (purgado por lo menos 30 min) agua en un tubo de centrífuga de 50 mL.
- Preparar el reactivo de Na2S disolviendo 14,41 g de Na2S·9H2O en 50 mL desionizada y N2-purgado en un matraz de 250 mL.
- Preparación H2modo reactivo4 añadiendo 3,3 mL de ácido sulfúrico concentrado (96%) y 40 mL de desionizada y N2-purgado de agua en un tubo de centrífuga de 50 mL.
Nota: Fracción molar Final de DMAV: Na2S:H2SO4 = 1:1.6:1.6 1,3,4,8,15. - Añadir el preparado 40 mL de solución DMAV (paso 1.1.1) a lo 50 mL de Na2S contenida en el frasco de 250 mL (paso 1.1.2). Enjuague el tubo que contiene el DMAV con 10 mL de agua purgada y añadir al matraz de 250 mL.
- Cerrar el matraz con un tapón de caucho de tres orificios que con tubos de vidrio. Utilizar el vidrio de los tubos para entrada de gas de2 N, salida y H2SO4 entrada de solución, respectivamente. Inmediatamente después de cerrar el frasco, permiten el flujo del gas N2 en el matraz.
Nota: La presión de Gas debe mantenerse fluyendo sobre la superficie de la solución de reacción sin salpicar. - Conexión a prueba de ácido tubo el tubo de vidrio de H2SO4 entrada de solución con una jeringa de 50 mL agregar el preparado 40 mL de H2por lo tanto4 solución (paso 1.1.3). Añadir 40 mL de H2hasta4 solución, lentamente y de manera gradual.
PRECAUCIÓN: Al añadir el ácido sulfúrico, se generarán humos blancos; Utilice una campana bien ventilada. - Monitorear el cambio del color de la mezcla en el matraz de reacción al añadir ácido sulfúrico a intervalos regulares. Mantener un intervalo de 4-5 mL gotas de H2hasta4; la mezcla debe tener una solución turbia blanca.
Nota: Puede aparecer precipitación amarillo instantáneo debido a la rápida adición de ácido sulfúrico concentrado. - Garantizar que la solución de reacción ha estado de pie durante 1 hora desde el inicio del paso 1.1.4.
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Extracción deV de DMMTA método de extracción líquido-líquido
- Después de 1 h, verter la solución de reacción en un matraz que contiene unos 200 mL de éter dietílico.
- Agitar el embudo de 5-10 minutos, liberando el gas varias veces cambiando la llave de paso.
Nota: Sintetizada DMMTAV será transferida a la capa superior de éter dietílico (0.713 g·mL-1).
PRECAUCIÓN: Gas de éter dietílico puede ser perjudicial; Utilice una campana bien ventilada. - Recoge la solución de reacción en un vaso de precipitado y recoger por separado el éter dietílico que contiene DMMTAV en una botella. Vuelva a colocar la solución de reacción en el mismo matraz y añadir aproximadamente 200 mL de dulce éter dietílico para reshaking. Repita los pasos 1.2.2 - 1.2.3 tres veces.
- Vierta el éter dietílico recogido de paso 1.2.3 en el mismo embudo separatory otra vez y añadir unos 100 mL N2-purgado de agua desionizada. Agite durante 5-10 min y descartar el N2-purgado de agua desionizada y unos pocos mL de éter dietílico para propósitos de pureza. Recoge el éter dietílico restante en un plato de petri de vidrio (diámetro interno mínimo de 160 mm) y altura mínima de 50 mm.
- Transfiera el plato de petri de vidrio en una caja de guante de atmósfera de N2 para evitar la transformación de las especies.
PRECAUCIÓN: Asegúrese de que el solvente no se tira en la bomba de vacío a través de la salida de la caja de paso. - Seco hasta un precipitado blanco de dimethylmonothioarsinate (cristalizada DMMTAV) se forma en el plato de petri de vidrio.
Nota: El protocolo se puede detener aquí.
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Verificación del almacenamiento y síntesis DMMTAV
- Tomar el precipitado blanco de cristal DMMTAVy mida y registre su peso total.
PRECAUCIÓN: Use una campana bien ventilada o guantera para evitar la inhalación de sulfuro de hidrógeno gas. - Disolver crystalized DMMTAV en 50 mL de N2-purgado de agua desionizada y filtrar el precipitado amarillo a través de un filtro de jeringa de 0,2 μm.
- Asumir que la total a partir del uso DMAV se convierte en DMMTAV, es decir,≈9, 649 mg As· L-1. Diluir la solución madre de DMMTAV a ≈1 mg· L-1 y ≈40 μg· L-1 para el análisis de verificación con ionización por Electrospray masa Spectromtery (ESI-MS) y HPLC-ICP-MS, respectivamente.
- Análisis de m/z de DMMTAV con ESI-MS11,16 y fragmentos en m/z 155 en el modo positivo-ion o en m/z 153 en el modo de iones negativos (tabla 1).
Nota: Ver los valores de referencia de m/z (tabla 1). - Cromatograma de DMMTAV en la solución usando HPLC-ICP-MS11,16,17 con eluyente apropiado condiciones de analizar y confirmar un pico principal se encuentra en el tiempo de retención se describe en el literatura.
Nota: Pureza de sintetizado DMMTAV debe calcularse usando los resultados del análisis del paso 1.3.5. - Analizar la concentración de arsénico total utilizando ICP-MS después de la digestión ácida11 y calcular la concentración verdadera de DMMTAV en sintetizada DMMTAV solución madre con factores de dilución y de la pureza, como en la siguiente ecuación:
Total analizado como concentración (μg· L-1) · Factor de dilución · Pureza (%) = concentración de verdad DMMTAV DMMTAV solución stock (μg· L-1) - Almacene la solución stock DMMTAV a 4 ° C en la oscuridad para mayor especiación cuantitativa análisis18.
- Tomar el precipitado blanco de cristal DMMTAVy mida y registre su peso total.
2. síntesis de DMDTAV
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Preparación química y relación molar de mezcla de DMAV , Na2S y H2SO4
Nota: DMAV: Na2S:H2por4 = 1:7.5:7.5- Disolver 1,38 g de DMAV en 40 mL de agua desionizada en un tubo de centrífuga de 50 mL.
- Para preparar reactivo de Na2S 18,01 g de Na2S·9H2O en una 50 mL de agua desionizada en un matraz de 250 mL de disolución.
- Preparación H2modo reactivo4 añadiendo 4 mL de ácido sulfúrico concentrado (96%) a 40 mL de agua desionizada contenida en un tubo de centrífuga de 50 mL.
Nota: Fracción molar Final de DMAV: Na2S:H2SO4 = 1:7.5:7.51,3,4,8,15. - Añadir el preparado 40 mL de solución DMAV (paso 2.1.1) a lo 50 mL de Na2S contenida en el frasco de 250 mL (paso 2.1.2). Enjuague el tubo que contiene el DMAV con 10 mL de agua desionizada y añadir al matraz de 250 mL.
- Añadir el preparado 40 mL de H2hasta4 solución (paso 2.1.3), lentamente y de manera gradual, en el matraz.
- Monitorear el cambio del color de la mezcla en el matraz de reacción al añadir ácido sulfúrico a intervalos regulares. Mantener un intervalo de 4-5 mL gotas de H2hasta4; la mezcla debe tener una solución turbia, blanco, amarillo.
Nota: Puede aparecer precipitación amarillo instantáneo debido a una rápida adición de ácido sulfúrico concentrado.
PRECAUCIÓN: Al añadir el ácido sulfúrico, se generarán humos blancos; Utilice una campana bien ventilada. - Mantener la solución de reacción en el frasco toda la noche sin cubrir.
Nota: El protocolo se puede detener aquí.
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Extracción deV de DMDTA método de extracción en fase sólida (SPE)
- Después de la reacción durante la noche de pie, filtro de la solución de reacción utilizando una jeringa de C18 tipo SPE basados en sílice para atrapar sintetizado DMDTAV en la resina.
PRECAUCIÓN: Utilice una campana bien ventilada. - Disolver 0,77 g de acetato de amonio en 1 L de agua desionizada para preparar acetato de amonio 10 mM (pH 6.3). Eluir un suficiente volumen de acetato de amonio 10 mM a través de la jeringa de C18 (paso 2.2.1) para extraer el DMDTA adsorbidoV. Recoger el acetato de amonio filtrado en una placa de Petri (diámetro interno mínimo de 160 mm) y altura mínima de 50 mm de vidrio.
- Transfiera el plato de petri de vidrio en una caja de guante de atmósfera de N2 para evitar la transformación de las especies.
PRECAUCIÓN: Asegúrese de solvente no se tira en la bomba de vacío a través de la salida de la caja de paso. - Secar hasta que es un precipitado blanco de dimethyldithioarsinate formado (cristalizada DMDTAV) sobre el plato de petri de vidrio.
Nota: El protocolo se puede detener aquí.
- Después de la reacción durante la noche de pie, filtro de la solución de reacción utilizando una jeringa de C18 tipo SPE basados en sílice para atrapar sintetizado DMDTAV en la resina.
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Verificación del almacenamiento y síntesis DMDTAV
- Tomar el precipitado blanco de cristal DMDTAVy medir su peso total, la medición de la grabación.
PRECAUCIÓN: Use una campana bien ventilada o guantera para evitar la inhalación de sulfuro de hidrógeno gas. - Disolver crystalized DMDTAV en 50 mL de N2-tubo de centrífuga agua desionizada purgado de 50 mL y filtrar cualquier precipitado a través de un filtro de jeringa de 0,2 μm.
- Asumir que el total a partir del uso DMAV se convierte en DMDTAV, es decir,≈2, 539 mg As· L-1. Diluir la solución madre de DMDTAV a ≈1 mg· L-1 y ≈40 μg· L-1 para el análisis de verificación usando ESI-MS y HPLC-ICP-MS, respectivamente.
- Análisis de m/z de DMDTAV con ESI-MS11,16 y fragmentos en m/z 171 en el modo positivo-ion o en m/z 169 en la modalidad de iones negativos (tabla 1).
Nota: Ver los valores de referencia de m/z (tabla 1). - Analizar el cromatograma de DMDTAV en la solución usando HPLC-ICP-MS11,16,17 con eluyente apropiado condiciones y confirmar que un pico se encuentra en el tiempo de retención que se describe en la literatura.
Nota: Pureza de sintetizado DMDTAV debe calcularse usando los resultados del análisis del paso 2.3.5. - Analizar la concentración de arsénico total utilizando ICP-MS después de la digestión ácida11 y calcular la concentración de DMDTAV verdadero en sintetizada solución DMDTAV utilizando factores de dilución y la pureza como la siguiente ecuación:
Total analizado como concentración (μg· L-1) · Factor de dilución · Pureza (%) = concentración de verdad DMDTAV DMDTAV en la solución madre (μg· L-1) - Almacene la solución stock DMDTAV a 4 ° C en la oscuridad para mayor especiación cuantitativa análisis18.
- Tomar el precipitado blanco de cristal DMDTAVy medir su peso total, la medición de la grabación.
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Representative Results
Ya DMMTAV ha sido preparado por error por la DMAIII síntesis método19, verificación de sintetizado DMMTAV y DMDTAV es un paso crítico para la síntesis y extracción y determinar la norma ideal materiales químicos. Productos químicos sintetizados pueden ser verificados por el pico de DMMTAV (154 MW g·mol-1) y relación de masa de la carga DMDTAV (170 MW g·mol-1) (m/z) usando el modo de iones positivos o negativos de masas de ionización por electrospray Espectrómetro (ESI-MS) a través de inyección en tiempo real. Los valores de referencia de m/z se enumeran en la tabla 119. Verificación adicional de la síntesis exitosa de DMMTAV y DMDTAV se llevó a cabo comparando los resultados del análisis de separación de las especies del tiempo de retención (RT) de picos importantes de datos de referencia mediante HPLC-ICP-MS. figura 1 RT similar de cumbres mayores y menores, DMAV y DMMTAV (Figura 1a) o DMDTAV (Figura 1b), con 1,0 mL·min-1 de ácido fórmico de 5 mM como un eluyente y una cromatografía líquida C18 (LC) se muestra columna tal como se describe en el17. Tenga en cuenta que el RT de los picos principales puede variar dependiendo de las condiciones instrumentales y eluyente, y se utiliza la columna LC. Especies incluidas en las soluciones stock de DMMTAV y DMDTAV deben ser examinadas antes de cada análisis, si bien este protocolo sugiere condiciones de almacenamiento de 4 ° c en la oscuridad, que mantiene sintetizada DMMTAV y DMDTA V con, respectivamente, 2,2% y 5.8% transformación durante las 13 semanas de análisis (figura 2).
Figura 1: Cromatograma de HPLC-ICP-MS de la síntesis DMMTAV y DMDTAV. 1: DMAV, 2: DMDTAVy 3: DMMTAV se midieron como picos importantes en 3,8 min y min 5,9 8,0 min en cada uno soluciones de a: DMMTAV y b: DMDTAV, que se correspondían con los reportados por Li et al. en 201017. Las condiciones instrumentales de ICP-MS fueron 1550 V potencia y volumen de inyección de 50 μl. Se utilizó una columna de C18 con 5 mM de ácido fórmico como un eluyente17. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: Estabilidad de DMMTAV y DMDTAV a 4 ° c en la oscuridad. Porcentaje cambios de distribución de las especies en cada una de las soluciones stock DMMTAV (a) y DMDTAV (b) durante 13 semanas. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
| Solución sintetizada | modo de ion | Fragmentos de | m/z | Referencias |
| DMMTAV | Positiva | [Me2As (SH) OH] + | 155 | 13,14,19,17,21,24 |
| [Me2As (OH) 2] + | 139 | 19,17 | ||
| [Me2AsS] + | 137 | 13,19,17,24 | ||
| [Me2As SAsMe2 (S)] + | 275 | 13 | ||
| Negativo | [Me2AsOS]- | 153 | 17,5,23 | |
| [MeAsSO]- | 138 | 17.5 | ||
| [AsSO]- | 123 | 17.5 | ||
| DMDTAV | Positiva | [Me2As (SH) 2] + | 171 | 19,17 |
| [Me2As (SH) OH] + | 155 | 19 | ||
| [Me2AsS] + | 137 | 19,17 | ||
| Negativo | [Me2AsS2]- | 169 | 20,17,5,22 | |
| [MeAsS2]- | 154 | 20,17,5 | ||
| [AsS2]- | 139 | 17,5,22 |
Tabla 1: Sugerido estructura sintetizada DMMTAV y DMDTAVy los iones fragmento menor por modo de iones positivos o negativos de ESI-MS. El lista de DMMTAV, DMDTAVy fragmentos menores m/z medido por ESI-MS se reprodujo de literatura5,13,14,17,19 ,20,21,22,23,24. Tenga en cuenta que picos de m/z pueden variar con las condiciones instrumentales o matrices de las soluciones stock.
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Discussion
El protocolo desarrollado ha aclarado los pasos críticos que anteriores estudios1,3,4,8,15 omitido o abreviado, que pudo haber llevado a dificultades o el fracaso durante la DMMTAV y DMDTAV síntesis. DMMTAV es sensible a la oxidación1,5, reactivos químicos para su síntesis se prepararon con N2-purgado de agua desionizada (pasos 1.1.1 - 1.1.3) para evitar el posible retraso de DMAV thiolation y la oxidación de DMMTAV. DMMTAV preparado mediante este protocolo tenía una pureza de 92%. La referencia del método de extracción DMDTAV aparece basados en sílice C18 columna extracción con solución de buffer de acetato o fosfato de amonio como un eluyente,3,4,7,8 con la pureza de la DMDTAV así preparados varían dependiendo de los compartimientos de columna utilizados, que se describe en referencias estudios3,4,8. Por el contrario, permite el uso de desechable SPE en el protocolo desarrollado (paso 2.2.1) la extracción del 88% puro DMDTAV. Además, los métodos anteriores de cristalización DMDTAV hace referencia a sólo una liofilización procedimiento20, mientras que en el presente Protocolo, simple secado de la solución extraída de DMDTAV en una atmósfera de N2 en el interior del guante caja (paso 2.2.3) produce un residuo blanco de dimethyldithioarsinate cristalizada.
Verificación de la identidad de la síntesis DMMTAV y DMDTAV es un paso crítico para la determinación química estándar ideal. En nuestro anterior trabajo16 basado en este protocolo, grandes fragmentos en m/z 155 en el modo positivo-ion y m/z 169 en la modalidad de iones negativos fueron detectados por análisis de ESI-MS de sintetizado como DMMTAV y DMDTAV, respectivamente. El segundo fragmento fue atribuido a [CH3]2AsS(=S) S]– (es decir, [M-H]–), en acuerdo con los anteriores resultados5,17,20,22 , mientras que el fragmento de m/z 155 fue asignado a [CH3]2As(=S)(OH) + H]+ (es decir, [M + H]+), una vez más, de acuerdo con referencias13,14, 17,19,21,24. Desde análisis de ESI-MS no puede utilizarse como método de verificación única, grandes picos en los cromatogramas de DMMTAV y DMDTAV soluciones obtenidas por HPLC-ICP-MS se compararon con los reportados por Li et al. 17 (figura 1). Aunque DMAIII es conocido como intermediario en la etapa inicial de DMMTAV formación1,7,8,25, presenta baja estabilidad, desapareciendo dentro de 70 min19 y por lo tanto no es detectable por este procedimiento (figura 1).
Otro objetivo de este estudio fue sugerir las condiciones de almacenamiento para DMMTAV y DMDTAV soluciones con menos impurezas para evitar la conversión de óxido de sulfuro y así lograr una mayor estabilidad18. Las condiciones de almacenamiento que se utiliza aquí (es decir, 4 ° c en la oscuridad) permitieron la preservación de la síntesis DMMTAV y DMDTAV como especie principal en soluciones (figura 2) durante cuatro semanas, con la no descomposición drástica observada incluso después de 13 semanas. Aunque el pH del solvente (es decir, que de agua desionizada) puede afectar a la transformación de las especies durante el almacenamiento debido a la presencia de especies de exceso de sulfuro procedentes de reactivos químicos como capítulo– o H2 y nativa10 S, las soluciones stock mantienen pH neutro sin transformación significativa de las especies contenidas en ella (figura 2). Por lo tanto, soluciones podrían ser almacenadas a 4 ° c en la oscuridad durante 13 semanas antes del análisis cuantitativo de la especiación.
En este estudio, el relación molar mezcla método de referencia para sintetizar DMMTAV y DMDTAV 1,3,4,8,15 se modificó para producir estable DMMTAV y DMDTAV soluciones para el análisis cuantitativo de HPLC-ICP-MS. Debido a la falta de detalles de paso crítico, incluyendo no sólo preparación de reactivos químicos, extracción y pasos de cristalización, sino también las condiciones de almacenamiento de DMMTAV y DMDTAV, soluciones madre tuvieron que ser modificado y optimizado. Por lo tanto, soluciones preparadas usando este protocolo son suficientemente aplicables para el análisis cuantitativo de DMMTAV y DMDTAV para fines de monitoreo ambientales.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Esta investigación fue apoyada por el programa de investigación ciencia básica (proyecto número: 2016R1A2B4013467) a través de la nacional investigación Fundación de Corea (NRF) financiado por el Ministerio de ciencia, TIC y futuro planificación 2016 y también apoyado por la ciencia básica de Corea Programa de investigación del Instituto (proyecto número: C36707).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cacodylic acid | Sigma-Aldrich | 20835-10G-F | |
| Sodium sulfide nonahydrate | Sigma-Aldrich | S2006-500G | |
| Sulfuric acid 96% | J.T.Baker | 0000011478 | |
| Ammonium acetate | Sigma-Aldrich | A7262-500G | |
| Formic acid 98% | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 066-00461 | |
| Diethyl ether (Extra Pure) | Junsei Chemical | 33475-0380 | |
| Adapter cap for 60 mL Bond Elut catridges | Agilent Technologies | 12131004 | Syringe type of SPE |
| Bond Elut C18 cartridge | Agilent Technologies | 14256031 | Syringe type of SPE |
| HyPURITY C-18 | Thermo Scientific | 22105-254630 | 5 um, 125 x 4.6 mm |
| Glovebox | Chungae-chun, Rep. of Korea | Customized | |
| Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC | Agilent Technologies | DEAB600252, DEACH00245 | |
| Agilent Technologies 7700 Series ICP-MS | Agilent Technologies | JP12031510 | |
| Finnigan LCQ Deca XP MAX Mass Spectrometer System | Thermo Electron Corporation | LDM10627 |
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