Combinar el análisis cuantitativo de la toma de comida y por la fuerza activando las neuronas para estudiar apetito en Drosophila

Resumen

Ensayos cuantitativos de consumo de alimentos con alimentos teñido proporcionan un robusto y alto rendimiento significa evaluar motivación alimentación. Combinando el análisis de consumo de alimentos con thermogenetic y optogenetic pantallas es un poderoso enfoque para investigar los circuitos neurales subyacentes apetito en adulto melanogaster del Drosophila.

Resumen

Consumo de alimentos está bajo el estricto control del cerebro, que integra el estado fisiológico, palatabilidad y contenido nutricional de los alimentos y cuestiones comandos para iniciar o detener la alimentación. Descifrar los procesos que subyacen a la toma de decisiones oportuna y moderada alimentación tiene importantes implicaciones en nuestra comprensión de Trastornos fisiológicos y psicológicos relacionados con la alimentación de control. Métodos simples, cuantitativos y robustos se requiere medir la ingestión de alimentos de los animales después de la manipulación experimental, como el aumento por la fuerza de las actividades de ciertas neuronas de destino. Aquí, presentamos tinte etiquetado basado en ensayos de alimentación para facilitar el estudio neurogenetic del control de la alimentación en adultos moscas de la fruta. Revisión de ensayos de alimentación disponibles y luego describir nuestros métodos paso a paso de configuración de análisis, que combinan thermogenetic y manipulación de optogenetic de neuronas control alimentación motivación con ensayo de ingesta de alimentos etiquetados de tinte. También discutimos las ventajas y limitaciones de nuestros métodos, en comparación con otros ensayos de alimentación, para ayudar a los lectores a elegir un ensayo apropiado.

Introducción

Cuantificar la cantidad de alimento ingerido es importante para la evaluación de múltiples aspectos de la alimentación de los controles por el cerebro en respuesta a las necesidades internas (por ejemplo, Estados de hambre) y factores externos (como la palatabilidad y calidad de los alimentos)^{1, 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9}. en los últimos años, los esfuerzos de descif....

Protocolo

1. preparación de la cámara de alimentación

Nota: La cámara de alimentación de tinte etiquetado alimentación análisis consta de dos partes: el contenedor exterior (como una cubierta) y el interior contenedor (como fuente de alimento).

1. Modificar el envase exterior de un frasco de vidrio para el cultivo de Drosophila con (un diámetro interno de 31,8 mm) y una altura de 80 mm (figura 1A, 1C). Cubierta la parte inferior del recipiente con una capa de agarosa al 1% (5 mL) para mantener la configuración de alimentación adecuadamente humidificado y servir como un su....

Resultados

Pantalla thermogenetic.

Apetito anormalmente creciente provoca ingesta elevada, independientemente de las necesidades fisiológicas. Se utilizó este esquema para el diseño de un alto rendimiento conductual pantalla obtener mangos genéticas de las neuronas relacionadas con el hambre y saciado de Estados (figura 1). La pantalla rindió Taotie-Gal4²⁴. Cuando las neuronas .......

Discusión

Este informe se centra en el proceso técnico de ensayos de alimentación tinte etiquetado de consumo de alimentos en el contexto de thermogenetic y activación de optogenetic manipular neuronas control de alimentación. Este Protocolo simple y confiable ayudará a dilucidar la función de las neuronas de candidato en la alimentación de control, para medir la preferencia de alimentos de las moscas y para identificar nuevos actores en los circuitos de control alimentación vía pantallas genéticas basadas en la alimentación de

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
UAS-CsChrimson	Bloomintoon	55135
UAS-dTrpA1	Bloomintoon	26263
TDC1-GAL4	Bloomintoon	9312
TDC2-GAL4	Bloomintoon	9313
sNPF-GAL4			proporcionado por Z. Zhao
NPF-GAL4			proporcionado por Y. Rao
TH-GAL4			proporcionado por Y. Rao
5-HT-GAL4			proporcionado por Y. Rao
AKH-GAL4			proporcionado por Y. Rao
dip2-GAL4			Proporcionado por Y. Rao
Taotie-GAL4			Proporcionado por J. Carlson
Agarose		Biowest G-10
Sacarosa	Sigma	S7903
Erioglaucina sal disódica	Sigma 861146
all-trans-retinal	Sigma	R2500	almacenado en la oscuridad
Triton X-100	Amresco	9002-93-01
Alimento		moscas 1 L alimento contiene: 77,7 g de harina de maíz, 32,19 g de levadura, 5 g de agar, 0,726 g de CaCl2, 31,62 g de sacarosa, 63,2 g de glucosa, 2 g de sorbato de potasio, pH
1x búfer PBS		1 L 1X PBS contiene: 8 g de Nacl, 0,2 g de Kcl, 1,44 g de Na2HPO4, 0,24 g de KH2PO4, pH 7,4
PBST Tampón		1X PBS con 1% Triton X-100
Molino de molienda	Shang Hai Jing Xin	Incubadora Tissuelyser-24
Ning	Bo Jiang Nan	HWS-80
Agitador magnético con placa térmica	Chang Zhou Bo Yuan	CJJ 78-1
Espectrómetro	Thorlabs	CCS200/M
Microplaca Espectrofotómetro	Thermo Scientific	Multiskan GO Tipo: 1510, REF 51119200
Microscopio estereoscópico de fluorescencia	Leica	M205FA
Microscopio estereoscópico	Leica	S6E
Contenedor exterior	Frasco de vidrio Jiang Su Hai Men	con un diámetro de 31,8 mm y una altura de 80 mm (dimensión interior)
Contenedor interior	la fábrica de maquinaria Beijing Yi Ran	con un diámetro de 13,6 mm y una altura de 7,5 mm (dimensión interior)
1,5 mL Tubos Eppendorf	Hai Men Ning Mong
placa de 96 pocillos	Corning Incorporated	Costar 3599
LEDs	Xin Xing Yuan Guangdian	607 nm, 3W	https://item.taobao.com/item.htm?id=20158878058

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