大动物模型肝组织血浆凝固的评价

Summary

在这里, 我们提出了一个实验性的评估血浆凝固在体内的肝脏组织的协议。在猪模型中, 通过激光多普勒检查微循环, 用红外测温仪和红外相机对凝血深度进行组织学测量, 凝血部位温度, 并通过爆裂压力记录管道密封效果。实验。

Abstract

血浆凝固作为一种烙的形式, 用于肝脏手术数十年, 以封闭大肝切除术后, 主要切除后, 以防止出血的后期阶段。血浆凝固对肝脏组织的确切的作用只被检查的很少。在我们的猪模型中, 凝血作用可以接近临床应用。联合激光多普勒流量计和分光光度计文件在8毫米组织深度无创性凝血过程中微循环的变化, 提供了超出主观临床印象的可量化的止血信息。在凝固过程中, 用红外线温度计对凝血部位的温度进行评估, 在凝固期间用红外相机测量气体束温度, 因为器件的上阈值是不可能的。用目标测微仪标定后的苏木精/红/红染色切片, 对凝固深度进行了显微测量, 并给出了功率设定-凝固深度关系的准确信息。在胆管上检查密封效果, 因为血浆凝固无法封堵较大的血管。对说明器官进行了爆裂压力实验, 排除了血压的相关影响。

Introduction

氩离子凝固 (APC) 是腹部手术中广泛使用的仪器, 三年来^1、2。通过封堵肝切口表面, 防止术后出血³, 是大鼠肝切除术后继发止血的标准技术。等离子凝固是射频烙的一种特殊形式, 通过电离气体电弧传递电能。提供单电热止血, 这种非接触技术具有防止电极黏附在组织⁴的优势。电离气体光束被自动定向到最低电阻的区域, 当电阻上升时, 由于干燥到其他尚未干燥的区域, 就会被转走。这产生一个统一的有限深度的凝固^5,6。影响凝血效果的因素有活化时间、凝固装置的功率设置以及探针与组织的距离。氦是另一种载体气体, 可用于等离子凝固⁷。最近的临床研究集中在临床结果, 而不是组织学和功能发现^3,8,9, 而实验研究集中在体外调查¹⁰或实验在分离的被灌注的器官¹¹。

Protocol

遵循德国法律的动物研究法规以及实验动物保育原则 (国立卫生研究院出版版 8, 2011)。官方许可来自政府动物护理办公室 (Landesamt Natur, Umwelt 和 Verbraucherschutz Nordrhein, Westfalen, 德国)。

1. 动物

1. 使用雌性德国长白猪 (重25-30 公斤) 存放在开放的笼子里。
2. 每组使用5只动物 (氩和氦)。
3. 允许动物在实验前至少一周适应环境。快速动物为 24 h 在手术之前以自由地获得水。

2. 麻醉

1. Premedicate 的动物肌肉注射氯胺酮 (15 毫克/千克体重 [体重]), 甲苯噻嗪 (10 毫克/千克体重), 和阿托品 (0.1 毫克/千克体重) 10 分钟前诱导麻醉。
2. 通过将22口径套管放置到耳静脉中, 可建立外周静脉通路。
3. 静脉注射丙泊酚2毫克/千克体重诱发全麻。
4. 将动物置于仰卧位, 在颈静脉沟内进行纵向皮肤切口, 长度为2厘米. 通过钝性的皮下组织的制备找到静脉。插入套管, 然后 Seldinger 导线。
5. 缩回套管并插入14法郎导管在导丝上。退刀导丝。将导管连接到延伸处, 用皮带或缝合固定导管。
6. 拔掉舌头, 插入直喉镜。使用喉镜的尖端拉下会厌。用声....

Results

微循环:通过对血浆凝固后止血的诊断装置, 可以通过微循环的改变来证明。毛细管血流 (显示为任意单位 (AU)) 从基线值减少 142.7, 76.08 au 到 57.78, 49.57 au 在 25 w 设备输出功率, 48.5 @ 7.26 au 在 50 w 和 5.04 @ 1.31 au 在 100 w (图 4)。

温度:用红外相机测量凝固部位的温度 (图 5)。唯一无意义的温度变化是用红外线温度计记录下来的。它显示的基线温度为 32.42, 2.27 ° C。25 W 凝固后, 温度为 33.33 1.81 摄氏度。凝固与 50 W 激光产生的温度为 31.17, 2.13 ° C。凝固后, 最大功率设置为 100 W, 温度主要不变, 30.17 3.......

Discussion

肝脏手术的啮齿动物模型建立了很长时间¹⁶。然而, 大型动物模型提供了一定的优势: 不需要显微外科设备作为人体标准手术设备, 手术技术可与临床使用相媲美, 标准的临床评价方法可以转移到实验。例如, 标准的临床血液测试可以进行, 而不需要特殊的实验室测试方法 (图 10)。

猪是适当的实验动物为心肺研究作为他们的生理相似人¹⁷。猪是实验性肝外科的标准实验动物之一, 由于其大小、节段结构和组织学的相似性,¹⁸。在猪模型中, 由于对人体生理的相似性和标准临床设备的评价, 对血浆凝固进行了评估⁷。与外科技术相比, anesthesiologic 管理不能轻易地推断出来。特别是气道管理可能是困难的¹⁷。从门牙到声门的距离是很长的, 解剖是不同的人使气管插管困难的没有经验的研究员。此外, 在猪体内, .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
甲苯噻嗪 20 mg/mL	Vetoquinol GmbH	Xylapan
氯胺酮 100 mg/mL	Ceva GmbH	Ceva 氯胺酮注射液
阿托品 100 mg / 10 mL	Franz Kö 博士;hler Chemie GmbH	Atropinsulfat Köhler 100 毫克安培。
异丙酚	Fresenius Kabi GmbH	异丙酚 1% MCT Fresenius
Fentanyl	KG Rotexmedica GmbH	芬太尼 0.5mg Rotexmedica
异氟烷	Abbot GmbH	Forene 100% （V/V） 250 mL
乳酸林格氏液	Baxter Deutschland GmbH		钠 131 mmol/l，钾 5 mmol/l，钙 2 mmol/l，氯化物 111 mmol/l，乳酸 29 mmol/l
手术 disinfactant	SchüLKE 和Mayr GmbH	Kodan Tinktur forte gefärbt 1l 104804
电动显微镜	尼康仪器 欧洲	Eclipse TE2000-E
显微镜相机	尼康仪器 欧洲	Digitalsight DS-Qi1Mc
成像软件	尼康仪器 欧洲	NIS 元件 Vers. 4.40
等离子体凝固器	Söring GmbH	CPC-1000
氩气	Linde AG	Argon 4.8
氦气	Linde AG	氦气 4.8
O2C	LEA Medizintechnik GmbH	O2C Version 1212	带LF-2或LF-3探头
红外测温	Voltcraft	VOLTCRAFT IR 260-8S
热像仪	InfraTec GmbH	VarioCAM HD head 820
热像分析软件	InfraTec GmbH	IRBIS 3
Mayer's 苏木精溶液		Merck 1.09249
曙红溶液	VWR International GmbH	Merck 1.09844
滚轮泵 Masterflex L/S 易负载	Cole-Parmer 仪器公司	型号 7518-10
Perfusorpump	B. Braun Melsungen AG	Perfusor secura FT
数字压力计	Greisinger电子	GMH 3161
灌注注射器，50 mL	B. Braun Melsungen AG	REF 8728810 F
灌注器管路，IV 型标准，PVC 鲁尔锁	B. Braun Melsungen AG	REF 8722960
三通旋塞阀，Dicofix C35C	B. Braun Melsungen AG	REF 16494 C
丝绸 2-0。3 公制	Resorba	REF H5F
薇乔线 4-0 Sutupak	Ethicon	V1224H
NaCl 0.9 %	B. Braun Melsungen AG