大型动物模型中肝脏组织上血浆凝固性的评估 体内

摘要

本文介绍一种用于实验性评估肝组织中血浆凝固的方案 体内在猪模型中，采用激光多普勒法检测微循环，通过组织学方法测量凝固深度，使用红外测温仪和热成像相机测定凝固部位温度，并通过爆破压力实验记录导管封合效果。

摘要

等离子凝固作为一种电灼术，数十年来在肝脏手术中用于封闭大范围肝切除术后较大的肝切面，以预防后期出血。然而，等离子凝固对肝组织的确切作用尚缺乏充分研究。在我们的猪模型中，可接近临床应用条件来观察凝固效应。采用联合激光多普勒血流仪与分光光度计，可在8 mm组织深度无创地记录凝固过程中微循环的变化，从而提供关于止血效果的量化信息，超越主观临床判断。在凝固前后使用红外测温仪测定凝固部位温度，并在凝固过程中使用热成像相机进行监测；由于设备上限限制，无法测量气体束流的温度。凝固深度通过组织切片经苏木精/伊红染色后，在显微镜下利用物镜测微尺校准后进行测量，从而精确反映功率设置与凝固深度之间的关系。由于等离子凝固设备无法封闭较大的血管，因此密封效果主要在胆管上进行评估。通过离体器官进行爆破压力实验，以排除血压相关因素的影响。

引言

氩离子凝固术（APC）是一种在腹部外科手术中已广泛应用三十多年的器械^1,2它是通过封闭肝脏切面以防止术后出血，从而在大范围肝切除术后实现继发性止血的标准技术。³等离子凝固是一种特殊形式的射频电凝，通过电离气体形成的电弧传递电能。作为一种非接触式技术，它可提供单极电热止血，其优势在于可防止电极与组织粘连。⁴电离气体束会自动导向电阻最低的区域，当因干燥导致电阻升高时，气束便会转向其他尚未干燥的区域。这可产生均匀且有限的凝固深度。^5,6影响凝血效果的因素包括激活时间、凝血设备的功率设置以及探头与组织之间的距离。氦气是另一种可用于等离子凝血的载气。⁷近期的临床研究主要关注临床结果，而非组织学和功能学发现^3,8,9，而实验研究则侧重于 体外 研究¹⁰ 或离体灌注器官实验¹¹

方案

动物实验遵循德国相关法律法规以及《实验动物护理原则》（美国国立卫生研究院出版物第8版，2011年）。已获得德国北莱茵-威斯特法伦州自然保护、环境与消费者保护局（Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, Recklinghausen, Germany）的官方许可。

1. 动物

1. 使用饲养在开放式笼具中的雌性德国陆地品种猪（体重 25–30 kg）。
2. 每组使用 5 只动物（氩气组和氦气组）。
3. 实验前至少让动物适应环境一周。术前禁食 24 小时，但可自由饮水。

2. 麻醉

1. 在诱导麻醉前10分钟，通过肌肉注射给予动物氯胺酮（15 mg/kg体重[BW]）、赛拉嗪（10 mg/kg BW）和阿托品（0.1 mg/kg BW）进行预处理。
2. 通过将22号套管插入耳缘静脉建立外周静脉通路。
3. 通过静脉注射2 mg/kg体重的丙泊酚诱导全身麻醉。
4. 将动物置于仰卧位，在颈静脉沟处做一条长约2 cm的纵向皮肤切口。通过钝性分离皮下组织暴露静脉，插入套管，随后插入Seldinger导丝。
5. 撤出套管，沿导丝置入14 Fr导管，随后撤出导丝。将导管连接至延长管，并用绑带或缝线....

结果

微循环：通过微循环变化可展示该止血诊断设备在血浆凝固后的应用效果。毛细血管血流（以任意单位（AU）表示）从基线值 142.7 ± 76.08 AU 下降至设备输出功率为 25 W 时的 57.78 ± 49.57 AU，进一步降至 50 W 时的 48.5 ± 7.26 AU，并在 100 W 时降至 5.04 ± 1.31 AU（图 4）。

温度：凝固部位的温度使用热成像相机进行测量（图5）。仅使用红外测温仪记录到微小的温度变化。红外测温仪显示基础温度为 32.42 ± 2.27 °C。使用 25 W 功率凝固后，温度为 33.33 ± 1.81 °C。使用 50 W 激光进行凝固时，温度为 31.17 ± 2.13 °C。在使用最大功率 100 W 进行凝固后，温.......

讨论

肝脏手术的啮齿类动物模型已建立很长时间¹⁶。然而，大型动物模型具有某些优势：可直接使用人类的标准手术器械，无需显微外科设备；手术技术与临床应用相似；标准的临床评估方法也可直接应用于实验。例如，可直接开展常规的临床血液检测，无需特殊的实验室检测方法（图10）。

猪是心肺研究的合适实验动物，因为其生理特征与人类非常相似¹⁷。由于在体型、肝段结构和组织学方面与人类相似，猪也是实验性肝外科研究的标准实验动物之一¹⁸。选择猪模型评估血浆凝血功能，是因为该模型具有多种优势（与人类生理相似，且可评估标准临床设备）⁷。与外科技术不同，麻醉管理难以直接类推应用。尤其是气道管理可能较为困难¹⁷。猪从门齿到声门的距离较长，且其解剖结构与人类不同，使得经验不足的研究人员进行经口插管操作较为困难。此外，面罩通气在.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
赛拉嗪 20 mg/mL	Vetoquinol GmbH	Xylapan
氯胺酮 100 mg/mL	Ceva GmbH	Ceva Ketamine Injection
阿托品 100 mg / 10 mL	Dr. Franz Köhler Chemie GmbH	Atropinsulfat Köhler 100mg Amp.
丙泊酚	Fresenius Kabi GmbH	Propofol 1% MCT Fresenius
芬太尼	KG Rotexmedica GmbH	Fentanyl 0,5mg Rotexmedica
异氟烷	Abbot GmbH	Forene 100% (V/V) 250 mL
乳酸林格氏液	Baxter Deutschland GmbH		钠 131 mmol/L，钾 5 mmol/L，钙 2 mmol/L，氯 111 mmol/L，乳酸 29 mmol/L
外科消毒剂	Schülke & Mayr GmbH	Kodan Tinktur forte gefärbt 1l 104804
电动显微镜	Nikon Instruments Europe	Eclipse TE2000-E
显微镜相机	Nikon Instruments Europe	Digitalsight DS-Qi1Mc
成像软件	Nikon Instruments Europe	NIS elements Vers. 4.40
等离子凝固器	Söring GmbH	CPC-1000
氩气	Linde AG	Argon 4.8
氦气	Linde AG	Helium 4.8
O2C	LEA Medizintechnik GmbH	O2C Version 1212	配备 LF-2 或 LF-3 探头
红外测温仪	Voltcraft	VOLTCRAFT IR 260-8S
热成像相机	InfraTec GmbH	VarioCAM HD head 820
热成像分析软件	InfraTec GmbH	IRBIS 3
迈耶苏木精溶液		Merck 1.09249
伊红溶液	VWR International GmbH	Merck 1.09844
Masterflex L/S 易装型蠕动泵	Cole-Parmer Instrument Company	型号 7518-10
输注泵	B. Braun Melsungen AG	Perfusor secura FT
数字压力计	Greisinger electronic	GMH 3161
50 mL 输注泵注射器	B. Braun Melsungen AG	货号 8728810 F
输注管路，IV 型标准，PVC 鲁尔锁	B. Braun Melsungen AG	货号 8722960
三通旋塞阀，Dicofix C35C	B. Braun Melsungen AG	货号 16494 C
丝线 2-0，3 公制	Resorba	货号 H5F
Vicryl 4-0 缝合包	Ethicon	V1224H
0.9% 氯化钠溶液	B. Braun Melsungen AG