Qui, presentiamo un protocollo per la preparazione e la somministrazione stereotassica di linfociti umani allogenici in topi immunodeficienti portatori di tumori cerebrali primari umano ortotopico. Questo studio fornisce un proof-of-concept per sia la fattibilità e l'efficacia antitumorale di immunoterapie cellulari intrabrain-consegnato.
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Articolo metodologico
Trasferimento adottivo stereotactic di citotossici cellule immunitarie nei modelli murini di xenotrapianti Multiforme di Glioblastoma umano ortotopico
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Multiforme di glioblastoma (GBM), il cancro primario del cervello più frequenti e più aggressivo negli adulti, è generalmente associato con una prognosi difficile, e sono state proposte terapie efficienti scarse nell'ultimo decennio. Tra i candidati promettenti per la progettazione di nuove strategie terapeutiche, immunoterapie cellulari sono stati designati per eliminare altamente invasive e chemio-radioresistenti cellule del tumore, probabilmente coinvolti in una ricaduta rapida e mortale di questo cancro. Così, somministrazioni di trapianto allogeneic GBM-reattiva effettori delle cellule immuni quali linfociti T Vϒ9Vδ2 umani, in prossimità del tumore sarebbe rappresenta un'opportunità unica per fornire efficiente e altamente concentrato agenti terapeutici direttamente nella sito di tumori maligni del cervello. Qui, presentiamo un protocollo per la preparazione e la somministrazione stereotassica di linfociti umani allogenici in topi immunodeficienti portatori di tumori cerebrali primari umano ortotopico. Questo studio fornisce un proof-of-concept preclinici per sia la fattibilità e l'efficacia antitumorale di questi cellulari immunoterapie che si basano sulle iniezioni di stereotactic dei linfociti umani allogenici all'interno letti tumore intrabrain.
Introduzione
GBM (che grado astrocitoma IV), è il più frequente e aggressivo cancro cerebrali primari negli adulti. Nonostante i trattamenti aggressivi che combinano la chirurgia e la radio-chemioterapia, GBM rimane associato con una prognosi estremamente infausta (sopravvivenza mediana di 14,6 mesi e un 2-anno-mortalità > 73%)1. Questo evidenzia che pochi progressi terapeutici efficienti siano stati convalidati sopra gli ultimi dieci anni2. Tra i candidati per la progettazione delle più efficaci strategie terapeutiche3,4,5, immunoterapie
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Protocollo
Il seguente procedura che coinvolge animali soggetti è stato eseguito secondo le linee guida istituzionali (contratto n. 00186.02; comitato etico regionale della Pays de la Loire [Francia]). PBMCs umano sono stati isolati da sangue raccolto da donatori sani informati (Etablissement Français du Sang Nantes, Francia). Tutti i passaggi sono eseguiti in condizioni di sterilità.
1. non-specifico espansione dei linfociti T citotossici effettori
- Preparare e irradiare le cellule di alimentatore a 35 Gy. Per la stimolazione di 2 x 105 - 4 x 105 cellule effettrici, preparare 10 x 106 PBMCs e 1 x 106
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Risultati
Questo studio descrive la strategia del trasferimento adottivo di cellule effettrici immuni cellulari all'interno del cervello di topi portatori di tumore, basato su stereotactic iniezioni eseguite direttamente all'interno della base del tumore.
Per ridurre al minimo qualsiasi rischio di ferita di cervello connessa con un volume di grande iniezione, la sospensione di cellule effettrici deve essere concentrato (20 x 106
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Discussione
Un trasferimento adottivo di selezionato nativo o cellule effettrici immuni ingegnerizzati rappresenta un promettente approccio per trattare efficacemente i tumori, quali i tumori al cervello infiltrativo, avendo cura di limitare le reattività contro le cellule non trasformate15, 16,17,18. Tuttavia, il sistema nervoso centrale, che comprende il cervello, ha una particolare condizione immune, i.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano il personale dell'ospedale universitario animale impianto (UTE) di Nantes per zootecnia e cura, il cellulare e tessutale, funzione di memoria dell'Università di Nantes (MicroPICell) di imaging per l'imaging e l'impianto di citometria (Cytocell) da Nantes per la loro assistenza tecnica. Questo lavoro è stato finanziato dalla INSERM, CNRS, Université de Nantes, Institut National du Cancer (INCa n #PLBio2014-155), Ligue Nationale contre le Cancer (AO interregionale 2017) e il Consorzio europeo Transcan2 di ERA-Net (Immunoglio). La squadra è finanziata dalla Fondation pour la Recherche Medicale (DEQ20170839118). Questo lavoro è stato realizzato nel ....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| PBMC | da 3 diversi donatori sani | ||
| BLCL | da 3 diversi donatori | ||
| Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI) | Gibco | 31870-025 | |
| FCS | Dutscher | S1810-500 | |
| L-glutammina | Gibco | 25030-024 | |
| penicillina/streptomicina | Gibco | 15140-122 | |
| IL-2 | Novartis | proleuchina | |
| PHA-L | Sigma | L4144 | |
| Telaio stereotassico | Stoelting Co. | 51600 | |
| Adattatore per mouse per fotogramma stereotassico | Stoelting Co. | 51624 | |
| iniettore pompa microsiringa | WPI | UMP3-4 | |
| Siringa NanoFil | WPI | NF34BV-2 | |
| NSG topi | Charles River | NSGSSFE07S | |
| Ketamina | Merial | Imalg. ne 1000 | |
| Xilazina | Bayer | Rompur 2% | |
| Forbici | WPI | 201758 | |
| Pinze | WPI | 501215 | |
| OmniDrill 115/230V | WPI | 503598 | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon | VCP397H | |
| Xilocaina | Astrazeneca | 3634461 |
Riferimenti
- Stupp, R., Roila, F. Malignant glioma: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Annals of Oncology. 20 Suppl 4, 126-128 (2009).
- Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. Standards of care for treatment of....
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Ristampe e permessi
