Detección de virus de bioaerosoles utilizando resina de intercambio aniónico

Summary

Un anión intercambio método basado en la resina, adaptado para muestreo de bioaerosol basado en el choque de los virus se demuestra el líquido. Cuando se combina con detección molecular aguas abajo, el método permite la detección fácil y sensible de virus de bioaerosoles.

Abstract

Este protocolo muestra un método de muestreo de bioaerosol modificado para requisitos particulares en busca de virus. En este sistema, resina de intercambio aniónico es junto con dispositivos de muestreo de aire líquido basado en el choque para la concentración eficaz de virus cargado negativamente de bioaerosoles. Así, la resina sirve como un paso adicional de la concentración del flujo de trabajo de muestreo de bioaerosol. Extracción de ácidos nucleicos de las partículas virales se realiza directamente en la resina de intercambio aniónico, con la muestra que resulta adecuada para los análisis moleculares. Además, este protocolo describe una cámara de un bioaerosol capaz de generar bioaerosoles cargados de virus en una variedad de condiciones ambientales y que permite el monitoreo continuo de variables ambientales como temperatura, humedad, velocidad del viento y concentración masiva de aerosoles. La principal ventaja de utilizar este protocolo es el aumento de la sensibilidad de la detección viral, evaluada mediante comparación directa con un impactor de líquido convencional sin modificar. Otras ventajas incluyen el potencial de concentrar diversos virus cargado negativamente, el bajo costo de la resina de intercambio aniónico (~$0.14 por ejemplo) y la facilidad de uso. Desventajas incluyen la incapacidad de este protocolo para evaluar la infectividad de resina adsorbe las partículas virales, y potencialmente la necesidad de la optimización de la solución de muestreo líquido utilizado en el impactor.

Introduction

El propósito de este método es proporcionar una plataforma de muestreo de bioaerosol altamente sensible para facilitar la detección molecular de virus cargado negativamente de bioaerosoles. Microorganismos, incluyendo partículas virales, pueden sobrevivir en bioaerosoles durante largos períodos de tiempo¹. Bioaerosoles pueden viajar distancias relativamente largas y mantener la viabilidad e infectividad, evidenciada por un brote de legionelosis que se originó de Torres ubicados a una distancia de 6 km de los individuos afectados de refrigeración industrial y dio lugar a 18 fatalidades². Transmisión indirecta del virus a ....

Protocol

1. configuración de la cámara de Bioaerosol (ver figura 2)

1. Cargue previamente el líquido impingers con 20 mL de 0.01 M tamponada fosfato salino, pH 7,5 (PBS).
   1. Añadir 0,5 g de resina de intercambio aniónico y suspender en el PBS de uno de los impingers líquidos, con otro líquido impinger que sirve como control.
2. Impingers líquidos de posición en paralelo dentro de la cámara de bioaerosol utilizando soportes de abrazadera con entradas de aerosoles hacia el nebulizador.
   Nota: Véase la figura 2 para detalles adicionales.
3. Ubicar a un monitor ....

Results

Figura 1 muestra el principio de captura basados en la carga de virus de bioaerosoles mediante inserción de resina en base líquida impingers. La figura 2 muestra la configuración de la cámara de un bioaerosol. Figura 3 se describen los pasos necesarios para configurar el experimento de aerosolización y medidas para control de calidad. La figura 4 muestra curvas de amplif.......

Discussion

Este protocolo describe un método para la captura de viral sensible de bioaerosoles utilizando impingers líquidos modificados. El método se ha optimizado para la detección y cuantificación de la carga viral en bioaerosoles. La modificación específica demostrada aquí consiste en la adición de resina de intercambio aniónico líquido contenida en un impinger líquido común. Este método fue desarrollado por su sencillez en el procesamiento de las muestras aguas abajo, mientras que otras técnicas de procesamiento de muestra tal.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Escherichia coli bacteriófago MS2 (ATCC 15597-B1)Colección de	cultivos tipo americano	ATCC 15597-B1
FluMist	Tetravalente AstraZeneca	Contactar	con el fabricante Los componentes virales de esta vacuna están sujetos a cambios anuales
CFX96 Touch Sistema de detección de PCR en tiempo real Bio-Rad
Imprimadores y sondas	Tecnologías de ADN integradas	NA
0.2 y micro; M filtro estéril	NA	NA 1
L frascos de pyrex o equivalentes	NA	NA
1 mL puntas de pipeta	NA	NA 1
mL pipeta	NA	NA
50 mL pipeta serológica	NA	NA
PCR NA NA tubos NA		Pipet-aid
o equivalente	NA	NA
QIAamp Mini Kit de ARN Viral	Qiagen	52904
Sonda QuantiTect Kit RT-PCR	Qiagen	204443
Amberlite IRA-900 forma de cloruro	Sigma-Aldrich	216585-500G
Solución salina tamponada con fosfato	Sigma-Aldrich	P5368-10PAK
Agua (grado de biología molecular)	Sigma-Aldrich	W4502-1L
Tubos de microcentrífuga Eppendorf DNA LoBind	ThermoFisher	13-698-791
Falcon 50 mL Tubos de centrífuga cónicos	ThermoFisher	14-432-22
Tubos de centrífuga de polipropileno Falcon	ThermoFisher	05-538-62
Kit qRT-PCR de platino de un solo paso SuperScript III con ROX	ThermoFisher	11745100
SKC Biosampler 20 mL, juego de vidrio de 3 piezas	SKC Inc.	225-9593
Bombas de muestra Vac-u-Go SKC	Inc.	228-9695
Nebulizador Collison (6 chorros)	BGI Inc.
Cápsula HEPA	PALL	12144
Q-TRAK monitor de calidad del aire interior 8554	TSI Inc.
Anemómetro térmico con velometro NA Alnor AVM440-A	TSI Inc.
SidePak AM510 monitor de aerosol personal	TSI Inc.
Cámara de bioaerosol	NA	NA