Method Article

Sentez ve Site seçici olarak oluşturulması için Thiol reaktif reaktif Bioconjugation Immunoconjugates modifiye

DOI:

10.3791/59063

⸱

March 6th, 2019

 ,  ,  , 
1Department of Chemistry, Hunter College of the City University of New York, 2Ph.D. Program in Chemistry, Graduate Center of the City University of New York, 3Department of Radiology, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, 4Department of Radiology, Weill Cornell Medical College

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol için biz BAKLA, bir phenyoxadiazolyl metil sulfone tabanlı reaktif yükler site seçici bağlantı için biomolecules, özellikle antikorlar thiols sentezi anlatacağız. Buna ek olarak, biz malzemelerin ve BAKLA taşıyan bifonksiyonel şelatör ve onun konjugasyon bir modeli antikor için anlatacağız.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Maleimide taşıyan bifonksiyonel sonda thiols biomolecules, özellikle antikorlar içinde site seçici modifikasyonu için yıllardır istihdam edilmiştir. Succinimidyl thioether bağlantı bir retro-Michael tepki tabi olabilir, çünkü henüz maleimide tabanlı conjugates sınırlı istikrar içinde vivo görüntüleyebilir. Bu, tabii ki, radyoaktif payload ya da onun exchange thiol taşıyan biomolecules dolaşımı ile sürümü yol açabilir. Bu işlemlerden her ikisi de sağlıklı organlar konsantrasyonlarda yükseltilmiş etkinlik üretebilir yanı sıra hedef dokular, azaltılmış görüntüleme kontrast ve alt terapötik oranları ile sonuçlanan faaliyet konsantrasyonlarda azalmıştır. 2018 yılında, biz modüler, istikrarlı ve kolayca erişilebilir phenyloxadiazolyl metil sulfone reaktif rapor — 'BAKLA' lakaplı — thiol tabanlı bioconjugations için bir platform olarak. BAKLA tabanlı site seçici bioconjugations homojen, iyi tanımlanmış, son derece immunoreactive ve son derece istikrarlı radioimmunoconjugates tekrarlanarak ve sağlam oluşturmak açıkça göstermiştir. Ayrıca, kolorektal kanser fare modelleri preklinik deneylerde bunlar sitesi-seçici radiolabeled antikorların sentez maleimide tabanlı yolu ile karşılaştırıldığında sergi çok daha üstün içinde vivo performans radioimmunoconjugates etiketli göstermiştir conjugations. Bu protokol için biz BAKLA, her yerde şelatör DOTA (BAKLA-DOTA) bifonksiyonel BAKLA taşıyan türevini ve BAKLA-DOTA konjugasyon HER2 hedefleme antikor trastuzumab için dört adımlı sentezi anlatacağız.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Proton kimyagerler kadar seçicilik ve biyolojik hastalık her iki Nükleer görüntüleme için antikor özgüllüğü istismar ve radyoterapi1hedef. Sıra radiolabeling bir farkla en yaygın yaklaşım amino asitler için radiolabeled prostetik gruplar veya radiometal şelatörlerin eki gelişigüzel esas olan — en sık lysines — ( immünglobulin yapısı içinde Şekil 1A)2. Bu strateji kesinlikle etkili olmakla birlikte, rastgele, site özel olmayan doğası sorunlar oluşturabilir. Özellikle, kötü tanımlı geleneksel bioconjugation yaklaşımlar üretmek ve karışımları farklı regioisomers, her biri kendi kümesini biyoloj....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 4-[5-(methylthio)-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-aniline (1) sentezi

Not: ışık duyarlılığı nedeniyle bahçedeki, folyo kaplı damarlarının bütün tepkiler devam et.

  1. Bir 10 mL alt şişesi yuvarlak, 100 mg (0.517 mmol, eşdeğeri olan 1) 3 ml metanol 5-(4-aminophenyl)-1,3,4-oxadiazole-2-thiol geçiyoruz.
  2. Bu, diisopropylethylamine 360 μL ekleyin (DIPEA; 2.07 mmol; 4 eşdeğerleri; susuz) ve küçük manyetik heyecan bar. Şişeye bir kauçuk tıpa ile kapak ve oda sıcaklığında 10 dakika çözüm karıştırın.
  3. 1 mL cam şırınga kullanarak, kauçuk tıpa delik poke ve hızlı bir şekilde 32 μL (0.517 mmol, eşdeğeri olan 1) iodomethane bu karışıma ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu raporda, radiolabeling veya içinde vivo deneyler için herhangi bir iletişim kuralı eklemeyi seçtiniz. Bizim basit nedenidir. Eski ile ilgili olarak, BAKLA tabanlı immunoconjugate radiolabeling hiç, diğer bioconjugation stratejileri kullanarak sentezlenmiş bir immunoconjugate farklı değil ve bu yordamları kapsamlı olmuştur başka bir yerde2 gözden . İkincisi ile ilgili olarak, preklinik içinde vivo deneyler (fare modelleri, doz, vb), özellikleri geniş uygulama ve antikor/antijen sistemi göre deği.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar Dr Sai Kiran Sharma yararlı konuşmaları için teşekkür ederiz.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
5- (4-aminofenil) -1,3,4-oksadiazol-2-tiyolSigma-Aldrich675024
1.5 mL LoBind Mikrosantrifüj TüpEppendorf925000090
1.5 mL Mikrosantrifüj TüpFisherbrand05-408-129
AsetonitrilFisher ScientificA998-4
Amicon Ultra-2 Santrifüj Filtre ÜnitesiEMD Millipore
SikloheksanFisher ScientificC556-4
DiklorometanFisher ScientificAC383780010
DiizopropiletilamınMP Biyomedikal, LLC150915
DimetilsülfoksitFisher Scientific31-727-5100ML
Etil AsetatFisher ScientificE145 4
Hidroklorik AsitFisher ScientificA144-500
İyodometanSigma-Aldrich289566-100G
Magnezyum SülfatAcros Organics413485000
m-kloroperbenzoik asitSigma-Aldrich273031
MetanolFisher ScientificA412 1
NBoc-N′- süksinil-4,7,10-trioksa-1,13-tridekandiaminSigma-Aldrich671401 Mağazası -80 &°C; C
, N-etil-N&asal;- [3- (dimetilamino)propil] karbodiimid hidroklorürSigma-Aldrich3450
Fosfat TamponluSalin Sigma-AldrichP549310 kez; Konsantrasyon
p-SCN-Bn-DOTAMakrosiklikB-205-80 ° C'de saklayın;
PD-10 Tuz Giderme Kolonlarında C Sephadex G-25GE Healthcare17085101
Sodyum KarbonatSigma-AldrichS7795
Sodyum HidroksitFisher ScientificS318-1
TCEPThermoFischer Scientific20490
TrietilaminFisher ScientificAC157911000
Trifloroasetik AsitFisher ScientificA116-50
EN300000141G

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wu, A. M. Antibodies and antimatter: The resurgence of immuno-PET. Journal of Nuclear Medicine. 50 (1), 2-5 (2009).
  2. Zeglis, B. M., Lewis, J. S. A practical guide to the construction of radiometallated bioconjugates for positron emissio....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

PODS SynthesisThiol BioconjugationSite Selective ModificationImmunoconjugate FormationDOTA ChelationTrastuzumab ConjugationMaleimide AlternativeRadioimmunoconjugate StabilityHER2 TargetingPreclinical Evaluation

Related Articles