מאמר זה מתאר את הפרוטוקולים המשמשים להפקת פלטפורמת אספקת חיסונים חדשנית, "polybubbles", כדי לאפשר שחרור פרץ מושהה. פוליאסטר כולל פולי (חומצה לקטית-co-גליקולית) ו polycaprolactone שימשו כדי ליצור את polybubbles מולקולות קטנות ואנטיגן שימשו מטען.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ייצור של פלטפורמת אספקת חיסונים רגישה כמעט לאפרה-אדום, Core-Shell
במאמר זה
סיכום
תקציר
אסטרטגיות אספקת חיסונים שיכולות להגביל את החשיפה של מטען לממס אורגני תוך מתן אפשרות לפרופילי שחרור חדשניים הן קריטיות לשיפור כיסוי החיסון ברחבי העולם. כאן, מוצגת פלטפורמת חדשנית להזרקה, אולטרה סגולה הניתנת לריפוי ועיכוב בהפצה, המאפשרת אספקת חיסונים בשם polybubbles. המטען הוזרק לתוך polybubbles פוליאסטר מבוסס שנוצרו 10% carboxymethycellulose מבוסס תמיסה מים. נייר זה כולל פרוטוקולים לשמירה על צורה כדורית של polybubbles ולמטב את מיקום מטען ושמירה כדי למקסם את כמות המטען בתוך polybubbles. כדי להבטיח בטיחות, תכולת ממס כלור בתוך polybubbles נותחו באמצעות ניתוח הפעלת ניוטרונים. מחקרי שחרור נערכו עם מולקולות קטנות כמטען בתוך polybubble כדי לאשר שחרור פרץ מושהה. כדי להראות עוד יותר את הפוטנציאל למסירה לפי דרישה של המטען, nanorods זהב היו מעורבים בתוך מעטפת פולימר כדי לאפשר הפעלת לייזר כמעט אינפרא אדום.
מבוא
כיסוי חיסון מוגבל גורם למותם של 3 מיליון אנשים הנגרמת במיוחד על ידי מחלות הניתנות למניעה חיסון1. תנאי אחסון ותחבורה לקויים מובילים לבזבוז של חיסונים פונקציונליים ובכך תורמים לצמצום החיסונים הגלובליים. בנוסף, חיסון לא שלם בשל אי דבקות בלוחות הזמנים הנדרשים של החיסון גורם גם לכיסוי חיסון מוגבל, במיוחד במדינות מתפתחות2. ביקורים מרובים של אנשי צוות רפואי נדרשים בתקופה המומלצת לקבלת זריקות מאיץ, ובכך להגביל את אחוז האוכלוסייה עם חיסון מלא. לפיכך, יש צורך בפיתוח אסטרטגיות חדשניות לאספקת חיסון מבוקר כדי לעקוף אתגרים אלה.
המאמצים הנוכחיים לפיתוח טכנולוגיות לאספקת חיסונים כוללים מערכות פולימריות מבוססו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. פוליקאפולאציון טריקרילט (PCLTA) סינתזה
- יבש 3.2 מ"ל של 400 דה פוליקאפולאסיון (PCL) טריו בלילה ב 50 מעלות צלזיוס בקבוקון פתוח 200 מ"ל עגול בתחתית K2CO3 ב בקבוקון זכוכית ב 90 מעלות צלזיוס.
- מערבבים את הטריו עם 6.4 מ"ל של דיכלורומטאן (DCM) ו-4.246 גרם אשלגן קרבונט (K2CO3)תחת ארגון.
- מערבבים 2.72 מ"ל של אקרילויל כלוריד ב-27.2 מ"ל של DCM ומוסיפים את הירידה לתערובת התגובה במבחנות במשך 5 דקות.
- מכסים את תערובת התגובה בנייר אלומיניום ומשאירים אותה ללא הפרעה בטמפרטורת החדר למשך 24 שעות תחת ארגון.
- לאחר 24 שעות, לסנן את תערובת התגובה באמצעות נייר מסנן על משפך Buchner תחת ואקום כדי להשליך....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
Polybubbles היו מאופיינים בהרחבה באמצעות SEM ו NAA. המטען היה מרוכז בהצלחה כדי לגרום לשחרור פרץ מושהה. Polybubbles היו גם בהצלחה מופעל בלייזר בגלל הנוכחות של AuNRs בתוך polybubbles.
אפיון פוליבבל
Polybubbles מוזרק בתמיסה מים ללא CMC הביא polybubble שטוח בשל המגע שלהם עם החלק התחתון של בקבוקון הזכוכית (איור 1,B). שיטוח חלקי נצפתה כאשר 5% פתרון מים מבוסס CMC שימש ב.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
טכנולוגיות ואתגרים נוכחיים
חלקיקים מיקרו וחלקיקים מבוססי אמולסיה שימשו בדרך כלל כנשאים משלוח סמים. למרות שחרור קינטיקה של המטען ממכשירים אלה נחקרו בהרחבה, שליטה פרץ שחרור קינטיקה כבר אתגר גדול11. רב-תכליתיות ופונקציונליות המטען מוגבלות גם במערכות מבוססות אמולסיה בשל חשיפת המטען לממיסים מים ואורגניים עודפים. מטען מבוסס חלבון לעתים קרובות אינם תואמים עם מיקרו וחלקיקים בשל האפשרות של denaturation מטען וצבירה12. בנוסף ליציבות המטען, קינטיקה מטען חשוב במיוחד .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
לסופרים אין מה לחשוף.
תודות
ברצוננו להודות ד"ר בריאן א. טומלין המזוהה עם מעבדת ניתוח יסודי בתוך המחלקה לכימיה ב TAMU שסייע עם ניתוח ההפעלה ניוטרונים (NAA).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| תמיסת מצע Ultra Tetramethylbezidine (TMB)-Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) | Thermo Scientific | 34028 | |
| 2-Hydroxy-2-methylpropiophenone | TCI AMERICA | H0991 | |
| 450 ננומטר תמיסת עצירה למצע TMB | Abcam | ab17152 | |
| אקרילואיל כלוריד | סיגמא אולדריץ' | A24109-100G | |
| Acriflavine | Chem-Impex International | 22916 | |
| אתיל אתר נטול מים | פישר כימיקל | E138-500 | |
| נוגדן אנטי-HIV1 gp120 מצומד לחזרת פרוקסידאז (HRP) | |||
| אלבומין בסרום בקר (BSA) | פישר ביו-ריאגנטים | BP9700100 | |
| מצומדי צבע BSA-CF488 | Invitrogen | A13100 | |
| חומצה ברומוזליצילית | Acros Organics | AC162142500 | |
| קרבוקסימתיל צלולוז (CMC) | Millipore Sigma | 80502-040 | |
| צנטרימוניום ברומיד (CTAB) | MP ביומדיקל | ICN19400480 | |
| כלורופורם | פישר כימיקל | C2984 | |
| מאגר ציפוי | Abcam | ab210899 | |
| דיכלורומתאן (DCM) | סיגמא אולדריץ' | 270997-1L | |
| דיאתיל אתר | פישר כימי | E1384 | |
| דודאציל אמין | אקרוס אורגני | AC117665000 | |
| דוקסורוביצין הידרוכלוריד | פישר ביו-ריאגנטים | BP251610 | |
| חומצה L-אסקורבית | אקרוס אורגניקס | A61 100 | |
| Legato 100 משאבת מזרק | KD Scientific | 14 831 212 | |
| mPEG thiol | Laysan Bio | NC0702454 | |
| חלב יבש ללא שומן | Andwin Scientific | NC9022655 | |
| אשלגן פחמתי | Acros Organics | AC424081000 | |
| פוספט מאגר מלח | פישר ביו-ריאגנטים | BP3991 | |
| (פולי (קפרולקטון) | סיגמא אולדריץ' | 440744-250 גרם | |
| (פולי(קפרולקטון) טריול | Acros Organics | AC190730250 | |
| פולי (חומצה לקטית-קו-גליקולית) דיאקרילט | CMTec | 280050 | |
| אשלגן פחמתי | Acros Organics | AC424081000 | |
| רקומביננטי HIV1 gp120 + gp41 חלבון | Abcam | ab49054 | |
| כסף חנקתי | Acros Organics | S181 25 | |
| נתרן בורוהידריד | פישר כימיקל | S678 10 | |
| חומצה טטרכלורואורית | פישר כימי | G54 1 | |
| טרהלוז | אקרוס אורגני | NC9022655 | |
| טריאתיל אמין | אקרוס אורגני | AC157910010 |
מקורות
- World Health Organization. Global Immunization: Worldwide Disease Incidence. , Children's Hospital of Philadelphia. https://www.chop.edu/centers-programs/vaccine-education-center/global-immunization/diseases-and-vaccines-world-view (2018).
- Paul, A., Bera, M., Gupta, P., Singh, N. D. P. o-Hydroxycinnamate for sequential photouncaging of two different functional groups and its application in releasing c....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
