Crecimiento de capas celulares endoteliales corneales humanas y ovinas en membranas biomateriales

Jennifer Walshe; Najla  Al Khaled Abdulsalam; Shuko Suzuki; Traian  V. Chirila; Damien  G. Harkin

doi:10.3791/60762

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Artículo de método

Crecimiento de capas celulares endoteliales corneales humanas y ovinas en membranas biomateriales

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DOI:

10.3791/60762

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6 de febrero de 2020

Jennifer Walshe¹ , Najla Al Khaled Abdulsalam² , Shuko Suzuki¹ , Traian V. Chirila¹^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷^,⁸ , Damien G. Harkin¹^,³^,⁴

¹Queensland Eye Institute, ²King Faisal University, ³School of Biomedical Sciences, Faculty of Health, Queensland University of Technology, ⁴Institute of Health and Biomedical Innovation, Queensland University of Technology, ⁵Science and Engineering Faculty, Queensland University of Technology, ⁶Faculty of Medicine, University of Queensland, ⁷Australian Institute for Bioengineering and Nanotechnology, University of Queensland, ⁸Faculty of Science, University of Western Australia

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe los pasos críticos necesarios para establecer y cultivar cultivos celulares endoteliales corneales a partir de explantas de tejido humano o ovino. También se presenta un método para subculturizar células endoteliales corneales en biomateriales membranosas.

Resumen

Los cultivos de células endoteliales corneales tienden a someterse a una transición epitelial a mesenquimal (EMT) después de la pérdida del contacto entre células. La EMT es perjudicial para las células, ya que reduce su capacidad para formar una capa madura y funcional. Aquí, presentamos un método para establecer y suculcar cultivos celulares endoteliales humanos y ovinos que minimiza nalve la pérdida de contacto de célula a célula. Los explantas de la membrana del endotelio/Descemet se toman de las córneas del donante y se colocan en el cultivo de tejidos en condiciones que permiten que las células migren colectivamente a la superficie de cultivo. Una vez establecida una cultura, los explantes se transfieren a placas nuevas para iniciar nuevos cultivos. Dispase II se utiliza para levantar suavemente los grupos de células de las placas de cultivo de tejido para su subcultura. Los cultivos celulares endoteliales corneales que se han establecido utilizando este protocolo son adecuados para transferir a membranas biomateriales para producir capas celulares de ingeniería tisular para trasplante en ensayos con animales. Se describe un dispositivo hecho a medida para apoyar las membranas biomateriales durante el cultivo del tejido y se presenta un ejemplo de un injerto de ingeniería tisular compuesto por una capa de células endoteliales corneales y una capa de células estromales corneales a ambos lados de una membrana de colágeno tipo I.

Introducción

La córnea es un tejido transparente que se encuentra en la parte delantera del ojo. Se compone de tres capas principales: una capa epitelial en la superficie externa, una capa de estroma medio y una capa interna llamada endotelio corneal. El endotelio corneal es una monocapa de células que se asienta sobre una membrana del sótano llamada membrana de Descemet y mantiene la transparencia de la córnea regulando la cantidad de líquido que entra en el estroma desde el humor acuoso subyacente. El exceso de líquido dentro del estroma causa hinchazón de la córnea, opacidad y pérdida de la visión. Por lo tanto, el endotelio es vital para mantener la visión.