Sitotoksisiteye Erişim ve Biyomateryallere Hücre Yanıtı

Anabela  Baptista Paula; Mafalda Laranjo; Ana Sofia Coelho; Ana Margarida Abrantes; Ana  Cristina Gonçalves; Ana  Bela Sarmento-Ribeiro; Manuel  Marques Ferreira; Maria  Filomena Botelho; Carlos  Miguel Marto; Eunice Carrilho

doi:10.3791/61512

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Sitotoksisiteye Erişim ve Biyomateryallere Hücre Yanıtı

4.7K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/61512

⸱

8 Temmuz 2021

Anabela Baptista Paula^*¹^,²^,³^,⁴ , Mafalda Laranjo^*²^,³^,⁴^,⁵ , Ana Sofia Coelho¹^,²^,³^,⁴ , Ana Margarida Abrantes²^,³^,⁴^,⁵ , Ana Cristina Gonçalves²^,³^,⁴^,⁶ , Ana Bela Sarmento-Ribeiro²^,³^,⁴^,⁶ , Manuel Marques Ferreira²^,³^,⁴^,⁷ , Maria Filomena Botelho²^,³^,⁴^,⁵ , Carlos Miguel Marto¹^,²^,³^,⁴^,⁸ , Eunice Carrilho¹^,²^,³^,⁴

¹Institute of Integrated Clinical Practice, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ²Coimbra Institute for Clinical and Biomedical Research (iCBR) area of Environment Genetics and Oncobiology (CIMAGO), University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ³Center for Innovative Biomedicine and Biotechnology (CIBB), University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁴Clinical Academic Center of Coimbra, CACC, Portugal, ⁵Institute of Biophysics, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁶Laboratory of Oncobiology and Hematology, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁷Institute of Endodontics, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁸Institute of Experimental Pathology, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal

^* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu metodoloji, akış sitometrisi, RT-PCR, immünositokimya ve diğer hücresel ve moleküler biyoloji teknikleri dahil olmak üzere canlılık testleri ve fenotipik analizler kullanarak, çözünür ekstraktların hazırlanması yoluyla biyomateryal sitotoksisitesini değerlendirmeyi amaçlamaktadır.

Özet

Biyomateryaller insan dokularıyla doğrudan veya dolaylı olarak temas eder ve bu da sitotoksisitesini değerlendirmeyi önemli kılar. Bu değerlendirme birkaç yöntemle yapılabilir, ancak kullanılan yaklaşımlar arasında yüksek bir tutarsızlık vardır, bu da tekrarlanabilirliği ve elde edilen sonuçlar arasındaki karşılaştırmayı tehlikeye atar. Bu yazıda, dental biyomateryaller için kullandığımız çözünür ekstraktları kullanarak biyomateryallerin sitotoksisitesini değerlendirmek için bir protokol öneriyoruz. Ekstraktların hazırlanması, pelet üretiminden bir kültür ortamında ekstraksiyonuna kadar detaylandırılmıştır. Biyomateryal sitotoksisite değerlendirmesi, MTT testi kullanılarak metabolik aktiviteye, Sülforhodamin B (SBR) testi kullanılarak hücre canlılığına, akış sitometrisi ile hücre ölüm profiline ve May-Grünwald Giemsa kullanılarak hücre morfolojisine dayanmaktadır. Sitotoksisite değerlendirmesine ek olarak, immünositokimya ve PCR ile değerlendirilen spesifik belirteçlerin ekspresyonuna dayanarak hücre fonksiyonunu değerlendirmek için bir protokol tanımlanmıştır. Bu protokol, ekstraktlar metodolojisini kullanarak biyomateryallerin sitotoksisitesi ve hücresel etkilerin değerlendirilmesi için tekrarlanabilir ve sağlam bir şekilde kapsamlı bir kılavuz sağlar.

Giriş

Biyouyumluluk, bir malzemenin dokuyu entegre etme ve lokal ve sistemik hasarlardan arındırılmış olumlu bir terapötik yanıtı indükleme kapasitesi olarak tanımlanabilir ^1,2,3. Biyouyumluluk değerlendirmesi, tıbbi kullanıma yönelik herhangi bir malzemenin geliştirilmesi için çok önemlidir. Bu nedenle, bu protokol, yeni biyomalzemeler geliştirmeyi amaçlayan veya mevcut biyomalzemeler için yeni uygulamaları inceleyen her araştırmacı için sistematik ve kapsamlı bir yaklaşım sunmaktadır.

İn vitro sitotoksisite testleri, primer hücre kültürleri veya hücre ....