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Articolo metodologico

Una tecnica chirurgica modificata per il trapianto di rene nei topi

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DOI:

10.3791/63434

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22 luglio 2022

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* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo presenta una nuova tecnica chirurgica di trapianto di rene di topo incentrata su una strategia di anastomosi arteriosa modificata. Viene anche presentata una tecnica di sutura vascolare che include un metodo di anastomosi uretere-vescica semplice e più sicuro. Queste modifiche riducono i tempi di operazione e migliorano il tasso di successo della procedura di trapianto di rene di topo.

Abstract

Il trapianto di rene nei topi è una procedura chirurgica complicata e impegnativa. Ci sono pochissime pubblicazioni che dimostrano i passaggi chiave di questa operazione. Pertanto, questo articolo introduce la tecnica e sottolinea gli avvertimenti chirurgici associati a questa operazione. Inoltre, vengono dimostrate importanti modifiche rispetto alla procedura convenzionale. In primo luogo, una patch dell'aorta addominale viene tagliata e preparata in modo che le biforcazioni prossimali dell'arteria renale, compresa l'arteria ureterale, vengano transettate insieme al rene donatore in blocco. Ciò riduce il rischio di necrosi dell'uretere ed evita lo sviluppo di un'occlusione delle vie urinarie. In secondo luogo, viene dimostrato un nuovo metodo di anastomosi vascolare che consente all'operatore di aumentare o diminuire in modo flessibile le dimensioni dell'anastomosi dopo che la riperfusione del trapianto renale è già stata avviata. Ciò evita lo sviluppo di stenosi dei vasi e sanguinamento intraaddominale. In terzo luogo, viene mostrata una tecnica che consente l'anastomosi del delicato uretere donatore e della vescica ricevente che non causa un trauma. L'adozione di questo protocollo può ridurre i tempi di operazione e ridurre il danno alla vescica del ricevente, aumentando così significativamente il tasso di successo dell'operazione per i topi riceventi.

Introduzione

Da quando Sakowitz et al. hanno sviluppato modelli murini di trapianto di rene nel 1973 per la prima volta1, si è dimostrato un importante strumento sperimentale per studiare i meccanismi del danno ischemico da trapianto e del rigetto alloimmune, nonché per lo sviluppo di nuovi trattamenti volti a prolungare la sopravvivenza dell'allotrapianto e possibilmente a raggiungere la tolleranza immunologica. Tuttavia, la tecnica chirurgica si è dimostrata complessa e molto impegnativa, a volte con complicazioni come stenosi anastomotiche vascolari che portano a fallimento del trapianto di rene prerenale non immunologico2, insuff....

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Protocollo

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti secondo le linee guida della direttiva 2010/63/UE del Parlamento europeo sulla protezione degli animali utilizzati a fini scientifici (Carta etica degli animali: Ministero della sicurezza alimentare e farmaceutica della Bassa Sassonia, #33.9-42502-04-11/0492). Eseguire procedure utilizzando strumenti chirurgici sterili e materiali di consumo (autoclavati) e cercare di mantenere l'area operatoria il più sterile possibile.

NOTA: I topi maschi C57BL/6J sono stati donatori e riceventi (modello di trapianto sinergico) mentre i topi Balb/c sono stati riceventi di allotrapianto renale (modell....

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Risultati

Quattro settimane dopo il trapianto, sia la tecnica modificata che la tecnica convenzionale hanno mostrato segni moderati di atrofia tubulare renale14,15 rispetto ai reni controlaterali riceventi nativi (Figura 1). Il grado di atrofia dei tubuli renali non ha dimostrato alcuna differenza significativa tra le due diverse tecniche. La colorazione tricroma di Masson Goldnerin 14,15

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Discussione

Mentre il modello di trapianto di pelle nei topi è semplice e facile da eseguire per studiare gli eventi di rigetto alloimmune, le tecniche chirurgiche per indagare più specificamente le alterazioni infiammatorie correlate all'alloimmune dopo il cuore16 e il trapianto di rene10 si sono dimostrate complesse e molto impegnative. Dal punto di vista del nefrologo dei trapianti, l'istituzione di un modello di trapianto renale di topo efficace e stabile a lungo termine ha ancora .......

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Ringraziamenti

Ringraziamo il team del Dr. Tiantian Bai per l'aiuto con la voce fuori campo, Miss Mian Pao per il suo aiuto nell'illustrazione medica. Questo lavoro è stato sostenuto in parte dalla German Research Foundation (DFG) per promuovere collaborazioni internazionali (HO2581/4-1 a AH) e dalla National Science Foundation of China (NSFC; #81760291 a FJ).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
30G-aghiBraun456300-acepromazina
CP PharmaTranquisol
P-Bepanthen unguento oculareHaus-ApothekePZN01578675-Bonn
Micro ForcepsFST11083-07-Box
per dispositivo di isolamento e alimentazione di ossigenoRUSKINN
/6J  topiFiume Charles. Germanianessun numero di catalogo-Carprofene
ZoetisRimadyl 50 mg/
ml-CATETERE-FEP 26GTERUMOSurflo-W-Clip
Applicatore Pinze StileFST18057-14-Pinze
curveWPI14114-G-Cutasept
disinfezione della pelleVWRBODL980365-
DisidratatoreDIAPATHDonatello-penna
elettrochirurgicaBovieCHANGE-A-TIP-Embedding
machineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5-Ethanol
Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD100092683-Frozen
piattaformaWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-L5-garze
pads, tamponi di cotoneLohmann-Rauscher13353-Vetrino
ServicebioG6004-HE
set di soluzioni colorantiServicebioG1003-Tappetino
riscaldanteTHERMO MAT PRO 30WHTP-30-spugna
emostaticaCuraSponJ1276A-soluzione
eparinaHaus-ApothekePZN 03029820-
scatola del ghiaccioPETZNessun numero di catalogodisponibile-Sistema
di imagingNikonNikon DS-U3-Dispositivo
per anestesia per inalazioneGROPPLERBKGM 0616-isoflurano
CP PharmaIsofluran CP 1 ml/
ml-ketaminaZoetisnessun catalogonumero-Set
soluzionicoloranti MassonServicebioG1006-metamizolo
WDTnessun catalogonumeri-Micro
forbiciFST15000-00,15000-10-Micro
Serrefine ( Morsetto ) Angolato / 16 mmFST18055-06-Microscopio
LeicaLEICAMZ6-Lampada
microscopioSCHOTTKL2500LED-Gomma
neutraSCRC10004160-Forno
Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., LtdGFL-230-Affettatrice
patologicaShanghai Leica Instrument Co., LtdRM2016-Soluzione
salina (NaCl 0,9 %)Haus-ApothekePZN06178437-forbici
Peha Instruments991083/4-Slides
Servicebio-
piccola piastra di PetriSarstedt8,33,900-pinza
drittaWPI14113-G-nastro
chirurgicoBSN4120-pinza
per legatura di sutura - 10 cmFST18025-10-Sutures
(10-0)MedtronicN2540-Sutures
(4-0)ETHILONV4940H-
Suture(7-0)ETHILON1647H-Siringa
(0,3 mL)BD
324826-Siringa (1 mL)BD
320801-Spalmatore di tessutiZhejiang Kehua Instrument Co., LtdKD-P-Microscopio
ottico verticaleNikon NikonEclipse E100-xilazina
BayerRompun-
Reagente chimico del gruppo xilene Sinopharm Co. LtD10023418-
INVIV-C57BL di per

Riferimenti

  1. Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).
  2. Jiang, K., et al.

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Ristampe e permessi

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