Intravitreale Injektionen wurden im Schafauge mit dem Ziel durchgeführt, eine viral vermittelte Gentherapie an die Netzhaut zu verabreichen.
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In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Es gibt mehrere Methoden für die Abgabe von Therapeutika an die Netzhaut, einschließlich intravitrealer (IVT), subretinaler, suprachoroidaler, periokularer oder topischer Verabreichung. IVT Medikamentenabgabe beinhaltet eine Injektion in den Glaskörper des Auges, eine gallertartige Substanz, die die hintere Augenkammer füllt und die Form der Augenkugel beibehält. Obwohl der IVT-Weg weniger spezifisch ausgerichtet ist als die subretinale Abgabe, ist er viel weniger invasiv und wird häufig in klinischen Umgebungen für eine Reihe von Augenerkrankungen eingesetzt.
Wir haben zuvor die Wirksamkeit der intravitrealen Verabreichung eines Adeno-assoziierten Virus (AAV)-vermittelten Gentherapieprodukts (AAV9) nachgewiesen. CLN5) bei Schafen mit einer natürlich vorkommenden CLN5-Form der neuronalen Ceroid-Lipofuszinose (NCL). Betroffene Schafe erhielten eine IVT-Gentherapie auf einem Auge, wobei das andere unbehandelte Auge als interne Kontrolle diente. Die Netzhautstruktur und -funktion blieb im behandelten Auge bis zu 15 Monate nach der Behandlung erhalten, während das unbehandelte Auge während der postmortalen Untersuchung eine zunehmend abnehmende Funktion und eine schwere Atrophie zeigte. Basierend auf den Schafstudien wurde das Gentherapieprodukt CLN5 im September 2021 von der US-amerikanischen Food and Drug Administration als Kandidat für ein neues Prüfpräparat (IND) zugelassen. Dieser Artikel beschreibt das chirurgische Protokoll für die IVT-Verabreichung eines therapeutischen viralen Vektors an das Schafauge.
Einleitung
Mehrere Methoden können verwendet werden, um Therapeutika an die Netzhaut abzugeben, einschließlich intravitrealer (IVT), subretinaler, suprachoroidaler, periokularer oder topischer Verabreichung. Jeder Verabreichungsweg beinhaltet die Überwindung von Barrieren wie der Blut-Netzhaut-Schranke oder den inneren und äußeren Begrenzungsmembranen und hat je nach verabreichtem Arzneimittel und spezifischem Netzhautzielunterschiedliche Wirksamkeitsraten 1,2.
IVT Medikamentenabgabe beinhaltet eine Injektion in den Glaskörper des Auges, eine gallertartige Substanz, die die hintere Augenkammer....
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Protokoll
Alle experimentellen Protokolle wurden vom Lincoln University Animal Ethics Committee genehmigt und entsprechen den Richtlinien der US National Institutes of Health für die Pflege und Verwendung von Tieren in der Forschung und dem New Zealand Animal Welfare Act (1999). Borderdale-Schafe wurden bei der Geburt14 diagnostiziert und auf Forschungsfarmen der Lincoln University gepflegt. Drei 3 Monate alte homozygote (CLN5-/-) Mutterschafe erhielten eine einzige IVT-Injektion in das linke Auge, wobei das unbehandelte rechte Auge als interne Kontrolle diente. Elektroretinographie- und Pathologiedaten wurden mit historischen gesunden und bet....
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Ergebnisse
Die Wirksamkeit der IVT-Verabreichung eines CLN5-Gentherapievektors bei der Abschwächung von Netzhautdysfunktion und Degeneration bei Schafen mit CLN5 NCL wurde bereits von dieser Forschungsgruppe15 nachgewiesen. Die betroffenen Schafe erhielten eine einmalige 100 μL IVT-Injektion von CLN5, verpackt in einem AAV-Serotyp 9 (AAV9) Vektor (AAV9). CLN5) in ein Auge, wobei das kontralaterale Auge als unbehandelte innere Kontrolle dient. Das Sehvermögen wurde monatlich vom Injektionsalter (3 Monate) bis.......
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Diskussion
Intravitreale Injektionen sind eines der häufigsten chirurgischen Verfahren in der menschlichen Ophthalmologie und haben sich bei der Verabreichung von AAV-vermittelten Gentherapien an die Netzhaut von Schafen als wirksam erwiesen. Wir hatten zuvor die Wirksamkeit von AAV9 nachgewiesen. Die CLN5-Gentherapie führte intravitreal zur Abschwächung von Netzhautdysfunktion und Degeneration bei Schafen mit CLN5 NCL15. Es ist zu hoffen, dass sich auch die Übertragung dieses Verabreichungsweges an menschli.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.
Danksagungen
Die Autoren danken Dr. Steve Heap (BVSc, CertVOphthal) für seine Unterstützung bei der Erstellung dieses Protokolls und der Durchführung der von Murray et al.15 beschriebenen Injektionen. Die Autoren würdigen auch die Finanzierung durch CureKids New Zealand, die Canterbury Medical Research Foundation, Neurogene Inc und die Batten Disease Support and Research Association.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 1 mL Sicherheitsspritze mit niedrigem Totraum und fest angebrachter 0,5-Zoll-Nadel | Fisher Scientific, Auckland, Neuseeland | 05-561-28 | Covidien Monoject Tuberculin Sicherheitsspritze oder ähnlich |
| 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen | Sigma Aldrich | HS4323 | Autoklavenröhrchen zur Sterilisation vor dem Gebrauch |
| Anästhesiegerät mit Gasbank und Monitor; | Hyvet Anesthesia, Christchurch, Neuseeland | ||
| Antibiotische Augentropfen | Teva Pharma Ltd, Auckland, Neuseeland | Handelsname: Chlorafast (0,5 % Chloramphenicol) | |
| BrightMount plus Anti-Fade-Eindeckmedium | Abcam, Cambridge, Vereinigtes Königreich | ab103748 | |
| DAPI (4& prime; ,6-Diamidino-2-phenylindol-dihydrochlorid) | Sigma Aldrich, St. Louis, Missouri, Vereinigte Staaten | 10236276001 | |
| Diazepam-Beruhigungsmittel | Ilium, Troy Laboratories Pty Ltd, Tauranga, Neuseeland | 5 mg/ml | |
| Endotrachealkanülen | Flexicare Medical Ltd, Eberesche, Vereinigtes Königreich | Standard, mit Manschette. Größen 7, 7,5 oder 8 je nach Schafgröße | |
| Augenspekulum | Capes Medical Ltd, Tauranga, Neuseeland | KP151/14 | Nopa Barraquer-Colibri (10 mm) |
| Fenestiertes OP-Tuch | Amtech Medical Ltd, Whanganui, Neuseeland | DI583 | Oder ähnliches |
| Filterspitzen | Interlab, Auckland, Neuseeland | 10, 200 und 1.000 & micro; L | |
| Formaldehydlösung (37%) | Fisher Scientific, Auckland, Neuseeland | AJA809-2.5PL | Herstellung von bis zu 10% in destilliertem Wasser mit 0,9% NaCl |
| Ziege Anti-Kaninchen Alexa Fluor 594 | Invitrogen Carlsbad, CA, USA | A-11012 | Anwendung in einer Verdünnung von 1:500 |
| Isofluran-Anästhetikum | Attane, Bayer Animal Health, Auckland, Neuseeland | ||
| Ketamin HCl Anästhetikum/Analgetikum | PhoenixPharm Distributors Ltd, Auckland, Neuseeland | 100 mg/ml | |
| Laryngoskop (Veterinärmedizin) | KaWe Medical, Dänemark | Miller C-Klinge, Größe 2 | |
| Nadeln | Capes Medical Ltd, Tauranga, Neuseeland | 302025 | BD Injektionsnadeln oder ähnliche |
| nichtsteroidale entzündungshemmende | Boehringer Ingelheim (NZ) Ltd, Auckland, Neuseeland | 49402/008 | Handelsname: Metacam 20 (20 mg/mL Meloxicam) |
| Nicht gezahnte Pinzette | Capes Medical Ltd, Tauranga, Neuseeland | AB864/16 | Oder ähnliches |
| gezahntes Blutstillungsmittel | Capes Medical Ltd, Tauranga, Neuseeland | AA150/12 | Oder ähnliches |
| Normales Ziegenserum | Thermo Fisher Scientific, Christchurch, Neuseeland | 16210072 | |
| Sauerstoff (medizinisch) | BOC Gas, Christchurch, Neuseeland | D2-Flasche, Gascode 180 | |
| Phosphatgepufferte Kochsalzlösung | Thermo Fisher Scientific, Christchurch, Neuseeland | 10010023 | Sterile, gefilterte |
| Povidon-Jod-Lösung | Capes Medical Ltd, Tauranga, Neuseeland | 005835 | Handelsname: Betadin (10 % Povidon-Jod) |
| Saures Kaninchen-Anti-Kuh-Gliafibrilläres Protein (GFAP) | Dako, Glostrup, Dänemark | Z0334 | Verwendung in einer Verdünnung von 1:2.500 |
| Selbstkomplementäres Adeno-assoziiertes Virus Serotyp 9, das den Chicken Beta Action (CBh)-Promotor und Codon-optimiertes Schaf CLN5 | University of North Carolina Vector Core, NC, USA. | scAAV9/CBh-oCLN5opt | |
| Natriumchlorid 0,9% IV-Lösung | Capes Medical Ltd, Tauranga, Neuseeland | AHB1322 | Handelsname: Kochsalzlösung |
| Subkutane Antibiotika | Intervet Schering Plough Animal Health Ltd, Wellington, Neuseeland | Handelsname: Duplocillin LA (150.000 I.E./ml Procain-Penicillin und 115.000 I.E./ml Benzathin-Penicillin) | |
| Chirurgische, scharfe, stumpfe, gebogene Schere | Capes Medical Ltd, Tauranga, Neuseeland | SSSHBLC130 | |
| Terumo Spritze Luer Lock | Amtech Medical Ltd, Whanganui, Neuseeland | SH159/SH160 | Sterile Spritzen; 10 mL zur Herstellung von Induktionsmedikamenten, 20 mL zur Herstellung von Kochsalzlösung |
| Virkon Desinfektionspulver EBOS | Group Ltd, Christchurch, NZ | 28461115 |
Referenzen
- Himawan, E., et al. Drug delivery to retinal photoreceptors. Drug Discovery Today. 24 (8), 1637-1643 (2019).
- Murray, S. J., Mitchell, N. L. Ocular therapies for neuronal ceroid lipofuscinoses: More than meets the eye. Neural Regeneration Research.
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Nachdrucke und Genehmigungen
