Burada, dolaşım ölümü donör kalbi kullanılarak yapılan murin heterotopik kalp naklinin hazırlanışını ve teknik detaylarını anlatıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Burada, dolaşım ölümü donör kalbi kullanılarak yapılan murin heterotopik kalp naklinin hazırlanışını ve teknik detaylarını anlatıyoruz.
Bu protokolün amacı, dolaşım ölümü sonrası bağış (DCD) donör kalpleri ile sıçan heterotopik kalp nakli modeli oluşturmaktır. Bu protokol için iki kurulum vardır: kalp donörü kurulumu ve alıcı kurulumu. Kalp donörü kurulumunda, Sprague Dawley sıçanları anestezi altına alınır, endotrakeal olarak entübe edilir ve havalandırılır. Sağ karotis arter, heparin ve paralitik ajan vekuronyum-bromür vermek için kanüle edilir. Ventilasyonun sonlandırılmasıyla DCD işlemi başlatılır. 20 dakika sonra kalp açığa çıkarılır ve brakiyosefali dalının distalindeki aort klemplenir. Ventilatörün sonlandırılmasından 25 dakika sonra, buz gibi Wisconsin Üniversitesi (UW) solüsyonu, kalbi yıkamak için karotis kateterinden perfüze edilir. Kalp, aort, pulmoner arter, vena kava ve pulmoner venlerin bölünmesiyle sağlanır ve implantasyon için UW solüsyonunda saklanır. Alıcı kurulumunda, Lewis faresi izofluran ile uyuşturulur. Yavaş salınan buprenorfin, ameliyat sonrası sorunsuz bir iyileşmeyi kolaylaştırmak için deri altına uygulanır. Orta hat abdominal insizyonu ile infrarenal aort ve inferior vena kava izole edilir ve atravmatik vasküler klemp ile klemplenir. Donör kalp aortu ve pulmoner arter, sırasıyla alıcı abdominal aort ve vena kava'ya 8-0'lık bir koşu ile dikilir. Prolen. Kalbi yeniden perfüze etmek için vasküler klemp çıkarılır. Karın duvarı kapatılır ve sıçan kurtarılır. Belirli bir aralıktan sonra (24 saat ila 2 hafta), alıcı sıçan uyuşturulur, nakledilen kalp açığa çıkarılır ve bir veri toplama sistemi kullanılarak geliştirilen basıncı ve dP/dt'yi kaydetmek için apeks yoluyla sol ventriküle bir balon uçlu kateter yerleştirilir. Kalp dokusu histoloji, immünoloji veya moleküler analiz için toplanır. Başarılı bir DCD donör sıçan kalp nakli modeli, DCD donörlerinden kalp nakli sonuçlarını iyileştirmek için kardiyoprotektif yaklaşımlar üzerinde daha fazla çalışmaya izin verecektir.
Kalp naklinin (HTx) küçük bir hayvan modeli, nakledilen kalbi etkileyen patofizyolojik durumları inceleyen araştırmalar yapmak için kritik öneme sahiptir. Oto ve Lindsey tarafından tarif edildiği gibi bir fare modelindeki heterotopik HTx, araştırmacıların iskemi ve reperfüzyon1 koşullarında gözlenen patofizyolojik değişiklikleri incelemelerine izin vermiştir. Geleneksel olarak, nakil için donör kalpler, beyin ölümünden sonra bağış (DBD) donörleri olarak da bilinen atan kalp donörlerinden temin edilmiştir; bununla birlikte, HTx2'ye ihtiyaç duyan hasta sayısında orantısız bir artış olmuştu....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm hayvan deneyleri, Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından yayınlanan kurumsal yönergelere ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak gerçekleştirilmiştir (NIH Yayın No. 86-23, 2011'de revize edilmiştir)8. Aşağıdaki prosedürler Virginia Commonwealth Üniversitesi'nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Tüm prosedürler OSHA (Mesleki Güvenlik ve Sağlık İdaresi) yönergelerine ve önerilen steril tekniklereuygun olarak gerçekleştirildi 9. Sprague Dawley sıçanları, 23 ° C sıcaklıkta ve 12 saat karanlık / aydınlık döngülerde kontr....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Heterotopik kalp naklinden 24 saat ila 14 gün sonra, karın yeniden açılabilir ve kalp, sol ventrikül tarafından geliştirilen basıncı ölçmek için maruz bırakılabilir. Geliştirilen basıncı (DP), maksimum +dP/dt ve min -dP/dt'yi ölçmek için DCD (veya CBD) kalbinin sol ventrikülüne bir balon uçlu kateter yerleştirilir. Şekil 7 , transplantasyondan 24 saat sonra bir CBD kalbine kıyasla bir DCD kalbinin beklenen DP, + dP / dt ve -dP / dt'sinin bir örneğini göstermektedir. CBD kalpleri ile karşılaş.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Başarılı bir DCD heterotopik sıçan HTx için, deneyin titiz ve düşünceli bir kurulumunun kurulması çok önemlidir. Ayrıntılı kurulum, 1) genç sıçanların DCD donörü olarak seçilmesi, 2) tercih edilen anestezik ajan olarak izofluran kullanılması, 3) kardiyoplejinin donör kalbe etkili bir şekilde verilmesi, 4) donörün kalbinin buz gibi soğuk solüsyonda saklanması, 5) bel damarlarını sadece infrarenal aort ve vena kava'yı açığa çıkarmak için abdominal diseksiyonu sınırlamak, 6) Ameliyat sıras.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makalenin yazarlarının açıklanması gereken herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Bu çalışma, Dr. Mohammed Quader'e (1I01 BX003859) verilen bir Liyakat İnceleme Bursu ve Pauley Kalp Merkezi'nden Mohammed Quader ve Dr. Stefano Toldo'ya sağlanan fonlarla desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 5-0 naylon sütür poliamid monofilament | Aros Cerrahi | SP17A05N-45 | |
| 5-0 ipek sütür | Cerrahi Uzmanlık | SP116 | |
| 8-0 monofilament sütür | Aros Cerrahi | T06A08N14-13 | |
| Otoklav | Steris | Amsco Lab 250 | |
| BD İnsülin Şırıngası, Çıkarılabilir İğneli 1 mL Şırınga | Fisher Scientific | 14-820-28 | |
| Luer-Lok Uçlu BD Şırınga (İğnesiz) 10 mL Şırınga | Fisher Scientific | 14-823-16E | |
| Wisconsin Belzer Üniversitesi soğuk hava deposu çözümü | Bridge to Life Northbrook IL USA | Adenozin 1.34 g/L, Allopurinol 0.136 g/L, Glutatyon 0.922 g/L, Laktobiyonik Asit (Lakton olarak) 35.83 g/L, Magnezyum Sülfat heptahidrat 1.23 g/L, Pentafraksiyon 50 g/L, Potasyum Hidroksit 5,61 g/L, Potasyum Fosfat monobazik 3,4 g/L, Rafinoz pentahidrat 17,83 g/L | |
| Buprenorfin SR Lab | Zoopharm LLC | ||
| Debakey atravmatik pediatrik çok açılı vasküler klemp | Aesculap | F341T | |
| Exel International Tek Kullanımlık Safelet I.V. Kateterler 14 G | Fisher Scientific | 14-841-10 | |
| Exel Uluslararası Tek Kullanımlık Safelet I.V. Kateterler 22 G | Fisher Scientific | 14-841-20 | |
| Fogarty kateter boyutu 4F | Edwands Lifesciences | 120404F | |
| Kavisli uçlu forseps | Doğru Cerrahi ve Scientific Instruments Corporation | ASSI.228 | |
| Gaymar Isıtma pompası | Braintree Scientific, Braintree, MA, ABD | TP700 | |
| Germinator-500 | Braintree Scientific | ||
| Heparin Sodyum Enjeksiyonu, USP 1.000 U/mL | Pfizer | NDC 0069-0137-01 | |
| Düz uçlu iris mikro makası | Doğru Cerrahi ve Bilimsel Aletler Şirketi | ASSI.5253 | |
| İzofluran USP | Patterson Veteriner | NDC 14043070406 | |
| Ketamin HCl 100 mg / mL | Henry Schein | NDC 6745710810 | |
| Lidokain HCl% 2 | Aspen Veteriner | 07-892-4325 | |
| McKesson Genel Tıp 6IN Q-TIPS 2STER AHŞAP 100 / PAKET | Fisher Scientific | NC0650323 | steril Pamuk uçlu aplikatörler |
| Mikro makas, dik açılı ve kavisli uçlar | Braintree Scientific | SC-MS 154 | |
| İğne tutucu | Doğru Cerrahi & Bilimsel Aletler Corporation | ASSI. Kilit | mekanizması çıkarılmış |
| Normal Salin | Baxter İnfüzyonu | ||
| Sodyum Hidroksit/Hidroklorik Asit | çözeltiyi pH 7.4'e ayarlar | ||
| 16 haftalık, < 400 g ağırlığında | |||
| Cerrahi Mikroskop | Leika | Model M525 F40 | |
| Surgicel | Ethicon | emilebilir hemostat | |
| Sıcaklık probu Therma Su Geçirmez Tip T Yüksek Hassasiyetli Termokupl Metre | Thermoworks | THS-232-107 | |
| Yüksek hassasiyetli noktalı cımbız | Excelta | 17-456-109 | |
| Vekuronyum Bromür | Sigma-Aldrich | PHR1627 100 mg / mL | |
| Ventelite | Harvard Aparatı, Holliston, MA, ABD | ||
| Ksilazin 100 mg / mL | Pivetal Anased | NDC için PBS'de |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında