Biz invaziv ve pseudohyphal farklılaşması bir önlem olarak maya yapışma ve agar işgali için kalitatif bir testtir açıklar. Bu basit testi çeşitli mutant gibi invaziv fenotip etkileri çevresel ipuçlarını değerlendirmek ve maya farklılaşma sinyalizasyon yollar kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
S. cerevisiae yapışma ve Agar Invasion için Testi
Bu makalede
Özet
Özet
Mayalar, birçok mikroorganizma yüzeylerde kolonize doğal biyofilm, bulunur. Yapay ortamlarda, insan yapımı nesnelerin yüzeyler gibi, biyofilm, endüstriyel verimlilik azaltmak yapıları yok ve insan hayatını tehdit. Öte yandan 1-3, donanımımızı biyofilm, güç, çevreyi temiz ve sürdürülebilir enerji üretmek yardımcı olabilir. Yüzeylerde kolonize ve karmaşık biyofilm katılmak S. cerevisiae 4-8 yeteneği, çoğunlukla bu organizmada çeşitli sinyal yollar ve çevre ipuçları tarafından tetiklenen farklılaşma programları yeniden keşfedilmesini kadar göz ardı edildi. 9, 10, Ras-PKA, Kss1 MAPK ve Hog1 ozmolarite yollar gibi hızlı biyofilm birleşme S. cerevisiae yerleştirilen sinyalizasyon yolları, etkileşim ve yakınsama anlamak için bir model organizma olarak S. cerevisiae kullanarak sürekli ilgi biyoloji ve sinyal iletimi araştırma. Bu amaçla 11-20, uzun, yapıştırıcı, pseudohyphal filamentler maya hücreleri farklılaşma çeşitli çevresel değişikliklere bağlı sinyal iletim yollarının aktivasyonu için uygun bir okuma oldu. Ancak, filamentasyonu yanıltıcı basit bir fenotip sanki assaying yapar fenotipleri, karmaşık bir koleksiyon. Geçtiğimiz on yılda, birkaç testleri başarıyla, kantitatif hücre yüzey yapışmasını ölçmek için yumuşak agar ve kristal viyole boyama koloni yayılmasını ölçmek için MAT oluşumu deneyleri gibi maya araştırma, bakteriyel biyofilm çalışmaları kabul edildi. 12, 21 Ancak, agar maya yapışkan ve invaziv fenotipleri niteliksel olarak değerlendirmek için geliştirilen testlerin bazı karışıklıklar oldu. Burada, anlaşılması kolay işgali değerlendirme yapışma değerlendirmesi izole etmek için adımlar maya suşlarının yapışkan ve invaziv kalitesini değerlendirmek için basit ve güvenilir bir yöntem mevcut. Önceki çalışmalarda, 10, 16 benimsenen yöntem, sıvı ortam ve kaplama, biz o yapışma değerlendirmek için su ile yıkayın ve içine işgali değerlendirmek için agar yüzeyinden tamamen hücreleri ovmak büyük lekeler, büyüme için diferansiyel besin koşullarına büyüyen hücreler içerir. agar. Biz, agar hücre işgali etkiler agara hücreleri şeritli için ihtiyacı ortadan kaldırır. Genel olarak, agar istila haploid suşlar her zaman yapıştırıcı, henüz tüm yapışkan suşları agar işgal ettiği görülmektedir. Bizim yaklaşımımız, maya sinyal iletimi, farklılaşma, yeter algılama ve biyofilm oluşumu farklılaşma adımları ve şartları dikkatli bir şekilde incelemek için diğer testleri ile birlikte kullanılabilir.
Protokol
- 200ul kültür başına hücre sayımı ayarlamak gerekli açlık koşulları (SC karşı% 0.2 glukoz ile% 2 glukoz SC, örneğin) ile sentetik medya plakalar üzerinde ilgi büyüyen kültürlerin 200ul koyun, kültürleri yoğunluğu birbirinden çok farklı ise, her damla kabaca aynı miktarda hücre vardır.
- Kültürdür plakalar üzerine damla kayıtlarını tutmak için emin olun.
- Damla kuruyana kadar plaka kapağı aralık bırakın tutun ve ya terk oda sıcaklığında veya 30 ° C.
- Mühür parafilm ve plastik ambalaj malzemesi ile (isteğe bağlı) ile plakaları ve 3-7 gün süreyle 30 ° C bırakın.
- (Dijital fotoğraf, vb. Alarak, tarama) plakalar hücrelerinin büyüme Belge....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Maya hücreleri, besin ve çevre koşullarına göre, açlık ve stres koşullarında, çeşitli besin zorlamaların filamentasyonu ve flokülasyon altında spor oluşumu da dahil olmak üzere çeşitli farklılaşma modları gösterir. S. cerevisiae ve C. albicans dahil olmak üzere çeşitli mayalar, aynı zamanda çeşitli bir dizi mikroorganizmaların oluşturduğu biyofilm içinde bulunabilir. Filamentasyonu ve invaziv davranış bazı korelasyon olmasına rağmen, bu filamentasyonu işgali ve kolonizasyonu yüzeyler ve dokular neden olabilir tam olarak ne kadar açık değild.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Bu testte gelişmekte olan anlayışlar Lisa Schneper ve Katrin Duevel teşekkür etmek istiyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Moticam 350 | Kamera | Motic | üretimi durduruldu (yeni model: Moticam 352) | Mikroskop okülerlerine takılan ve PC veya Mac için dijital görüntüler yakalayan nispeten ucuz bir kameradır. |
Kaynaklar
- Costerton, J. W., Lewandowski, Z., Caldwell, D. E., Korber, D. R., Lappin-Scott, H. M. Microbial biofilms. Annu Rev Microbiol. 49, 711-745 (1995).
- Elortondo, F. J. P., Salmeron, J., Albisu, M., Casas, C. Biofilms in the food industry. Food Science and Technology International. 5, 25-30 (1999).
- K....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
