El presente protocolo describe una nueva técnica de banda aórtica en ratones para inducir hipertrofia cardíaca por sobrecarga de presión. Para el enfajado, se utiliza un anillo de goma con un diámetro interior fijo. Esta nueva técnica promete menos varianza y datos más reproducibles para futuros experimentos.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Banda aórtica con junta tórica versus constricción aórtica transversal tradicional para el modelado de la hipertrofia cardíaca inducida por sobrecarga de presión
En este artículo
Resumen
Resumen
La banda aórtica en ratones es uno de los modelos experimentales más utilizados para la hipertrofia cardíaca inducida por sobrecarga de presión cardíaca y la inducción de insuficiencia cardíaca. La técnica utilizada anteriormente se basa en una sutura roscada alrededor del arco aórtico atada sobre una aguja roma de 27 G para crear estenosis. Este método depende de que el cirujano apriete manualmente el hilo y, por lo tanto, conduce a una alta variación en el tamaño del diámetro. Un método recientemente refinado descrito por Melleby et al. promete menos varianza y más reproducibilidad después de la cirugía. La nueva técnica, la banda aórtica de junta tórica (ORAB), utiliza un anillo de goma antideslizante en lugar de una sutura con un hilo, lo que resulta en una variación reducida en la sobrecarga de presión y fenotipos reproducibles de hipertrofia cardíaca. Durante la cirugía, la junta tórica se coloca entre las arterias braquiocefálica y carótida izquierda. La constricción exitosa se confirma mediante ecocardiografía. Después de 1 día, la colocación correcta del anillo da como resultado un aumento de la velocidad de flujo en la aorta transversal sobre la estenosis inducida por la junta tórica. Después de 2 semanas, la función cardíaca deteriorada se demuestra por la disminución de la fracción de eyección y el aumento del grosor de la pared. Es importante destacar que, además de una menor varianza en el tamaño del diámetro, el ORAB se asocia con tasas de mortalidad intra y postoperatoria más bajas en comparación con la constricción aórtica transversa (TAC). Por lo tanto, ORAB representa un método superior a la cirugía TAC comúnmente utilizada, lo que resulta en resultados más reproducibles y una posible reducción en el número de animales necesarios.
Introducción
Mientras que la hipertrofia cardíaca fisiológica se puede observar durante el desarrollo, el ejercicio y el embarazo, la hipertrofia cardíaca patológica responde a condiciones de estrés hemodinámico como hipertensión arterial, enfermedad cardíaca valvular o mutaciones genéticas. Inicialmente, el corazón sufre una remodelación caracterizada por aumento del tamaño de los cardiomiocitos y engrosamiento de las paredes ventriculares para mantener la función cardíaca 1,2. Por otro lado, la remodelación cardíaca patológica se asocia con un mayor riesgo de arritmia, muerte súbita y alta mortalidad. Finalmente, con el ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Los experimentos con animales se llevaron a cabo bajo los principios del comité regional (Ministerium für Energiewende, Landwirtschaft, Umwelt, Natur und Digitalisierung des Landes Schleswig-Holstein, número de permiso: V242-21249/2020 [38-4/20]). Los ratones utilizados para el presente estudio se obtuvieron de una fuente comercial (ver Tabla de materiales). Los animales se mantuvieron en condiciones estándar con un ciclo de 12 h de luz, 12 h de noche; Se ofrecía agua y comida ad libitum.
1. Cuidado de los animales
- Aloje a los ratones en jaulas especializadas con ropa de cama, material de....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
En general, la banda aórtica imita la estenosis aórtica humana e induce hipertrofia cardíaca en ratones. Un procedimiento exitoso se caracteriza por la remodelación del tejido cardíaco reflejada por hipertrofia cardíaca y función cardíaca reducida 5,6.
Directamente 1 día después de la operación, el efecto de la constricción de la junta tórica de la aorta transversa puede determinarse in vivo por ecocardiografía
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
La banda aórtica basada en hilo / sutura se ha utilizado durante muchos años para inducir hipertrofia cardíaca por sobrecarga de presión en ratones. Es un método establecido para investigar los mecanismos patológicos de la remodelación cardíaca y la progresión de la enfermedad in vivo. Las limitaciones son la varianza relativamente alta en el grado de estenosis y, en consecuencia, la remodelación. La técnica ORAB recientemente introducida descrita por primera vez por Melleby et al.10 opt.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF) a L.L., N.F., y O.J.M. (IVOLADMT-HF; FKZ 01KC2006A).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 1 x Fijadores largos, 6 cm | 18200-01 | ||
| 2 x Retractores romos, 5 mm de ancho | 18200-11 | ||
| 2 x Fijadores cortos, 3 cm | 18200-02 | ||
| 2 x pinzas angulares de punta fina de 45 grados; | FST (herramientas de ciencia fina) | 11160-10 | |
| 3 x Retractores romos, 2,5 mm de ancho | 18200-10 | ||
| 3 x Cables retractores | 18200-05 | ||
| Sutura reabsorbible 4-0 (Vicryl) | ETHICON | SABBKLT0 | Se utiliza para suturar la piel |
| Sutura 6-0 (Prolene), tamaño de la aguja:13 mm | ETHICON | JDP879 | Se utiliza para suturar el músculo pectoral |
| 8-0 sutura (Prolene), tamaño de la aguja: 6,5 mm | ETHICON | RHBECH | Se utiliza para sujetar el anillo |
| Caja de anestesia, pequeño | aparato Havard | 50-0108 | |
| Ratones C57BL/6N | Charles River | ||
| Fluosorber Bote de filtro de carbón activado | Aparato Havard | 34-0415 | Se utiliza para inducir y mantener la anestesia |
| Laringsopcope hecho a mano | Las intubaciones ayudan a | ||
| Harvard Aparato Vaporizador anestésico | Aparato Havard | Se utiliza para inducir y mantener la anestesia | |
| Almohadilla térmica + sonda rectal (LSI Letica Scientific Instruments:Unidad de control de temperatura HB 101/2 ) | Aparato Panlab/ Havard | Se utiliza para controlar y mantener la temperatura corporal | |
| cánula intravenosa azul de calibre 22 (Vasofix Braunü le 0.9 x 25 mm) | B/Braunsharing Expertise | 4268091B | intubación |
| isoflurano | Baxter | Anestesia Kodan | |
| (solución de betadine); | lke | 20003960-A | Desinfección |
| ayuda para la ligadura | FST (fine sience tools) | 18062-12 | Se utiliza para realizar la vinculación con juntas tóricas |
| Iluminación de microscopios: Schott VisiLED Set MC1500/S80-55 (+ controlador) | SCHOTT | Ligth | |
| Microscope cámara (Leica IC80 HD) | Leica | Se utiliza para el campo operativo de visualización | |
| Sistemas de anestesia completa MiniVac para pequeños roedores | , aparato de Havard | 75-0233 | Se utiliza para inducir y mantener la anestesia |
| Ventilador de ratón MiniVent tipo 845 | Havard Apparatus | 73-0044 | Utilizado para ventilación durante cirugía |
| Portaagujas | FST (herramientas de ciencia fina) | TE-10804 | |
| Junta tórica, goma antideslizante (0,0018 mm x 0,020 mm) | Apple Rubber Products | Liagción del arco aórtico | |
| Tijeras | FST (fine sience tools) | 14040-09 | Se utiliza para cortar la piel y los hilos |
| Sistema de Retracción para Animales Pequeños (Kit para Animales de hasta 200 g) | FST (herramientas de ciencia fina) | 18200-20 | |
| Placa Base Pequeña, 20 x 30 cm | 18200-03 | ||
| Mesa integrada con almohadilla térmica + sonda rectal + ECG y trípode transductor | Sistema de imágenes | Ecocardiografía | |
| Temgesic (Buprenorfina) | Indivior UK Limited | 997.00.00 | Premedicación para el dolor |
| grifo de parada de tres vías (azul) | |||
| Tramal (Tamadol) | Grü nental | Dolor post-medicación | |
| sonda de transductor MS400 (Visual Sonics) | de imágenes FujiFilm Visual Sonics | Ecocardiografía | |
| Sistema de ultrasonido con paquete de cardiología | de imágenes FujiFilm Visual Sonics | Ecocardiografía | |
| Tijeras de resorte Vannas - 2,5 mm Cutting Edge | FST (herramientas de ciencia fina) | 15000-08 | Se utiliza para cortar el músculo intercostal del pecho |
| ungüento veterinario | Bepanten | Se utiliza para prevenir la sequedad de los ojos |
Referencias
- Frey, N., Olson, E. N. Cardiac hypertrophy: The good, the bad, and the ugly. Annual Review of Physiology. 65, 45-79 (2003).
- Bui, A. L., Horwich, T. B., Fonarow, G. C. Epidemiology and risk profile of heart failure. Nature Reviews Cardiology. 8 (1), 30-41 ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
