Протокол показывает повторные заборы спинномозговой жидкости и крови у крыс с эпилепсией, проводимые параллельно с непрерывным видео-электроэнцефалограммой (ЭЭГ). Они играют важную роль в изучении возможных связей между изменениями в различных молекулах жидкостей организма и судорожной активностью.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Забор спинномозговой жидкости и крови из боковой хвостовой вены у крыс во время регистрации ЭЭГ
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Поскольку состав жидкостей организма отражает многие физиологические и патологические процессы, образцы биологической жидкости обычно получают во многих экспериментальных контекстах для измерения молекул, представляющих интерес, таких как гормоны, факторы роста, белки или небольшие некодирующие РНК. Конкретным примером является отбор проб биологических жидкостей при исследовании биомаркеров эпилепсии. В этих исследованиях желательно сравнивать уровни молекул в спинномозговой жидкости (СМЖ) и в плазме, проводя параллельный забор ликвора и плазмы и учитывая временное расстояние забора проб от судорог и до судорог. Комбинированный забор ликвора и плазмы крови в сочетании с видео-ЭЭГ-мониторингом у животных с эпилепсией является перспективным подходом для валидации предполагаемых диагностических и прогностических биомаркеров. Описана процедура комбинированного забора ликвора из большой цистерны и забора крови из боковой хвостовой вены у крыс с эпилепсией, находящихся под непрерывным видео-ЭЭГ-контролем. Эта процедура имеет значительные преимущества по сравнению с другими широко используемыми методами. Это позволяет быстро взять пробы с минимальной болью или инвазивностью, а также сократить время анестезии. Кроме того, он может быть использован для получения образцов спинномозговой жидкости и плазмы крови крыс, зарегистрированных как на привязной, так и на телеметрической ЭЭГ, и может быть использован многократно в течение нескольких дней эксперимента. Ожидается, что за счет минимизации стресса, связанного с отбором проб за счет сокращения анестезии изофлураном, меры будут более точно отражать истинные уровни исследуемых молекул в биожидкостях. В зависимости от наличия соответствующего аналитического анализа, этот метод может быть использован для измерения уровней нескольких различных молекул при одновременной регистрации ЭЭГ.
Введение
Забор спинномозговой жидкости (ликвора) и крови важен для выявления и валидации биомаркеров эпилепсии как в доклинических, так и в клинических исследованиях 1,2. В настоящее время диагностика эпилепсии и большинство исследований биомаркеров эпилепсии сосредоточены на ЭЭГ и нейровизуализации 3,4,5. Однако эти подходы имеют ряд ограничений. Помимо рутинных измерений кожи головы, во многих случаях ЭЭГ требует инвазивных методов, таких как глубинные электроды6. Методы визуализации головного мозга и....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все экспериментальные процедуры были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию Университета Феррары и Министерством здравоохранения Италии (разрешение: D.M. 603/2022-PR) в соответствии с руководящими принципами, изложенными в Директиве Совета Европейских сообществ от 24 ноября 1986 года (86/609/EEC) о защите животных, используемых в экспериментальных и других научных целях. Этот протокол специально адаптирован для дальнейшего количественного анализа полимеразной цепной реакции (кПЦР) малых некодирующих рибонуклеиновых кислот (sncRNAs) в ликворе и плазме крыс, полученных под контролем ЭЭГ, у животных с эпилепсией. По желанию, пожалуйста, посмотрите со....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Результаты различных процедур ликвора и забора крови, выполненных у 9 контрольных и 18 крыс с хроническим эпилепсией, которым были имплантированы электроды через 1 месяц после СЭ, представлены с точки зрения успешности. После имплантации все крысы проходили видео-ЭЭГ-мониторинг в течение 1 месяца, в течение которого ликвор плюс кровь отбирались 5 раз каждые 3 дня в течение двух последних недель эксперимента (т.е. на 52, 55, 58, 61 и 64 сутки после СЭ; dpSE). Для сравнения частоты успешности сбора ликвора у крыс с двойной.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Настоящая работа иллюстрирует простую в освоении технику сбора ликвора и крови у крыс, которая может быть полезна не только для исследований на моделях эпилепсии, но и других неврологических состояний или заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, Паркинсона или рассеянный склероз. В исследованиях эпилепсии обе процедуры отбора проб в сочетании с видео-ЭЭГ являются идеальными, когда проводится корреляция между уровнями различных растворимых молекул и судорожной активностью. Именно по этой причине использовалась непрерыв.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Данное исследование было поддержано грантом Рабочей программы Европейского Союза «Горизонт 2020» (название H2020-FETOPEN-2018-2020) в рамках грантового соглашения 964712 (PRIME; М. Симонато).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Набор для сбора крови BD Vacutainer Safety-Lok | BD Italy SpA, Милан, Италия | 367246 | материал |
| Пробирки для сбора крови (Microtainer K2E) | BD Italy SpA, Милан, Италия | 365975 | материал |
| Butterfly Winged Infusion Set 23G x 3/4'' 0,6 x 19 мм | Nipro, Осака, Япония | PSY-23-ET-ICU | Материал |
| Центрифуга охлаждаемая ALC PK 130R | DJB Labcare Ltd, Бакингемшир, Англия | 112000033 | Материал |
| Хлопковый шовный материал 3-0 | Ethicon, Johnson & Johnson Surgical Technologies, Раритан, Нью-Джерси, США | 7343H | Материал |
| Диазепам 5 мг/2мл, Solupam | Dechra Veterinary Products, Турин, Италия | 105183014 (AIC) | Решение |
| Цифровой видеорегистратор 8-канальный медиарегистратор системы телеметрии ЭЭГ настроен | Data Sciences International (DSI), Сент-Пол, Миннесота, США | PNM-VIDEO-008 | Оборудование |
| Установлена цифровая система видеонаблюдения на привязной ЭЭГ | EZVIZ Network, Ханчжоу, Сина | EZVIZ (V5.3.2) | |
| Оборудование Дезинфицирующее средство на основе стабилизированных пероксидов и четвертичной аммониевой активности | Laboratoire Garcin-Bactinyl, Франция | LB | 920111 Solution |
| Фиктивная направляющая канюля 8 мм | Agn Tho's, Lindigö, Швеция | CXD-8 | Материал |
| Электрод 3-канальный двухкрученый | Invivo1, Plastic One, Роанок, Вирджиния, США | MS333/3-B/SPC | Материал |
| Держатель электродов для стереохирургии | Agn Tho's, Lindigö, Швеция | 1776-P1 | Оборудование |
| Eppendorf BioSpectrometer basic | Eppendorf AG, Гамбург, Германия | 6137 | Оборудование |
Eppendorf PCR Tubes 0,2 мл | Eppendorf Srl, Милан, Италия | 30124332 | Материал |
| Eppendorf μ Cuvette G1.0 | Eppendorf AG, Гамбург, Германия | 6138 | Оборудование |
| Игла для кормления гибкая 17G для крыс | Agn Tho's, Lindigö Швеция | 7206 | Материал |
| Grass Technology аппарат | Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Плезантон, Калифорния, США | M665G08 | Оборудование (усилитель AS40, головной ящик, соединительные кабели, телефактор модели RPSA S40) |
| Изофлуран 100%, IsoFlo | Zoetis, Рим, Италия | 103287025 (AIC) | Раствор |
| кетамина (Imalgene) | Merial, Тулуза, Франция | 221300288 ( AIC) | Раствор |
| хлорида лития | Sigma-Aldrich, Милан, Италия | L9650 | Материал |
| Микроинъекционная канюля 31G 9 мм | Agn Tho's, Lindigö Швеция | CXMI-9 | Материал |
| MP150 модульный сбор данных и Система анализа | Biopac, Голета, Калифорния, США | MP150WSW Оборудование | |
| Офтальмологическая ветеринарная мазь, Hylo night | Ursapharm, Милан, Италия | 941791927 (AIC) | Материал |
| пилокарпина гидрохлорид | Sigma-Aldrich, Милан, | Италия P6503 | Материал |
| Трубка из ПТФЭ с соединением | Agn Tho's, Lindigö, Швеция | JT-10 | Материал |
| физиологического раствора | 0,9% NaCl, pH адаптирован к 7.0 | Раствор | |
| Скополамина гидробромид тригидрат | Sigma-Aldrich, Милан, Италия | S2250 | Материал |
| Скополамина метилнитрат | Sigma-Aldrich, Милан, | Италия S1876 | Материал |
| Серебро сульфадиазин 1% крем | Sofar, Trezzano Rosa, Милан, Италия | 025561010 (AIC) | Материал |
| Simplex rapid dental methacryliccement | Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Суиндон, Великобритания | ACR811 | Материал |
| Стереотаксический аппарат | David Kopf Instruments, Лос-Анджелес, Калифорния, США | Модель 963 | Оборудование |
| Раствор сахарозы | 10% сахарозы в дистиллированной воде | Домашний | раствор |
| Шприц 1 мл | Биосигма, Кона, Венеция, Италия | 20,71,26,03,00,350 | Материалы |
| Телеметры | Data Sciences International (DSI), Сент-Пол, Миннесота, США | CTA-F40 | |
| Материалы Телеметрия ЭЭГ анализатор трасс | Data Sciences International (DSI), Сент-Пол, Миннесота, США | NeuroScore v3-0 | Оборудование |
| Телеметрическая система | Data Sciences International (DSI), Сент-Пол, Миннесота, США | Аппаратное обеспечение плюс программное обеспечение Ponemah core 6.51 | Оборудование |
| Ксилазина гидрохлорид | Sigma-Aldrich, Милан, Италия | X1251 | Материал |
Ссылки
- Hanin, A., et al. Cerebrospinal fluid and blood biomarkers of status epilepticus. Epilepsia. 61 (1), 6-18 (2020).
- Pitkänen, A., et al. Advances in the development of biomarkers for epilepsy. The Lancet Neurology. 15 (8), 843-856 (2016).
- Dl....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
