אנו מתארים פרוטוקול כללי המשלב ניתוח ספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוהה ועגינה מולקולרית במחקר הרפואה הסינית המסורתית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ספקטרומטריית מסות טנדם ברזולוציה גבוהה לחקר מרכיבים כימיים של Gynura bicolor DC
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
ההפרדה והניתוח של המרכיבים הכימיים הרצויים הם נושאים חשובים למחקר הבסיסי של הרפואה הסינית המסורתית (TCM). כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד Quadrupole זמן טיסה טנדם ספקטרומטריית מסה (UPLC-Q-TOF-MS/MS) הפכה בהדרגה לטכנולוגיה מובילה לזיהוי רכיבי TCM. Gynura bicolor DC. (BFH), צמח רב-שנתי ללא גזע המשמש לרפואה ולמזון בסין יש השפעות רפואיות כגון פינוי חום, הרטבת הריאה, הקלה על שיעול, פיזור קיפאון והקלה על נפיחות. פוליפנולים ופלבנואידים מכילים איזומרים רבים, המעכבים את זיהוי התרכובות המורכבות ב-BFH. מאמר זה מציג פרוטוקול שיטתי לחקר מרכיבים כימיים של BFH המבוסס על מיצוי ממס ונתונים משולבים באמצעות UPLC-Q-TOF-MS.
השיטה המתוארת כאן כוללת פרוטוקולים שיטתיים לטיפול מקדים בדגימה, כיול טרשת נפוצה, רכישת טרשת נפוצה, עיבוד נתונים וניתוח תוצאות. טיפול מקדים לדוגמה כולל איסוף, ניקוי, ייבוש, ריסוק ומיצוי. כיול טרשת נפוצה מורכב מתיקון רב-נקודתי וחד-נקודתי. עיבוד נתונים כולל ייבוא נתונים, הקמת שיטות, עיבוד ניתוח והצגת תוצאות. תוצאות מייצגות של דפוס הפיצול האופייני של חומצות פנוליות, אסטרים וגליקוזידים ב- Gynura bicolor DC. (BFH) מוצגות במאמר זה. בנוסף, בחירת ממס אורגני, מיצוי, שילוב נתונים, בחירת אנרגיית התנגשות ושיפור השיטה נדונים בפירוט. פרוטוקול אוניברסלי זה יכול להיות בשימוש נרחב לזיהוי תרכובות מורכבות ב- TCM.
מבוא
הרפואה הסינית המסורתית (TCM) מיושמת קלינית בסין כבר אלפי שנים, והיא ממלאת תפקיד חיוני בשמירה על בריאותם של הסינים1. הרכב ה-TCM מגוון ומורכב, וה-TCM דווח רבות במחקרים איכותניים רבים המתמקדים בהרכב הכימי2. ניתן לחלק באופן גס את המרכיבים הכימיים ברפואה סינית מסורתית לקטגוריות הבאות כגון אלקלואידים, חומצות אורגניות, פנילפרופנואידים, קומרין, ליגננים, קווינונים, פלבנואידים, טרפנואידים, ספונינים טריטרפנואידים, ספונינים סטרואידים, גליקוזידים לבביים וטאנינים3. בהתחשב במספר הגדול של רכיבים לא ידועים ואיזומרים בלתי ניתנים להבחנה ב- TCM, ההפרדה והניתוח של המרכיבים הכימיים הרצ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. טיפול מקדים לדוגמה
- לשטוף את כל העשב של BFH במים טהורים עד שאין פיקדונות גלויים וזיהומים. הניחו את ה-BFH הנקי בתבנית ולאחר מכן הכניסו אותו לתנור (איור 1B). מכוונים את התנור ל-50 מעלות למשך 24 שעות.
הערה: כל המפעל של BFH נאסף במחוז סצ'ואן, סין. - למחוץ BFH מיובש במגרסה רב תכליתית במהירות גבוהה. העבירו את האבקה הגסה למסננת בעלת 50 רשתות (איור 1C). אספו את האבקה הדקה בשקית אטומה, ואחסנו אותה במגדל ייבוש.
- שקלו במדויק שש דגימות BFH של 0.25 גרם כל אחת, והניחו אותן בשש צלוחיות חרוטיות. הוסיפו 30 מ"ל של ממס אורגני (50% אתנול-מים, 70% ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
זיהוי ההרכב הכימי של BFH שימש כמודל להצגת התוצאות המייצגות. כרומטוגרמות שיא בסיס של Gynura bicolor DC שחולץ ממס. מוצגים בקובץ משלים 1-משלים איור S1-S6, וזמן השמירה שנצפה (RT), שם הרכיב, הנוסחה, יחס המסה לטעינה (m/z) ושגיאת המסה מפורטים בטבלאות S1-S6. ב-ZBTK זוהו כל 35 סוגי התרכובות מפסגות מופרדות ב-UPLC-TOF-MS. כפי שמוצג בקובץ משלים 1-טבלה משלימה S1, הכימיקלים העיקריים הכילו חומצה (חומצה קווינית, חומצה DL-מאלית, חומצת לימון, חומצה O-קומרית וחומצה 3-O-trans-coumaroylquinic), גליק.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מלבד מרתח מים12, מיצוי ממס אורגני הוא שיטה נפוצה נוספת של טיפול מקדיםTCM 13. על פי העיקרון של פירוק פאזה דומה, רכיבים רבים הופקו על ידי שילוב של ממיסים אורגניים שונים14. מיצוי בסיוע אולטראסוני הוא אחת השיטות העיקריות המשמשות להשגת רכיבים ב- TCM15. מיצוי פחמן דו-חמצני סופר-קריטי טוב למיצוי סוגים מסוימים של חומרים כגון ליגנאנים16. יתר על כן, מיצוי בסיוע מיקרוגל בנוזלים יו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים כי אין אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
עבודה זו מומנה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82104881), צוות ירושה וחדשנות של טיפול TCM במחלות חיסוניות, פרויקט המחקר המדעי הרפואי של צ'ונגצ'ינג (פרויקט משותף של ועדת הבריאות של צ'ונגצ'ינג והלשכה למדע וטכנולוגיה) (2022DBXM007), פרויקט מיוחד לתמריץ ביצועים והדרכה של מכון המחקר המדעי של צ'ונגצ'ינג (cstc2022jxjl120005), פרויקט מיוחד עבור קרן המדע הפוסט-דוקטורט של צ'ונגצ'ינג (2022CQBSHTB3035), תוכנית כישרונות רפואיים בכירים של צ'ונגצ'ינג עבור יונג ובגיל העמידה, התוכנית למוסדות מדעיים של צ'ונגצ'ינג (פרויקט מחקר עצמאי מס '2022GDRC015).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| כלורופורם | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | CAS 67-66-3 | |
| אתנול | ChuandongChemical | CAS 64-17-5 | |
| אתיל אצטט | ChuandongChemical | CAS 141-78-6 | |
| כרומטוגרף | נוזלי Waters | ACQUITY Class 1 פלוס | |
| MassLynx | Waters | V4.2 | MS תוכנת |
| בקרהn-בוטיל אלכוהול | ChuandongChemical | CAS 71-36-3 | |
| אתר נפט | ChuandongChemical | CAS 8032-32-4 | |
| ספקטרומטריית מסה של זמן טיסה מרובע | ווטרס | SYNAPT XS | |
| UNIFI | ווטרס | תוכנה לניתוח נתונים |
מקורות
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
